リアルタイム PCR 用試薬 Luna Universal qpcr & RT-qPCR be INSPIRED drive DISCOVERY stay GENUINE

(1)

be INSPIRED

drive DISCOVERY

stay GENUINE

リアルタイム

PCR

用試薬

(2)

ピペッティング、分注ミスを防ぐ

青色のマスターミックス

• 全ての

Luna

®

_、

_LunaScript

®

_{製品には青}

色のトラッキング・ダイが含まれています。

• トラッキング・ダイは

qPCR

反応やシグ

ナルに影響を及ぼすことはありません。

• 補正用ダイが含まれており、

ROX

の添加

は不要です。

用途に最適な

_qPCR

試薬を提供

逆転写 qPCR 逆転写 & qPCR

DNA

cDNA

RNA

DNA

RNA

cDNA

1-Step

RT-qPCR

2-Step

RT-qPCR

Luna®_{Universal One-Step RT-qPCR Kit}

（製品番号E3005）

Luna®_{Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit}

LunaScript®_{RT SuperMix Kit}

Luna®_{Universal qPCR Master Mix}

（製品番号M3003）

Luna®_{Universal Probe qPCR Master Mix}

（製品番号M3004）

青色トラッキング・ダイ

１ -Step

：

ダイ・アッセイ用或いは、プローブ・アッセイ用キットを選択

２ -Step

：

LunaScript

®

_{スーパーミックスとダイ・アッセイ用或いは、}

プローブ・アッセイ用マスターミックスを選択

Luna

®

_{Universal qPCR Master Mix}

ダイ・アッセイ用の

qPCR

マスターミックス

＊

製品内容

• Luna

®

Universal qPCR Master Mix

（

2X

）

＊ SYBR®_{Green と同等のダイ（色素）が使用されています。}

製品番号

容量

希望小売価格

M3003S

200 rxns

¥12,800

M3003L

500 rxns

¥28,800

M3003X

1,000 rxns

¥49,800

M3003E

2,500 rxns

¥110,000

* 20 ul 反応系での反応回数

Luna

®

_{Universal Probe qPCR Master Mix}

プローブ・アッセイ用の

qPCR

マスターミックス

製品内容

• Luna

®

Universal Probe qPCR Master Mix

（

2X

）

製品番号

容量

希望小売価格

M3004S

200 rxns

¥11,000

M3004L

500 rxns

¥24,800

M3004X

1,000 rxns

¥42,800

M3004E

2,500 rxns

¥96,000

Luna

®

_{Universal One-Step RT-qPCR Kit}

ダイ・アッセイ用の１ステップ

RT-qPCR

キット

＊

キット内容

• Luna

®

Universal One-Step Reaction Mix

• Luna

®

_WarmStart

®

_{RT Enzyme Mix}

＊ SYBR®_{Green と同等のダイ（色素）が使用されています。}

製品番号

容量

希望小売価格

E3005S

200 rxns

¥25,900

E3005L

500 rxns

¥58,500

E3005X

1,000 rxns

¥101,500

E3005E

2,500 rxns

¥225,000

LunaScript

®

_{RT SuperMix Kit}

RT-qPCR

用に最適化された

cDNA

合成キット

15 分で

cDNA

合成ができる便利なスーパーミックス

特長

• わずか

15 分間で

cDNA

合成

•

1 液タイプの便利なスーパーミックス

•

45 〜

65 ℃で

cDNA

合成が可能

• 室温でセットアップ可能

＊ LunaScript®_{スーパーミックスには Luna}®_{逆転写酵素、Random hexamer、Oligo-dT、dNTPs、RNase Inhibitor が含まれています。}

