覚 機

.

1

. . ･

･

‑

▲

■

･ ･

･

･

1′

･

¹‥

･

^‥二

･

∴¹

･

･ ･

･ ･

･ ･

･

≠

･

¹

…

:

‥L

･

=

･

‑ト

‑

≠‥

･

キ‑

｣ ･

･

^‥

:

_な

･ ･

^三

戸:

■

テ

･

^き

‥

1

･

…^1ト1

■

^Jl㌧

こ1

∫ 1 ト

≧

丁

‥

j

ノ

苧^∵

:

‑ト

･

‡^き‑

ト ･■

^‥

■

･

^二ン

■ ノ

′

･

‥1

▲

^∴

･

･ ′

^‑

･

^‥Jl一

･

^且

‑

■

三‑¹

･･

三^∵･

･

〜

･ ト

^‥

‥

‥

･.

:^▼‥

‑

･

I

･

∴

. .

…

.

､ .

金沢大 学十 全 医学 会 雑誌 第

¹0 3

巻 第

¹

号

^{2 3 卜 242}

(

1 9 9 4

)

セ

ロ

ト

^ニ

^ン の 嗅 覚 機 能

^へ

^の 影 響

金 沢 大 学 医 学 部耳 鼻 咽 喉 科学 講 座 (

主

任

^:

古川 匁 教授)

壕 谷 才 明

231

嗅 球

^にお

け

る^{セ ロ} ト^ニソ

(

s e r oto ni_n

)

^の

働 き

を

調

^{べる た め}, ラッ トで

嗅 球

^に

投 射す

^{るセ ロ トニ ン}

線 維

を

神 経 毒

を

用

^いて

選

択 的

^に

障 害

^し

嗅 覚

^に

与

^{え る}

影 響

^を

実 験 行動 学 的

^,

神 経 組織 学 的

^に

検 討

し た^■

あ

ら か じ め

右 側 喚 球

を

除 去

し, ナ ラ ^マイシ ンによ る

喚 覚条 件

^{づ け}

学 習

を

行

^い正

解 率

が 1 00 % ^になった

乱 左 側

^の

内側 前 脳 束

^{にセ ロ トニ ン}

神経 毒

^で

あ

る 5∫7

‑

^{ジハイ ドロ キシト リ}

プタ ミン( 5^,7^‑d ihydr o xy t^ry p tami n e,5,7^‑D H T

)

を

注

入 した^.

注

入

後

3 日, 7 日, 1 4 日,21 日,2 8 日に ナ ラ^マイシ ンによ る

喚 覚 行 動実 験

を した

後 潅 流 固 定

^し,

嗅 球

^{はセ ロトニン} , ド^{ー パ ミ}ン ベ ^ー タ^ハイ ド^ロキシ レ ^ー ス

(

dopa min e

β ,

^hydr o xyla s e

)

, タイ^{P シ ソ}

ハイ ド^ロ キシ レ ^ー ス

(

t yr o sin e hydr o xyla s e

)

に

対 す

る

抗 体

を,

喚

^上

皮

^{ほ プロ テイ ン ジ ー ン プロ ダ クト 9･5}

(

p^{r o}tein ge n e pr odu ct9.5,P G P 9.5

)

