AM-715の マ ウ ス に お け る 生 殖 試 験(第2報) 胎 仔 の 器 官 形 成 期 投 与 試 験 入 倉 勉 ・鈴 木 博 ・杉 本 勉 杏林 製 薬 株式 会社 中央 研 究所 新 規合 成 抗菌 剤 で あ る1-Ethyl-6-fluoro-1,4-dihydro-4-oxo-7-(1-piperazinyl)-3-quinolinecarboxylic acid(AM-715)の マ ウス にお け る器 官 形 成 期 投与 試 験 を行 な った。 AM-715の125,250お よび500mg/kgを 蒸留 水 に懸 濁 し,妊 娠6周 か ら15日 目 まで の10日 間,連 日経 口投 与 した。 投 与期 間 を通 じて 全 投与 群 の母 獣 へ の副 作用 はみ られ な か った 。 全 投与 群 に おい て 胎仔 に対 す るAM-715の 致 死 的 影 響 は何 らみ られ な か った 。 対 照群 お よびAM-715投 与 群 にお い て,外 表 お よび 骨格 異 常 が 散 見 され た が,こ れ らの 出現 頻 度 は対 照群 と比 較 し統 計 学 的 有意 差 は な く,か つ用 量 依 存性 の 関係 もみ られ な か った 。 F1お よびF2世 代 の新 生仔 にお ける機 能 検 査 な らび に行 動 観 察 で は異 常 は み られず,か つ そ れ らの 生殖 能力 に もAM-715の 影 響 はみ られ な か っ た。 以 上 の結 果 か ら,AM-715は マ ウ スに おい て何 ら催 奇 形作 用 は な い もの と推 測 され る。 本報で は マ ウ ス の器 官 形成 期 にAM-715を 投 与 し, 胎仔への催奇 形性,新 生 仔(F1,F2)の 発 育,機 能,骨 格, 行動および生殖 能 力 へ の影 響 の有 無 につ い て 調 べ た結 果 を報告す る。 I. 実験 材 料 お よ び方 法 1. 実験動 物 お よび飼 育 環 境 生後8週 令 のSLC:ICR系 雌 雄 マ ウ ス を静 岡 実験 動 物(協)か ら購 入 し,性 成 熟 の動 物 を得 る た め に2∼3週 間予備飼育 を行 な い,健 康 と思 われ る動物 を実 験 に供 し た。 実験 開始時 の体 重 は 雄37.6±2.4g,雌33.6±2.3g であった。 予備飼育 お よび 実験 期 間 中,動 物 は 室温24±2℃,湿 度65±10%,照 明 時間 午 前9時 ∼ 午 後5時 の環 境 条 件 の もとで,ア ル ミ製 ケー ジ に10匹 ず つ収 容 し飼 育 した。 飼 料(CA-1,日 本 ク レア製)お よび水(水 道 水)は 自由 に摂 取 させた。 2. 投 与量 投与 量の設 定 は,予 備的 に妊 娠 動物(1群5∼7匹)を 用い,妊 娠6日 目か ら15日 目ま で の10日 間,AM-715 を500mg/kg(25%懸 濁 液)お よび1,000mg/kg(5.0% 懸濁液)連 続経 口投 与 した 結果 を参 考 に し た。 こ の予 備 実験 から,一 般 症 状観 察,体 重推 移(Fig.1)お よび 胎 仔 の観察(Table 1)に お い て と くにAM-715に よ る影 響 がみ られ なか ったの で,懸 濁可能な5.0%を 用 い,投 与 液量 を無理 を しな い で与 え ら れ る 体 重10g当 り0.1ml とし,高 用 量群 を500mg/kg,そ して,低 用 量群 を臨 床 推 定 使 用 量(12mg/kg/day)の10倍 に相 当 す る125mg/ kgに 設 定 した。 中 用 量 は 等比 的 に250mg/kgと した。 3. 交 配 方法 お よび 妊 娠 勘物 の確 認 肉 眼 的 に発 情 徴 候 が認 め られ た雌 マ ウス を同 系 の雄 マ ウ ス と1対1の 割 合 で同 居 させ,翌 朝,腟 栓 が確 認 され た 動物 を妊 娠 動 物 と し,当 日 を妊 娠0日 目 と した。 4. 投 与 方法 お よび投 与 期 間 AM-715は 滅 菌 蒸留 水 に懸 濁 し,投 与 液 量 が体 重10g 当 り0.1mlに な る よ う に用 時 調製 し,強 制経 口投 与 し た。 対 照 群 には,滅 菌 蒸 留 水 の み を同 液 量 経 口投 与 した 。 投 与 は1日1回,マ ウ ス用 金属 製 経 口 ゾ ンデ を用 い, 妊娠6日 目か ら15日 目の10日 間,連 続投 与 した。 5. 観 察項 目 1)母 獣 の観 察 妊 娠 期 間 中 の一 般 症 状 の観 察 お よび 体 重測 定 を行 な っ た。 ま た,投 与 期 間 中は5匹 をえ らび 摂餌 量,摂 水 量 の 測 定 を行 な った。 