＊ 3 kb 以上の cDNA 合成には Protoscript®_{II cDNA 合成キット（E6560S/L）を推奨します。}

製品番号

容量

希望小売価格

E3010S

25 rxns

¥17,500

E3010L

100 rxns

¥53,000

Luna

®

_{Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit}

プローブ・アッセイ用の１ステップ

RT-qPCR

キット

キット内容

• Luna

®

Universal Probe One-Step Reaction Mix

• Luna

®

_WarmStart

®

_{RT Enzyme Mix}

製品番号

容量

希望小売価格

E3006S

200 rxns

¥23,500

E3006L

500 rxns

¥52,800

E3006X

1,000 rxns

¥92,500

E3006E

2,500 rxns

¥204,000

(3)

We tested plates and plates of

reactions so you don

’

t have to

“

Dots in Boxes

”で

qPCR

の結果を正確に評価

NEB

は

qPCR

の結果を正確に評価するため、独自の“

Dots in Boxes

”法を開発しました。この方法では複数の希釈系列を

含む実験結果を

1 つのドットとしてプロットします。このドットが基準内に収まるか否かにより、その

qPCR

結果が信頼性

を評価します。さらに異なるターゲット領域や様々な条件での実験結果をそれぞれ独立したドットとしてプロットすること

もできるため、複数の

qPCR

結果を同じ図中にプロットして評価することも可能です。

方法：

1. あるターゲットに対する

qPCR

について、

5 点の希釈系列で

反応を行う（

N=3

）

（図：

Amplification plot

）。テンプレートを

入れない系（

NTC

：

Non-Template Control

）も同時に行うため、

計

18 反応（

6 点

x 3

連）を実施することとなる。

2. 増幅曲線から

Δ

C

q

を算出する。

Δ

C

q

とは、

NTC

の平均

C

q

から、

最も少ないテンプレート量（最大希釈系列）の平均

C

q

を引い

た数値である。

Δ

C

q

から感度と非特異的増幅の評価を行

う。

Δ

C

q

が小さい場合、非特異的増幅がおきたこと、あるい

は感度が満たされていないことが示唆される。

Δ

C

q

＞３を信

頼基準とする。

3. Standard curve

から増幅効率を計算する（図：

Standard

curve

、

Efficiency

）。一般的な

qPCR

と同様、

90 〜

110%

を

信頼基準とする。

4. 5

つの結果項目に基づいて、

Quality Score

を決定する。項目

および基準を以下に示す。

• Standard curve

の直線性：相関係数（

R

2

_）が

_0.98

_以上

• 再現性：各テンプレート量（希釈系列）の

N=3

の

C

q

が

1 以内

• 蛍光強度の一定性：エンドポイントの蛍光強度（

RFU

max

）

が平均値が

20 ％以内

• 増幅曲線の傾き：立ち上がりからプラトーに達するまでの

C

q

が

10 以内

• 増幅曲線の形状：

Sigmoid

となっている

Dots in Boxes

を用いた

_qPCR

の結果評価

Efficiency (%) ∆Cq -5 0 10 20 60 80 100 120 140 Fail Pass Quality score 0 1 2 3 4 5 Pass

qPCR performance dot plot Quality score metrics

1. R2_{(standard curve)}

2. Cq reproducibility

3. Fluorescence consistency (RFU_max) 4. Curve steepness 5. Curve shape RFU Cycle RFU Cycle

Pass: quality score 5

Fail: quality score 1 Quality score

Standard curve

Cq

Log Starting Quantity (pg)

Efficiency = 95.1%

R2_{= 0.999}

Log Starting Quantity (pg)

Amplification plot = Cq (NTC) – Cq (5 pg) Cycle RFU ∆Cq Triplicate standards 5 pg – 50 ng total RNA 50 ng 5 ng 0.5 ng 50 pg 5 pg NTC Standard curve（左上）から求められた増幅効率（Efficiency）をDot Plotの

Y軸に、増幅曲線（左下）から求めたΔCqをX軸に反映してプロットする。ドットが緑色点線で示された基準内にプロットされていることから、増幅効率と感度に信頼性があることが示される。さらに、上記5つの Quality Score項目の評価結果をドットの大きさと色で示す。信頼性が高い場合、緑色の大きなドットがプロットされる。この評価方法はMIQE qPCR/ RT-qPCRガイドラインに基づく