^に

対 す

^る

抗 体

^を

用

い て

免 疫 染 色

し

観 察

し た^■ 5,7

‑

^{D H T}

注

入

群

は

嗅球

^{の セロ トニ ン}

線維

^の

障 害

^の

程 度

濫 よ り^{セ ロ}ト^{ニ ソ}

線 維

^の

糸 球 体優 位

^の

分 布

^が

消 失

^{し ていた}

完 全 障害 群

^と

糸 球 体 優位

^の

分 布

が

残

って いた 不

完 全障 害 群

^に

分 類

し た^･ そ^の

結 軋 完全 障害 群

^は

行動 実 験

^にて 5,7^‑D H T

注

入

後

2 1 ^〜2 8 日には

無 嗅 覚

^の

状 態

と な る^こと が わ か っ た･

組 織 学 的 検 索

^{で ほ}

喚 球

^の

大 き

さ は

縮 小

^し,

喚 神経 線 維 層

^の

消 失

^と

糸 球 体層

^,

顆 粒 細胞 層

^の

萎 縮

が

認

め られ た^･

喚

上

皮

は

著

明に

萎 縮

し,P G P 9^･5

陽性

の

嗅細 胞

^は

減少

ま た は

完 全

^に

消 失

し て^いた^. 不

完 全 障害 群

^では

明

ら か な

行 動 学 臥 形 態 的 異常

^を

認

め な かっ た･

以

上^の

結 果

か ら,

喚 球

^での

著 明

な^セロ ト^ニ ンの

低 下

は

著

しい

嗅 覚機 能 低 下

を

き

た

す

^こと が

明

ら かになった^･

嘆 覚 障 害

^の1 ^{つ の}

新

^{しいメ カニ} ズムを

提 起

で

き

る

も

のと

思

わ れ る^.

K

ey ^{w o r}

d

s s e r oto n

i

n ,

5

,

7

^‑

dih

y

d

ro xy t^ry p t^am

i

n e, 0

1f

acto ry

di

stu r

b

a n c e】 0

1f

a ctory

b

u

lb

, O

lf

a cto ry ep

i

t

h

e

li

u m

セロ ト^ニ ン

(

^{s e r oto nin}

)

^は,1 9 5 3

年

^{Tw a r o}g らによって

中 枢 神 経組 織

^の

中

^に

広 く 分 布

していること が

始

めて

生 化学 的

^に

証

明 さ れ た^{モ ノ ア ミン}

系

^の

神 経 伝 達物 質

^で

あ

り^{l )},

睡 眠

,

体 温 調 節

, 血

圧 調節

,

情 動

,

行動

な ど^への

関 与

^{が 示}

唆

^さ

れ

^{て い る2).}

免 疫紐 織 化 学法

^の

発 達

に

伴

ってセ ロト^ニン ^ニ ュ ^ー ロ ンの

細 胞 体

と

線 維

^の

分布

が

形態 学 的

^に

調

^べ られ,

細胞 体

^は

脳 幹

^{に のみ}

限 局

^{して いる} が, そ^の

線 維

は

大脳 皮 質

か ら

脊 髄

^に至 る まで

中 枢 神 経 系

全

域

^に

膨大

な

分 枝

^をの

ば

して いる^こと が

明

ら かになった^.

限 局

し た

部

の

細胞 体

^{よ り}

中枢 神 経 系

全

体

^に

広 く 線 維

を

投射 す

る という

形 態 的特 徴

か ら, セ ロ ト^ニ ン ^ニ ュ

ー ロ ン

系

ほ 全

体 調 節 系

と して

ニ _ュ ^ー ロ ンの

伝 達 磯 構

を

修飾

^し,

様

^々な

形

^で

活 動

^{レ ベルを}

調節 す

るの に

役

だっ ている

も

^のと

推 定

さ れ ている^{. セ ロ} ト^ニ ン

線 維

の

分 布

^ほ

領域

^によって

明 瞭

^な

動 物 種 差

^{を 示}

す

が^{3 )､5 )} ラッ ト

嗅 球

には

脳幹

^の

背 側縫 線 核

, 正

中縫 線 核

よ り で た

線 維

^が

内側 前 脳 束

を

通

り,

喚 球

^の

糸球 体 層

に

叢

を な し^て

豊 富

^に

投 射す

る^{6 ト g).}

糸 球 体層

^は

末 梢 感 覚受 容 細 胞 ( 嗅細 胞

) と

嘆 球

^の

出 力

^{ニ ュ ー ロ ン}

群

(

僧帽細 胞

^と

房 飾 細 胞)