自然 分 娩 させ た母 獣 につ い て は,分 娩 後4週 目 に解剖 し,着 床 痕 数 を調 べ た。 2)胎 仔 の観 察 妊 娠18日 目 に各群21匹 の母 獣 を解 剖 し,着 床 数,死 亡 胎 仔 数,吸 収胚 数,生 存 胎仔 数 お よび 性 別 を調 べ,生 存 胎 仔 につ い て は,体 重 お よび 胎盤 重 量 を測 定 した。 ま た 対 照 群 を含 め全 例 の胎 仔 に つ き外 表 奇 形 の 有 無 を検 査 し た。 そ の 後,各 群 の1/3の 胎仔 をBouin液 で固 定 し,安 全 カ ミ ソ リで切 断 して 頭 部 お よ び 腹 部 はWILSONの 方 法1),胸 部 はBARROWの 方 法2)に 従 っ て内 臓 異 常 の 有 無 につ い て検 索 した 。残 りの胎 仔 は ア ル コー ル固 定 後,
Fig. 1 Body weight changes of pregnant mice treated orally with AM- 715
Day of sestation DAWSONの 方 法3)に 従 って ア リ ザ リ ン レ ッ ドS染 色 透 明骨 格 標本 を作 製 し,骨 格 奇 形 お よ び変 異 につ き検 索 を 行 な っ た。 3)新 生仔 の観 察 各 群10匹 の妊 娠 母 獣 を 自然分 娩 させ,妊 娠 期 間,出 生 仔 数,性 別 お よび 外 表異 常 の有 無 を調 べ,各 群 の新 生仔 は4週 令 時 ま で全 例 生存 させ,そ の 間体 重 を測 定 し,耳 介 開展,切 歯 萠 出 お よび眼 瞼 開 裂 な ど につ き調 べた 。 各 群 の新 生 仔(F1)は,4週 令 で離 乳 し,カ ゴ登 り, 平 衡 感 覚,PREYER反 射,ト ンボ返 り,角 膜 反射,耳 介 反 射 お よびHAFFNER疼 痛 反射 の各 機能 検 査 を 行 な った。 また 精巣 下 降 お よび腟 開 口 につ い て調 べ た。 各群 の 同腹 仔 は,無 作 為 に約3等 分 し,主 要 器 官 の 重 量 測 定,骨 格 観 察,行 動 観 察 な らび に生殖 能 力 の検 索 を 行 な っ た。 器 官 重 量 の 測 定 は4週 令仔 の脳,胸 腺,心 臓,肺,肝 臓,脾 臓,膵 臓,腎 臓 お よび生 殖 器 につ い て行 な った。 骨格 検 査(4週 令 仔)は 常 法 に従 って ア リザ リン レッ ドS 染色 透 明 標 本 を作 製 し行 な った。行 動 観 察 は8週 令 仔 に つ き,Open field test,LASHLEY
III type mazeの 方 法 を用 い て行 な った。 生 殖 能 力 の検
索 は生 後10∼11週 目に兄 妹 交 配 を避 けて 同 一群 内 の 雌 雄 で行 な っ た。 交 尾 の確 認 され た母 獣(F1)は 妊娠14日 目に約2/3を 解 剖 し,黄 体 数,着 床 数,初 期 お よび後期 死 胚 数 を調 べ,残 りの 約1/3は 自然 分 娩 させ,妊 娠 期間, 出生 仔 数,性 別 お よび 外表 異 常 に つ き調べ た。 新 生仔 (F2)は10週 令 時 ま で体 重 を測 定 し,耳 介 開展,切 歯萠 出,眼 瞼 開裂 を調 べ,機 能 検 査 を行 ない,精 巣 下 降お よ び 腟 開 口に つい て も調 べ た。 F2新 生 仔 に つい て も,F1新 生仔 と同様 な方法 に よ り, 主 要器 官 の重 量 測 定,骨 格 検 査,行 動 観察 な らび に生殖 能 力 の検 索 を行 な った 。 6. デ ー タ処理 法 外 表 お よ び骨 格 異 常 の 出現 につ い て は,WILCOXONの 順 位 和 検 定4)(p<0.05)で,そ の他 の反 応値 は χ2検定 (p<0.05)で 処 理 し,実 数 値 は平均 値 土標 準偏 差 で表 わ し,F検 定,STUDENTのt検 定 を用 い 対 照群 と比較 した。 II. 実 験 結果 1. 母 獣 の観 察 妊 娠 期 間 中 の体 重 推移 を示 し た の がFig.2で,対 照 群 に比 べ 増加 抑 制 の 傾 向 が み られ た が,用 量 依存性 の関 係 は認 め られ な か った 。 摂 餌 量 お よび 摂 水 量 はFig.3に 示 す と お りで,対 照
Table 1 Preliminaly test of AM- 715
1): Mean•} SD
*: Significant difference from control (p< 0.05)