(Bustin, S.A. et al. (2009) Clin. Chem. 55, 611-22 and Trombley Hall, A. et al. (2013) PLoS One 8(9):e73845)。増幅が良好にできていない場合、緑点線の基準外にプロットされる。または小さい白色のドットが表示される。 Quality Score 項目： 1. 相関係数（R2_{、Standard curve）} 2. 再現性（Cqのばらつき） 3. 蛍光強度（RFUmax） 4. 増幅曲線の傾き 5. 増幅曲線の形状

3

(4)

Experience best-in-class performance for your qPCR & RT-qPCR

すべての

NEB

製品は、最高の性能を発揮するために厳密な品質管理をおこなっていますが、

Luna

®

_{リアルタイム}

_PCR

_試

薬も例外ではありません。特異性、感度、正確性、再現性などの

qPCR

に重要な因子を徹底して調べ上げることにより、

クラス最高の試薬を提供しています。さらに

qPCR

結果や試薬性能を正確に評価できる“

dots in box

法”を開発することに

より、厳密な比較・評価ができるようになりました。

Luna

®

_{リアルタイム}

_PCR

_{試薬はすべてのターゲットの確実かつ正確}

な測定を可能にします。

高い感度と再現性

Quantity (pg) Cq Efficiency = 96.6% R2_{= 0.999} 34 28 26 24 32 30 22 20 0.1 1 10 102 103 104 105 36 20 ng 2 ng 0.2 ng 20 pg 2 pg 0.2 pg NTC Cycle 2 4 6 8 10121416182022 24262830323436 384042 44 1 0.1 n = 8 ∆Rn Amplification plot Standard curve Input Quantity (pg) Cq Efficiency = 96.6% R2_{= 0.999} 34 28 26 24 32 30 22 20 0.1 1 10 102 ₁₀3 ₁₀4 ₁₀5 36 20 ng 2 ng 0.2 ng 20 pg 2 pg 0.2 pg NTC Cycle 2 4 6 8 10121416182022 24262830323436 384042 44 1 0.1 n = 8 ∆Rn Amplification plot Standard curve Input

0.2 pg - 20 ngの広範囲のcDNAから高い再現性で検出ができる。トータルRNAからProtoScript®_{II First Strand cDNA Synthesis Kit}_{（製品番号}_E6560S_）で_cDNA_を合成、

Luna®_{Universal qPCR Master Mix}_でヒト_GAPD_{をターゲットとした}_qPCR_{を行った（}_N=8_）。

高い特異性と安定した性能

JurkatゲノムDNAまたはcDNAをテンプレートとして、様々なコピー数、長さ、GC含量の16-18領域を対象にリアルタイムPCRを行った（10個のゲノムDNAターゲットと8個のcDNAターゲットをBio-Rad社リアルタイム機器で、9個のゲノムDNAターゲットと7個のcDNAターゲットをABI社リアルタイム機器で測定）。各社試薬の推奨条件に従い、2名が個別に実験を行った。増幅効率、感度（低インプットの検出）、非特異的増幅の有無について結果を評価した（ΔCq=最低インプットの平均Cq – 非テンプレートコントロールの平均Cq）。また一貫性と再現性、増幅曲線の信頼性をQuality Scoreとして評価に加えた。 86% NEB 67% B社 61% R社 47% Q社 47% A社 14% P社 78% NEB 47% A社 80 60 40 20 0 100 80 60 40 20 0 100 70 80 90 100 110 120 130 130 0 10 20 0 10 20 0 10 20 0 10 20 0 10 20 0 10 20 0 10 20 0 10 20 70 80 90 100 110 120 Quality Score 5 4 3 2 1 0 pass Bio-Rad real-time instrument Targets passing performance criteria (%) Efficiency (%) ABI real-time instrument ΔCq ΔCq

(5)