との

間

^{の シナ}プ^ス

形 成

の

部位

で

あ

る^こと か ら, セ ロト^ニンほ ^一

次 感 覚

^{ニ ュ ー ロ ンか ら二}

次 感 覚

^{ニ ュ ー ロ}

ンへ の

情報 伝 達

^に

関 与

して いる

も

^のと

推 定

さ れ る^{6 )1 0 ).}

実 際

^にセ

ロト^ニ ンほこ の

情 報伝 達

^に

抑 制

を

及 ぼす 事

が

電 気 生

理

学 的

^に

報 告

されて いる^{1 1 )1 2 )}. しか し, セ^ロ ト^ニ ンが

喚覚 機 能

^にどのよ

う

に

関与

している か は 不

明

で

あ

る^.

平成 ⁵ 年 1 2 月 1 6 日 受 付

,

平 成 ⁶ 年 ¹ 月 ^{2 0 日} 受 理

A b b

r e v

i

at

i

o n s :

. ^C

^{x, C er e}

^b

^{r a}

^l

^{c ortex ;}

^{D B H}

^,

^d

^{opa m}

ⁱ

^{n e}

そ^{こ で}

今

回

著 者

は, ラッ トを 用い て

喚 球

^に

投射 す

^{るセ ロ トニ}

ン

線 維

を

選 択 的

^に

障害

^し, そ れによ り

嗅 覚

^にどのよ

う

な

影 響

が でる か を

防鼠 剤

^{シ クロ へ キシ ミ}ド を

用

^いた

喚 覚行 動実 験

^{に て}

検 討

し た. そ^の

結 果

,

喚球

で^の

著 明

な^{セ ロ トニソ}

低 下

は

著

しい

嗅 覚 機 能 低 下

を

き

た

す

^こと が

明

ら か^になった. こ の セ ^ロ ト^ニ ン

神 経 毒

^によって

誘 発

さ れ る

実 験 的 喚 覚 障害

^{につ い}て

行動 学 的 並

び

に

形 態 学 的

^に

詳細

^に

検 討

^{したの で}

報 告す

る.

対 象

お よ び

方 法

体重

2 0 0g ^〜4 0 0_g の

成 熟雄

^Spr agu e

‑

^{Da wley}

^系

^{ラッ トを}

^{使 用}

し,

表

1 ^に示 し た

手 順

^に

従

^い

実 験

を

行

^った^. な おラッ ト はシ ク

ロ へ キシ ミド

(

^{ナ ラマイシ ンR,}

以 下

^{ナ ラマ イシ ンと}

記 述 す

^る) ( 田

辺

,

大 阪

) ^にほ

未 経験

^の

も

の で

あ

る^.

Ⅰ.

右側 喚 球 除去

個

^々の

実 験 動 物

^{に つい て ,}

喚 覚機 能

,

喚 球

^{セ ロ トニ ン}

量

J

嗅

上

皮

と

喚球

^の

形 態 的変 化

^の3

者

を 正

確

^に

対 応

させる た めに_, 全

例

^{の ラ}ッ トで

あ

ら か じ め

右 側

^の

喚球

^を

除 去

^し

左側

^一

側

のみで

検 討

を お^こな^った^.

ベ ン ト パ ル ビ タ ^ール

(

^{5 0m}g

/

^kg, ネンブタ^ー ル^R, ダ イナポッ

ト

大 阪)

の

腹 腔 内 投 与

^によ る

麻酔 下

^に

頭 部

正

中

^に

皮 膚 切 開

を いれ,

右 側

^の

前 頭 骨

^の

最 前 方

を^マ イク ^ロ ド リル にて

削 開 除 去

し,

右 側 喚 球

を

再 出

^{さ せ た. その}

後 右側 喚 球

^上の

硬膜

^{にメ スで}

.