群に比 べ500mg/kg群 の 摂餌 量 に低 下傾 向 が認 め られ た。 一般症 状 にはAM-715の 中 毒様きご効 果 は み ら れ ず,ま た各投与群 に死 亡個 体 は1例 も認 め られ な か った。 2. 胎 仔 の観察 胎仔 の観 察 に関 す る結 果 を ま とめた の がTable 2で あ る。着床数,死 亡胎 仔 数,吸 収 胚 数,生 存 胎 仔 数 お よび 性比には,対 照群 との問 に 有意 な差 は認 め られ な か っ た。 AM-715投 与群 の雄 の 胎仔 重 量 ,125mg/kgお よび250 mg/kg群 の雄 胎 仔 の 胎盤 重 量 が 対照 群 と比 較 し有 意 な 差を示 した が,い ず れ の 重 量変 動 に も,用 量 依 存性 の 関 係は認 められ なか っ た。 外 表 奇 形 として,対 照 群 に 口蓋 裂1例,125mg/kg群 に外脳 症 と臍 ヘ ル ニ ア の合 併 仔1例,250mg/kg群 に 曲 尾1例,500mg/kg群 に 口蓋 裂1例 が認 め られ た が,出 現頻 度 に は,有 意 な差 は認 め られ な か った 。 内臓 異 常 を も った胎 仔 は,対 照群 を含 め各群 に1例 も 認 め られ なか った。 骨 格 検 査 の結 果 はTable 3に 示 す と お りで骨 格 奇 形 と して,対 照群 に胸 椎 弓 の癒合 と肋 骨 の 癒 合 の合 併 仔1例,500mg/kg群 に波 状 肋 骨1例 が認 め られ た。 また 骨 格 変 異 と して,頸 椎 弓 の分 離 お よ び分 枝, 胸 骨核 の化 骨 遅 延,分 離 お よび 不 相称,副 胸 骨核,腰 肋 な ど散 見 され た が,対 照 群 との 問 に有 意 な差 は 認 め られ
Fig. 2 Body weight changes of pregnant mice treated orally with AM- 715 Day of gestation なか った。 しか し,250mg/kg群 の14肋 骨 な ら び に500 mg/kg群 の仙 尾椎 の化 骨 数 に つ いて は有 意 な 差 を 認 め た。 3. 新 生仔 の観 察 1)F1新 生仔 母 獣 お よびF1新 生 仔 に関 す る検 査 結 果 を示 し た の が Table 4で,妊 娠 期 間,着 床 痕数,出 生 率,離 乳 率 な ど に は,対 照群 との間 に有 意 な差 は 認 め られ な か っ た。 外 表 奇 形 は対 照 群 に短 尾 と 曲 尾 の 合 併 仔1例,250 mg/kg群 に曲 尾1例 が認 め られ た。 生 後4週 目ま で の体 重推 移 をみ る と,対 照群 に比 べ 体 重増 加 が劣 る こ とはな く,125お よび500mg/kg群 では, 逆 に対 照 群 よ り体 重 増 加 傾 向 が認 め られ た。 発 育 分 化 お よび 機 能 検 査 の結 果 をTable 5に 示 した。 耳介 開展,切 歯 萠 出 お よび 眼瞼 開 裂 の 日令 には,対 照 群 との 間 に有 意 な差 はな く,ま た精 巣 下 降 お よび腟 開 口 に おい て も,対 照群 との 間 に有 意 な差 は認 め られ な か っ た。 機 能 検 査 で は対 照 群 を含 め各 群 に異 常 が認 め られ た個 体 は1例 もな か った。 4週 令 仔 の主 要器 官 重 量 をTable 6に 示 した。 雄 で は 125mg/kg群 の 生殖 器 官,250お よび500mg/kg群 の脾 臓 に有意 な重 量 増加 が,雌 で は125mg/kg群 の 腎臓 に有 意 な 重 量 増 加 が 認 め られ た が,い ず れ の 重 量 増 加 に も用 量 依 存 性 の 関 係 は な か っ た 。 4週 令 仔 の 骨 格 を 検 索 し た 結 果 をTable 7に 示 し た。 対 照 群 を 含 め 各 群 に14肋 骨,副 胸 骨,肋 軟 骨 の癒 合 が み ら れ た が,対 照 群 と の 問 に 有 意 な 差 は 認 め られ な か っ た。 尾 骨 数 は500mg/kg群 で の み 対 照 群 と の 間 に 有 意 な差 を 認 め た 。 生 後5週 目 か ら10週 目 ま で の 体 重 推 移 は,Table 8に 示 す と お りで,雌 の500mg/kg群 の5週 令 仔 で 有 意 な 減 少 が み られ た が,そ の 後 の 体 重 増 加 は,対 照 群 と の 間 に 有 意 な 差 は 認 め られ な か っ た 。 雄 で は500mg/kg群 で 8週 令 仔 を 除 き 有 意 な 体 重 増 加 が み ら れ た 。 し か し,10 週 令 ま で の 体 重 増 加 は 対 照 群 の11.8gに 対 し,500mg/ kg群 で は12.6gと 大 き な 差 で は な か っ た 。