Experience best-in-class performance for your qPCR & RT-qPCR

すべての

NEB

製品は、最高の性能を発揮するために厳密な品質管理をおこなっていますが、

Luna

®

_{リアルタイム}

_PCR

_試

薬も例外ではありません。特異性、感度、正確性、再現性などの

qPCR

に重要な因子を徹底して調べ上げることにより、

クラス最高の試薬を提供しています。さらに

qPCR

結果や試薬性能を正確に評価できる“

dots in box

法”を開発することに

より、厳密な比較・評価ができるようになりました。

Luna

®

_{リアルタイム}

_PCR

_{試薬はすべてのターゲットの確実かつ正確}

な測定を可能にします。

Tobacco leaf – PsbB Cycle Temperature (°C) Quantity (ng) E = 97.9% R2_{= 0.997} ∆Rn Cq Derivative Rep (-Rn´) Yeast – 18S Cycle Temperature (°C) Quantity (ng) E = 90.2% R2_{= 1.000} ∆Rn Cq Derivative Rep (-Rn´) ∆Rn Cq Melt curve Standard curve Derivative Rep (-Rn´)

Mouse kidney – β-actin

Amplification plot Cycle Temperature (°C) Quantity (ng) E = 96.1% R2_{= 0.998} Tobacco leaf – PsbB Cycle Temperature (°C) Quantity (ng) E = 97.9% R2_{= 0.997} ∆Rn Cq Derivative Rep (-Rn´) Yeast – 18S Cycle Temperature (°C) Quantity (ng) E = 90.2% R2_{= 1.000} ∆Rn Cq Derivative Rep (-Rn´) ∆Rn Cq Melt curve Standard curve Derivative Rep (-Rn´)

Mouse kidney – β-actin

Amplification plot Cycle Temperature (°C) Quantity (ng) E = 96.1% R2_{= 0.998}

様々なゲノム

DNA

からターゲット遺伝子を正確に定量

0.5 pg - 50 ngの様々なゲノムDNAをテンプレートとしてABI 7500 FAST real-time機器でqPCRを行った。ゲノムDNAは一般的なカラムで精製した。マウス腎臓由来ゲノムDNAからACTB（β-actin）、タバコゲノムDNA

からpsbB（Photosystem II CP47 reaction center protein PsbB）、酵母ゲノム

DNAからRDN18（18S ribosomal RNA）が高感度かつ特異的に定量できることが示された。

プローブ法とインターカレーター・ダイ法の違い

選択のヒント

qPCR

の測定には主に

2 種類の方法が使用されています。

1 つ目はインターカレーター・ダイを使用する方法であり、

2 本

鎖

DNA

に結合することで蛍光を発します。

2 つ目は蛍光物質をラベルしたプローブを使用する方法であり、ターゲット領

域にアニールした蛍光プローブが分解されることでクエンチャー効果が解除されて蛍光を発します。

インターカレーター・ダイ法では特別なセットアップが必要ないため、コスト的メリットがあります。ただしダイは反応中の

すべての

2 本鎖

DNA

を検出するため、オフターゲットや非テンプレート増幅（

NTC

）も検出され、結果として不正確な定量

を招くことがあります。そのため

PCR

後にメルトカーブを確認して、非特異的増幅が起きていないことを確認することが

重要となります。また、ダイ法では

1 種類のターゲットの検出・定量が可能ですが、複数のターゲットの同時測定はでき

ません。

プローブ法はターゲット領域中の

DNA

配列に特異的な蛍光プローブを作成する必要があり、プライマーとは別途反応に添

加する必要があります。しかしながら、ターゲットだけを認識、

NTC

は認識しないため、より高い特異性をもった検出・定

量が可能となります。またターゲット毎に異なる蛍光プローブを作成することにより、複数ターゲットの同時検出が可能

となります。

5

(6)