β

^‑

^h

y

d

r o xy

l

ase;

5

,

6

^‑

D H T

,

5

,

6

^‑

d ^ih

y

d ･

^{r OW t}

‑

^{ry p ta}

^{m i}

^{n e}

5

,

7

^L

D H T 1･

,

⁵

^,

⁷

^‑

^dih

^y

^d

^{roxy try p ta m}

ⁱ

^ne;

^{E P L}

^,

･

^{eXte r n}

^{a l}

^p

^l

^{e x}

^if

^orm

^l

^{aye r ;}

^{G C L}

^{, gran ti}

^l

^{e c e}

^{ll l}

^{aye r;}

^{G L}

^{, g}

^l

^{o m e ru}

^l

^{a r}

l

ay^er;

M C L

, m

i

tr a

l

c e

ll l

ay^{e r};

M F B

, m e

di

a

l f

o r e

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ra

i

n

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u n

dl

e;

M R N

,

m i d b

ra

i

n r ap

h

e n u c

l

e

i

;

O B

, O

lf

a ctory

2 32

塚

切 開

を^い

れ

た

後

,

嘱 管

にて

右側 喚 球

^のみ を

吸 引 除 去

^{し た.}

止

血 は

線 維性

^{コラ ー ゲン}

塩 酸 塩 (

^{ア ビ テ}ゾ

) (

^ゼリア_,

東 京)

^にて お こなった^.

止

血

確 認 後

I

頭 皮

を

綿 糸

^にて

縫合

^した.

Ⅰ.

嗅覚 行 動 実 験

1 ^{. ナ}ラ^マイシ ン

ナ ラ^マイシンは

特 有

^の

臭

^いと

^味

^を

^持

^{つ. ラッ トに とってナ ラ}

マ イシンの

臭

^いは

特

に

忌避

を お^こ

す も

^ので は な^いが, ナ ラ^マイ

シ ンの

味

は 不

快

で^ナ ラ^マイシ ンを口 に

す

^{る と}

唾

^を

出

しロを

床 面

に こ

す

りつ

け も

が

く

^{. ラ}ッ †は

何 度

かナ ラ^マ イ^シンの

昧

を

経 験 す

る と,

そ

^の

臭

^いを

記 憶

^し, その

後

^{はナ ラマ イシ ンの}

^臭

^{いを か}

いだ だ

け

でナラ^マ イ^シンを

忌 避 す

る よ

う

に な る^{1 3 卜 1 6)} 2 . ナ ラ^マ イ^シンによ る

条 件

づ

け 学 習

右 側 嗅 球 除 去後

^,

す

^{べ て の ラ} ッ トに ナ ラ ^マイ^シンによ る

条 件

づ

け学 習

を お^こ

な

った^.

飼料

^ほ

任 意

^に

与

^{え た が}, ラッ トを

喝

^の

状態

に

す

る た め 7 2

時 間 断 水

と し た^. そ^の

後

^{ラ ット}

^{飼 育}

^{ケ ー ジ に ラッ† を 1}

^匹

^{入 れ,}

^水 道 水

^の入^った

給 水 瓶

^{と 0.01 % ナ ラマイシン}

水 溶 液

^の入 っ た

給 水 瓶

を

同 時

に

与

え た^.

水 道 水

^の入 った

給 水 瓶

^{を な め た}

場 合

を

"

正

解

^{け と し. ナ ラマ イシンの入 った}

給 水 瓶

を

な

め た

場 合

を

"

誤

り^"

と

した^.