行 動 観 察 を 行 な っ た 結 果 は,Table 9(OPen field)お よ びTable 10(LASHLEY III type maze)に 示 す とお りで, Open fieldお よ びLASKLEY III type mazeの い ず れ の 検 査 に お い て も,対 照 群 と の 間 に 著 変 は み ら れ な か っ た。 Open fieldで 雄 の125mg/kg群 のRearing,Defecation, Grooming,雌 の250mg/kg群 のDefecationに 有 意 な差
が み られ た が,い ず れ の 値 に も,用 意 依 存 性 の 関 係 は認 め られ な か っ た 。
Fig. 3 Food and water consumption changes of pregnant mice treated orally with AM- 715 Food consumption Day of gestation Water consumption Day of gestation 生殖能 力 に関す る検査 結 果 はTable 11に 示 し た。 交 配期間,交 尾率,妊 娠率,黄 体 数,初 期 お よび 後期 死 胚 数には,対 照群 との 問 に著 差 は認 め られ な か った。 2)F2新 生 仔 対照 群 を含 め各群5匹 ず つのF1母 獣 を 自然 に分 娩 さ せ た結 果 はTable 12に 示 す よ うに,妊 娠 期 間,新 生 仔
Table 2 Effects of AM- 715 on the mouse fetuses
1): Mean•} SD
2): No. of malformation/•@ No. of examined fetus *: Significant difference from control (p< 0.0.5)
Table 3 Effects of AM- 715 on the skeleton of mouse fetuses
1): Mean•} SD
Each value of parentheses was expressed as percentage. *:
Significant difference from control (p< 0.05)
Table 4 Effects of AM- 715 on delivery and postnatal development of F1 mice
1): Mean•} SD
Table 6 Effects of AM- 715 on organ weights of F1 mice at 4- week old
1): Mean•}SD
Organ weights were expressed as•~10 mg unit *: Significant difference from control (p<0.05)
Table 7 Effects, of AM- 715 on skeleton of F1 mice at 4- week old
1): Mean•}SD
Each value of parentheses was expressed as percentage
*:
Significant difference from control (p< 0.05)
数,性 比,着 床 痕数,出 生率,離 乳 率 な どに は,対 照 群 との間に有 意 な差 は な く,ま た生 後4週 目ま で の体 重 増 加が対照群 よ り劣 る こ と も な か っ た。125お よ び250 mg/kg群 では む しろ対 照 群 よ り体 重 は 増 加 し た 。 外 表 奇形 は対照群 を含 め各 群 に1例 も認 め られ な か った 。 発育分化 お よび機 能 検査 の結 果 をTable 13に 示 し た が,耳 介 開展,切 歯 萠 出,眼 瞼 開 裂 の 日令 に は対 照群 と の間に有意 な差 は認 め られ ず,各 機 能検 査 で も,対 照群 を含 め各群 に異 常 が認 め られ た個 体 は1例 も なか った。 また精巣下 降率 お よび膣 開 口 日数 に おい て も,対 照群 と の間に著差 は認 め られ な か っ た。 主要器官重 量 はTable 14に 示 した よ うに雄 の125mg/ kg群 で体重,肺 お よび膵 臓 を除 い た 他 の 器 官 が,250 mg/kg群 の脳,肝 臓,脾 臓 が対 照群 との間 に有 意 な 重 量増加 を見 た。 雌 では,125mg/kg群 が体 重,脳,心 臓,肝 臓 お よび 腎臓 に有 意な増 加 が認 め られ た。 これ ら臓 器 の有 意 な重 量の増加 は,体 重 に依 存 して い た。 骨格検査 の結 果 はTable 15に 示 し た 。 対 照 群 を含 め 各群 に14肋骨,副 胸 骨,肋 軟 骨 の癒 合 な どが認 め られ た 抵 対照群 との間 に有 意 な 差 は み られ なか った。 尾 椎 数 は500mglkg群 で のみ 対 照群 との 間 に有 意 な 差 を認 めた 。 生後5週 目か ら10週 目の 体 重増 加 はTable 16に 示 した よ うに,125お よび250mg/kg投 与 群 に有 意 な体 重 増 加 を認 めた。