1-Step RT-qPCR

に最適な

NEB

の

WarmStart

®

テクノロジー

Luna

®

_RT-qPCR

_{キットには}

_in-silico

_{でデザインした逆転写酵素が使用されています。また}

_Luna

®

_WarmStart

®

_Reverse

Transcriptase

と

_{Hot Start Taq DNA Polymerase}

には

45 ℃以下で酵素に結合するアプタマーが使用されているため、反応前

には酵素活性が抑制されます。この

WarmStart

®

_/HotStart

_{により、非特異的増幅を抑制する上、室温でのセットアップを可}

能とします。さらに

Luna

®

_WarmStart

®

_{Reverse Transcriptase}

_{は熱安定性が高く、高温でも高い酵素活性を維持します。}

高い感度と再現性

Luna®_{Universal One-Step RT-qPCR Kit}_{（製品番号}

E3005）を用いてワンステップRT-qPCRを行ったところ、0.1 pg - 1 µgの広範囲のトータルRNAから増幅・定量ができることが示された。ヒト GAPDをターゲットとしてN=8でRT-qPCRを行った。逆転写反応は55℃、10分間、サイクル条件は推奨プロトコールに従った。図中のNTCはテンプレートを入れていない区分（non-template control）を示す。 1 μg 0.1 μg 10 ng 1 ng 0.1 ng 10 pg 1 pg 0.1 pg Input NTC Cycle ∆Rn Melt curve Temperature (°C) Standard curve Derivative Reporter (-Rn´) Quantity (pg) Cq Efficiency = 100.4% R2_{= 0.998} 10 1 0.1 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 Amplification plot 32.5 25.0 22.5 20.0 17.5 30.0 27.5 15.0 12.5 10.0 0.01 0.1 1 10 102 ₁₀3 ₁₀4 ₁₀5 ₁₀6 ₁₀7 ₆₅ 1.4 1.2 1.0 0.8 0.6 0.4 0.2 0.0 70 75 80 85 90 95 n = 8

複数ターゲットの同時検出

Luna®_{Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit}_{（製品番号}_E3006_{）を用いたワンス}

テップRT-qPCRにより3種類のターゲットを同時に増幅したところ、いずれも良好に増幅・定量できることが示された。0.1 pg - 1 µgのJurkatトータル

RNAをテンプレートとした。ターゲットはヒトGAPDH、Ribosomal Protein L32g、Pl3-Kinas-Related Kinase SMG1である。それぞれ異なるコピー数であるため、異なるプライマー濃度を使用した（低コピーのSMG1は0.4 µM、高コピーのGAPDHとL32gは0.2 µM）。各ターゲットのプローブには異なる蛍光を使用した。 ∆Rn 1 μg 0.1 μg 10 ng 1 ng 0.1 ng 10 pg 1 pg Input Log Quantity (pg) Cq Amplification plot Standard curve GAPDH (FAM) L32g (HEX) SMG1 (Cy5) Cycle Cycle GAPDH (FAM) Efficiency = 99.2% R2 = 1.000 L32g (HEX) Efficiency = 101.5% R2 = 1.000 SMG1 (Cy5) Efficiency = 98.1% R2 = 1.000 NTC 1 0.1 0.01 1 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 42 Cycle 0.1 1 5 1030 100 2001000 10000 1000001000000 10000000 25 30 35 40 20 15 10 ∆Rn 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 42 1 0.01 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 42 1 0.01 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 42 Cycle ∆Rn ∆Rn

WarmStart

®

_{逆転写酵素による室温セットアップ中の}

非特異的増幅の抑制

反応溶液を調製した後、すぐにRT-qPCRを行ったものと、室温で24時間インキュベートしてからRT-qPCRを行ったもので増幅産物のメルトカーブを解析した結果、NEBのLuna®_{では非特異的増幅が完全に抑制} されていることが示された。一方、WarmStart®_{ではない逆転写酵素を} 使用しているT社製品では、24時間後に反応を行った場合に多数のピークが観察されたことから、室温下で非特異的増幅が起こったことが示された。JurkatトータルRNAをテンプレート（5系列の量）、ヒト Ribosomal protein L32をターゲットとした。 Melt curves Amplification plots Melt curves Amplification plots 50 ng 5 ng 0.5 ng 50 pg 5 pg Non-template control (NTC) NEB Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