試 行 中 も 喝

^の

状 態

^を

維持 す

^{る た め,}

給 水 瓶

^の

先 端

^{に 口}をつ

け

る と

す ぐ

に

給 水瓶

を と り は

ず

^{し て}, ラッ ト は 1 回 に

少 量

^{し か}

飲 水

^で

き

ないよ

う

^に した, 1 回

給 水 瓶

にロを^つ

け

る

度

^に

両 方

^の

給 水 瓶

^{を と り は}

ず

し, Gelle r m a n n

系 列

^に

従

^って

規則 性

^のないよ

う

に そ

れぞ

れ^の

給 水瓶

^の

位置

を

替

え た^. 1 0 回^の

試行

を 1 ^{ク ー ル}と し,

̀̀

正解

^" 回

数

^を

試 行

回

数 (

1 0 回

)

で

険

した

も

の を 正

解 率

と した^. ナラ^マイ^シンの

学 習

を

完 全 な も

^のと

す

^る た め

数

^{クー ルを}

行

^い, どの ラッ ト

も

3 ^〜 4 ク ^ー ルで

最 終 的

な 正

解 率

が 1 0 0 %

と な

った^.

Ⅲ.

喚球

に お

け

る セ^ロ

ト

ニン

線維 障 書 動物

の

作 成 ( 図

1

)

^叩 1 ^. 5.7^‑ジ^ハイ ドロキ^シT^t リ プ タ^ミソ

(

^{5,7‑d ih}ydr o xy try p ta m^‑

i

n e, 5,7^‑D H T

) 注

入

群

5,7^‑D H T

(

^{S i}gm a,StLo uis,U S A

)

はセ^ロ ト^ニ ン ^ニ ュ

ー ロ ンの

神 経 毒

で^{セ ロ} ト^{ニ ン ニ}ュ

ー ロン に

選 択 的

^に

取

り

込

^{ま れ}

細 胞 障 害

Tabl_cl. Expe rim e ntalpr o c edu r e s

(

1

)

^{Rats w e r e s ub}

j

^{e ctedto r e m o v al of u nilate r al olfa cto ry} bulb^.

(

²

)

^{Bulbe ctomi z ed r ats w e r e tr ain ed to a v oid O･01 %}

cyclohe ximi d_e

(

^{Na r a m}y^cin

)

^{s olutio n･}

(

³

)

^{Conditio ned r ats rec eived tw oin}

j

^ectio n s of 5, 7^‑dihyd^‑

roxy t^ry p t^{a m}in e

(

⁵, 7^‑D H T,4 0 r 8 p gin 4 pl

)

^{or v eh icle}

(

⁴ J^LL of is oto nic s alin e c o ntaining O^.1 % a s c o rbic a cid

)

into the r o str al

(

^{A : 2.0}, L: 1.5, D : ^r 8^.O m m

)

^{a nd}

c a ud al

(

A : ^‑2^.0, L: 2^.0, D: ^d8^.5 _{m m}

)

p^{a r}ts of the m edial fo r ebrain bu ndle c o ntr alate r a11_y to bul be cto my^.

(

4

)

0 1fa cto ry fu n ctio n w a s e x ami ^{n e}d by the abili_{t y} to

dis c rimin ate O^.01 % cyclohe ximide s olutio n fr o m w ate r

3,7,1 4,2 1, a nd 2 8 days af^{te r}in

j

^{e ctio n s of 5},7^‑D H T

or vehicle^.

(

5

)

^{A fte r c o m} pleting the beha vio r ta sk. all r ats w e r e p^{e r}fus ed with a fix ativ e. a nd ^spe cim e n s in cluding

olfacto ry ^epitheliu m s, 01factory b ul bs and othe r br ain a r e a s w e r e take n fo r m o rphol^og^{l C}al a n al_ys e s. T he e v alu atio n of t he d^eg^{r e e o}f s e r oto nin dep l^etio nin e a ch oIfa cto ry bulb w a s do n eim m u n ohisto chemi c a11y^･

性

の

複 合物

と な り^ニ ュ

ー ロ ンの

退 行

^･

変性

を お^こ

す 事

が

知

ら れ

て^いる^{1 8). こ の} 5,7^‑D H T を

脳 幹

^の

縫 線 核

^に

あ

^る

細 胞 体

か ら

喚球

へ セ^ロ ト^ニ ソ

線 維

が

投 射 す

る

途 中

^の

経 路

で

あ

る

内 側 前 脳束

^へ

注

入 し,

左 側

^の

喚 球

^にお

け

るセ ロ ト^ニ ソ

線 維

を

障 害

し た^{1 9)}.