行 動 観 察 を行 な った結 果 は,Table 17(Open field)お よびTable 18(LAsHLEY III type maze)に 示 した。 Open
fieldで 雄 の250 mg/kg群 でambulationに,雌 の125
mg/kg群 でdiecationに 有 意 な差 がみ られ た が,い ず
れ の場 合 に も用 量依 存 性 の 関係 は 認 め ら れ な か った 。
LASHLEY III type mazeで は250mg/kg群 の4日 目の 測
定値 に有 意 な 時 間短 縮 がみ られ た が,用 量 依 存性 の関 係 は 認 め られ な か った。 生 殖 能 力 に関 す る検 査 結 果 はTable 19に 示 し た。 交 配期 間,交 尾 率,妊 娠 率,黄 体数,着 床 数,初 期 お よび 後 期 死 胚 数 に は,対 照 群 との 間 に有 意 な 差 は 認 め られ な か っ た。 III. 考 察 およ び結 語 AM-715の125,250お よ び500 mg/kgをICR系 マ ウ スの器 官形 成 期6∼15日 に経 口投 与 し,胎 仔 に 対 す る催 奇 形性 の有 無 を調 べ る と とも に,新 生仔(F1,F2)の 機 能,行 動 お よび 生 殖 能 力 へ の影 響 に つ い て検 索 を行 な っ た。 125お よび500mg/kg群 に おい て は 母獣 の体 重 上 昇 が 対 照 群 よ り劣 り,500mg/kg群 に は摂 餌 量 が減 少 す る傾
Table 8 Effects of AM- 715 on body weight changes of F1 mice
1): Mean•}SD
Body weights were expressed as gram unit
*: Significant difference from control (p< 0.05)
向 に あ っ たが,こ れ らの 結 果 が胎 仔 お よび新 生 仔 に 影響 をお よ ぼす よ うな こ とはな か っ た。 雄 の生 存 胎仔 重量 お よび 胎盤 重 量 に有 意 な減 少 が 時 に 見 られ たが,そ れ らの減 少 に は用 量 依 存性 は な く,ま た, い ずれ の値 も当研 究 所 で 行 な っ た正 常 な妊 娠 マ ウ ス(188 母 獣,胎 仔 数2,108)で 認 め られ る変動 値(雄 胎 仔 重 量: 1.28±0.13g,雄 胎仔 の 胎 盤重 量:90.6±18.2mg)の 範 囲 内 に あ る こ とか ら,AM-715の 影 響 とは考 え られ な か っ た。 着 床 数,吸 収 胚 数,死 亡胎 仔 数,生 存胎 仔 数,性 比 の検 索 で は 異常 と考 え られ る変 動 は認 め られ なか った。 外 表 奇 形 と して は,対 照 群 に 口蓋 裂(1例),125mg/kg 群 に外 脳 症 と隣 ヘ ル ニア の合 併(1例),250mg/kg群 に 曲尾(1例),500mg/kg群 に 口蓋 裂(1例)が 認 め られ た が,通 常健 康 な妊 娠 マ ウス で も 自然 発 生 的 に 出現 す る奇 形 の種 類 で あ る こ と,お よ び そ れ ら の出 現 頻 度1.94% か らみて,い ず れ の奇 形 も 自然 発 生 に よ る もの と判断 し 得 た。 内臓 奇 形 を も った胎 仔 は,対 照 群 を含 め1例 の出現 も な く,骨 格 検 索 の結 果 も合せ,AM-715は,胎 仔 の内臓. 骨 格 の形 成 過 程 で 好 ま しか らぬ作 用 を もたない こ とが示 唆 され た。 F1新 生仔 で,対 照 群 に短 尾 と曲尾 の合 併(1例),250 mg/kg群 に 曲尾(1例)の 奇形 仔 が認 め られ たが,F2新 生 仔 に は,対 照 群 を含 め1例 の 奇形 仔 も出 現 しな かった。 新 生仔 の器 官 重 量,骨 格,発 育分 化 お よび機 能 につき 調 べ た が,F1,F2新 生仔 のい ず れ の場 合 に も,AM-715 の影 響 と考 え られ る好 ま しか らぬ結 果 は 得 られな かつた。
行 動 観 察 に つい て は,Open fieldとLASHLEY III type