(featuring Luna WarmStart Reverse Transcriptase)

ABI Power SYBR®_{Green 1-Step Kit}

(featuring ArrayScript™_{UP Reverse Transcriptase)}

Temperature (°C) Temperature (°C) ∆Rn Derivative Reporter (-Rn´) Cycle Cycle After Before Cycle ∆Rn Temperature (°C) Temperature (°C) Derivative Reporter (-Rn´) Cycle Before After 10 1 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 10 1 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 10 1 0.1 10 1 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 2.4 1.9 1.4 0.9 0.4 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 65 70 75 80 85 90 95 2.4 1.9 1.4 0.9 0.4 65 70 75 80 85 90 95 1.5 1.7 1.3 1.1 0.9 0.5 0.7 0.3 0.1 65 70 75 80 85 90 95 1.5 1.7 1.3 1.1 0.9 0.5 0.7 0.3 0.1 65 70 75 80 85 90 95 Melt curves Amplification plots Melt curves Amplification plots 50 ng 5 ng 0.5 ng 50 pg 5 pg Non-template control (NTC) NEB Luna Universal One-Step RT-qPCR Kit

(featuring Luna WarmStart Reverse Transcriptase) ABI Power SYBR ®

Green 1-Step Kit (featuring ArrayScript™_{UP Reverse Transcriptase)}

Temperature (°C) Temperature (°C) ∆Rn Derivative Reporter (-Rn´) Cycle Cycle After Before Cycle ∆Rn Temperature (°C) Temperature (°C) Derivative Reporter (-Rn´) Cycle Before After 10 1 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 10 1 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 10 1 0.1 10 1 0.1 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 2.4 1.9 1.4 0.9 0.4 2 6 10 14 18 22 26 30 34 38 65 70 75 80 85 90 95 2.4 1.9 1.4 0.9 0.4 65 70 75 80 85 90 95 1.5 1.7 1.3 1.1 0.9 0.5 0.7 0.3 0.1 65 70 75 80 85 90 95 1.5 1.7 1.3 1.1 0.9 0.5 0.7 0.3 0.1 65 70 75 80 85 90 95

Luna

®

_{One-Step RT-qPCR}

_{の通常反応と室温で}

24 時間インキュベート後の反応のメルトカーブ

T

社製品の通常反応と室温で

24 時間インキュベート後の反応のメルトカーブ

(7)