右側 嗅 球 除 去 後

t ナ ラ^マイ^シンによ る

学 習

^で正

解 率

が 1 00 % と なっ たラッ ト2 0 匹 を

使 用

し た^.

ベ ン ト^{パ ル}ビタ ^ー ル

全 身 麻 酔 下

^にラット

頭 部

^{をス テ レオ}

手 術 台

に

固 定

し,

左 側

^の

内側 前 脳 束

上に

あ

た る

前 頭 骨 (

プ^レグ^マよ り 2^{m m}

前 方)

^と

頭 頂 骨 (

^{プレグマよ り 2m m}

後 方)

^{に マイクロ} ド リ^ルで

小 孔

を

あ け

た^{, こ の}

孔

よ り

左 側

^の

内 側 前 脳束

^の

吻 側

と

尾 側

^{の2 ケ}

所

に 4pl

ず

つ 5,7^‑D H T

(

4 ^〜8p g

/ 毎

1

生 理 食塩 水

, ア ス コル ビソ

酸

¹/ 唱

ル

¹

^加)

^を

^注

^{入 し た.}

^注

^{入 ほ Ha milto n マイク}

ロ シリソジ

(

1 0J^上1

用)

を

用

^いて l

函 /

^{min の}

速度

で

注

入 し,

周囲

への

漏 洩

^や

組 織

^の

機 械 的 損 傷

^を

極 力少

^な

く す

る よ

う

^{に つ}と め た^.

2 .

対 照 群

右 側 喚 球 除 去 後

, ナ ラ^マイシ ンによ る

学 習

^で正

解 率

^{が 1 0 0 %} と なったラッ ト1 0 匹 を

使 用

し た^.

上

記

と

同様

^に,

左 側

^の

内 側 前 脳 束

^の

吻 側

と

尾 側

^の2 ^ケ

所

^に 4〟1

ず

^つ

生 理 食 塩 水 (

^{アス コル ビン}

酸

^l鵬

ル

^l

^加)

^を

^注

^{入 し た.}

Ⅳ.

処 置 後

^の

喚 覚 行 動 実 験

5,7

‑

^{D H T}

^注

^入

^群

^一

^{対 照 群}

^と

^も

^に

^{処 置} 後

^{3 日}, 7 日,1 4 日,21 E ㍉ 2 8 日^に

前述

し た

方 法

で 1 ク ^ー ル

(

1 0 回

試 行) ず

^つ

喚 覚 行動 実 験

を お^こな^い, 正

解率

^を

も

と め た.

各 群

^の

各 観 察

日にお

け

る

各

ラッ ト^の正

解 率

^の

和

^をラット

数

^で

除

^{し た}

も

のを

平 均

正

解 率

と し た^. 理

論 的

^にほ

嗅 覚

が 正

常

なラッ

ト

群

^の

平 均 正 解 率

^{ほ 1 0 0 % に}

近

^づ

き

,

無 喚 覚

^の

状 態

^{の ラット}

群

の

平 均

正

解 率

ほ 5 0 % に

近

^づ

く

^ことにな る^{. ナ ラマ}イシンによ る

喚 覚行 動実 験

^で

喚 覚 墳 能

^を

検 定 す

^ることの

妥 当性

を

確

か め る た め に,

次

^のよ

う

な

予 備 実 験

を お^こなっ た.

今

回^の

実 験

^と

同

^一

条 件

^で

右 側 喚 球

を

除 去後

, ナ ラ ^マイシンによ る

学 習

で 正

解率

が 1 0 0 % に なっ たラッ ト 3 匹につ いて, さ らに

左 側 嗅 球 除 去

^{を お}

こなった^.