mazeの 試 験 法 を採 用 し,F1,F2新 生 仔 につ き検索 を行
Table 9 Effects of AM- 715 on open field behavior in F1 mice
1): Mean•}SD
*: Significant difference from control (p< 0.05)
Table 10 Effects of AM- 715 on learning behavior by LASHLEY III type maze in F1 mice
Table 11 Effects of AM- 715 on reproductive performance of F1 mice 1): Mean•}SD は,対 照 群 を含 め1例 も認 め られ な か った。 また,生 殖 能 力 へ の影 響 に つ い て検 索 した が,F1,F2新 生 仔 と も に,交 配期 間,交 尾 率,妊 娠率,黄 体 数,死 胚 数,着 床 数 へ のAM-715の 好 ま しか らぬ作 用 は認 め られ な か っ た。 以 上 の こ とか ら,AM-715は 胎 仔 に奇 形 を誘 発 す る よ うな作 用 を有 さず,ま た,次 世代 の発 育 分 化,機 能,行 動 お よび生 殖 能 力 に悪影 響 をお よぼす よ うな 作用 を もた ない 化合 物 で あ る こ とが示 唆 され た。
文
献
1) WILSON, J. G.: Method for administering agents and detecting malformations in experimental ani-mals. In Teratology, Principles and Techniques. J. G. WILSON& J. WARICANY, Eds., The University of Chicago Press, pp.262•`277, 1965
2) BARROW, M. V.& W. J. TAYLOR: A rapid method for detecting malformations in rat fetuses. J. Morphol. 127: 291•`306, 1969
3) DAWSON, A. B.: A note on the staining of the skeleton of cleared speciments with alizarine red S. Stain. Technol. 1: 123•`124, 1926
4) WILCOxON, F.& R. WILCOX (佐 久 間 昭 訳): 簡 便 統 計 法, 2種 類 の 処 理 間 の 差 の 有 意 性, 5∼7頁, 日本 レ ダ リー, 1975
Table 12 Effects of AM- 715 on delivery and postnatal development of F1 mice
1): Mean•}SD
Table 14 Effects of AM- 715 on organ weights of F2 mice at 4- week old
1): Meam±SD
Organ weights were expressed as•~10 mg unit *: Significant difference from control (p< 0.05)
Table 15 Effects of AM- 715 on skeleton of F2 mice at 4- week old
1): Mean•}SD
Each value of parentheses was expressed as percentage *: Significant difference from control (p< 0 .05)
Table 16 Effects of AM- 715 on body weight changes of F2 mice
1): Mean•}SD
Body weights were expressed as gram unit *: Significant difference from control (p< 0.05)
Table 17 Effects of AM- 715 on Open field behavior in F2 mice
1): Mean•}SD
* Significant difference from control (p< 0.05)
Table 18 Effects of AM- 715 on learning behavior by LASHLEY Ill type maze in F2 mice
1): Mean•}SD
Table 19 Effects of AM- 715 on reproductive performance of F2 mice
1): Mean•}SD