リアルタイム

PCR

用

cDNA

合成スーパーミックス

RT-qPCR

の反応は

1-Step

と

2-Step

に大別されます。前者はシングルチューブで逆転写反応と

qPCR

を一度に行う反応、

後者は逆転写反応（

cDNA

合成）と

qPCR

を個別に行う反応です。

2-Step RT-qPCR

には逆転写酵素と

qPCR

試薬を個別か

つ自由に選択できるため、

qPCR

効率の向上や、反応の最適化などがしやすく、特に

RNA

テンプレート量が少ない場合や

1-Step

で難しい場合に効果的です。

LunaScript

®

_{RT SuperMix Kit}

_は

_{2-Step RT-qPCR}

_{用に最適化された}

_cDNA

_{合成キットであり、わずか}

₁₅

_分で

_cDNA

_合成がで

きる便利なマスターミックス試薬です。

Luna

®

_{逆転写酵素と、ランダムヘキサマー、オリゴ}

_dT

_{プライマー、}

_dNTPs

_、

_Murine

RNA Inhibitor

が含まれているため、

RNA

サンプルを入れるだけで

cDNA

合成反応がセットアップできることに加え、青色

色素が含まれているため、ピペッティングや分注ミスを低減することができます。さらに

Luna

®

_{逆転写酵素は高い温度耐}

性があるため（

55 - 65

℃）、

RNA

の二次構造を乖離して確実に

cDNA

を合成します。

LunaScript

®

_{RT SuperMix Kit}

_{で合成した}

_cDNA

_{はそのまま}

_Luna

®

_qPCR

_{マスターミックスで}

_qPCR

_{を行うことができます。他}

の

qPCR

試薬にも互換性がありますが、正確かつ確実な

2-Step RT-qPCR

には

Luna

®

_{シリーズの併用をお薦めします。}

LunaScript® _B_社キット _T_社キット _LunaScript®

Dye-based detection Probe-based

detection ∆Cq 70 80 90 100 110 120 130 E ff ic ien cy ( % ) 0 10 20 0 10 20 0 10 20 0 10 20 95% 95% 73% 60% Targets passing performance criteria

各社cDNA合成キットでヒト・トータルRNA（100 pg - 1 µg）からcDNAを合成してqPCR解析を行ったところ、NEBのLunaScript®_{が最も高い信頼性で測定でき}

ることが示された。GC含量、コピー数、サイズが異なる8種類のターゲットを対象として2-Step RT-qPCRを行い、Dots in Boxes法で結果をプロットした。

cDNA合成は各社推奨プロトコールに従った。緑色の点線内に収まっているドットが高い増幅効率（90 - 110%）と感度（ΔCq>3）であることを意味している。ドットの色はターゲットの違いを示す。 0 10 n = 3 20 30 40 102 Cycles RFU 0 10 20 30 40 103 Cycles RFU

β-actin, human total RNA ERCC00130, ERCC Spike-In Mix 1 RNA

Efficiency: 96.3% Efficiency: 99.4% n = 3 1 µg 100 ng 10 ng 1 ng 100 pg 10 pg 1 pg NTC Input 5x109 Input copies 5x108 5x107 5x106 5x105 5x104 5x103 5x102 5x101 NTC A. B. 0 5 10 15 20 25 30 35 40 45 50 50 60 65 70 75 Time (min) LunaScript® T社キット T社キット B社キット B社キット B社キット Q社キット Q社キット T社キット 95 85 55 50 46 42 25 Temp. (°C)

わずか

15 分間で

cDNA

合成

各社キットの推奨プロトコールに基づくcDNA合成時間を示す。LunaScript®_RT SuperMixは短い時間かつ、高い温度（45 - 65℃）でcDNA合成が可能である。幅広いレンジのRNAからcDNAを合成してqPCR を行ったところ、良好に増幅・定量できることが示された。ヒト・トータルRNA（1 pg - 1 µg）をテンプレート、β-actinをターゲットとした。また50 コピーから5 x 109_コピー（_{10 fg - 10 ng}_に相当）

のERCC（External RNA Controls Consortium）RNA

スパイク・インをテンプレートに使用した。20 µl

の反応中、標準条件（25℃/2分、55℃/10分、

95℃/1分）でcDNA合成を行い、反応産物の1 µl

を使用してLuna®_{Universal qPCR Master Mix}_（製品

番号M3003）でqPCRを行った。

高い感度、直線性、再現性で

2-Step RT-qPCR

が可能

様々なターゲットの

cDNA

を確実に合成

青色のトラッキングダイが含まれています。

7

(8)

qPCR

用途に最適な試薬を選択

DNAまたは RNAを選択

1

アッセイ方法を選択

2

ゲノムDNA/ cDNA

Luna® Universal Probe qPCR Master Mix （製品番号E3004）ダイ・アッセイ Luna® Universal qPCR Master Mix （製品番号M3003） RNA Luna ® Universal One-Step RT-qPCR Kit （製品番号E3005）

Luna® Universal Probe One-Step RT-qPCR Kit

プローブ・アッセイ

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BIORAD®_{is a registered trademark of BioRad Laboratories. SYBR}®_{is a registered trademark of Thermo Fisher}

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NGS

ライブラリー定量キット（

qPCR

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