両 側 嗅 球 除 去 処置

を

う け

た^これ らの ラッ ト につい て 正

解率

^を

求

^{め た}

結 果

,

処 置後

3 日 か ら2 8 日 ま で^の

観 察期 間

を

通

じ て

平均 正 解 率

ほ 5 0 % で

あ

った. こ の こと か

ら

^{ナ ラ マイシン}

F ig^.1^. S im plified s che m atic diag^{r a m s}ho wing a s c e nd ing s e r oto n e rgi^c path^{w a}y^s in r at br ain. O lfa cto ry bulb ( O B

)

r e c eiv e s r n a s siv e s e r oto n egic inputs thr o ugh m edial fo r ebr ain bu nd le

(

^{M F B}

)

^{. Ar r o wsind ic ate in}

j

^{e ctio n site sof} 5,7^‑d ihydr o xy try p ta min e

(

⁵,7^‑D H T

)

^{o r v ehicle. Cx,C e r ebr al}

c o rte x; M R N, mid br ain r aphe n u clei; St,Striatu m^.

b

u

lb

i

O N L

, O

lf

a cto ry

･

^{･n e r V e}

･Y ^ユ

^{aye r;}

⁰

^･

^{3 % P B S T}

^{, p}

^h

^{o sp}

^h

^ate‑

b

u

ff

e r e

d

s a

li

n e w

i

t

h O

^･

3 % T

r

i

to n^‑

Ⅹ1 00

_;

P G P 9

^･

5

･

p^{r o}te

i

n g^{e n e} p^{r p}

d

u ct

‑ ⁹

^･

⁵

^;I

^S

^{t, Str}

ⁱ

^{atu m ;}

r

ⁱ

^{T H}

, t y^{r O S}

i n

e

h

y

d

_{r o xy}

l

^{a s e･}

セロ ト^{ニ ソ}と

嗅 覚 障害

p こよ る

行動 実 験

は

嘆 覚機 能

^を

調

^{べる 上で}

十 分

に

信 頼性

が

あ

る

も

のと

考

え られ た^.

統 計 的

^に

各 群

^の

間

^の

差

を

調

^{べる た め},

各 群

^の

平均正 解率

^の

間

^{で 一}

元 配 置分 散 分 析

^の

軋

Scheff 6 の

多重 比 較 法

を

行

^{い , p < 0･O l を}

有 意差 あ

^{り と し た･}

Ⅴ^.

組 織学 的 観 察

1 .

固 定

2 8 日 日^の

行動 実 験

を

終 了

し た

乱 す

^べて^{の ラ}ッ トを^ベ ン ト^バ ルビタ ^ール

深麻 酔 下

^に

開 胸

^し

疑 心 的

^に

潅 流 固 定

し た^･

海 流 液

は 4 % パ ラ ホ ル ム ア ル

デ

^ヒド, 0･l % ダル ク ^ー ル ア ルデ ^ヒド,

0^.2 % ^{ピ ク}リン

酸

^を

含

む 0^.1 M

燐 酸 緩 衝 液

を

用

^いた ^･

潅 流 固 定 軋 鼻 中 隔

と ^一

塊

^に

な

った

鼻 粘膜

^と

脳

を

取

り

出

し, 4 % ^パ ラ ホ ルムア ル

デ

^ヒド,0^.2 % ピ クリ^ン

酸

を

含

む 0^.1 M

燐 酸 緩 衝 液

^にて

一

晩後 固 定

^{し,1 5 % シ ョ}

糖 加 燐 酸 緩 衝 食塩 水

^にて 2 日

間 浸透

さ せ た.

嗅 球

は

脳

か

ら 切

り

放

^し,

前 額 断 方 向

^{に3 つ の}

部 位 ( 吻 側 臥 中 央 乱 尾 側 部)

に

分 け

た^･

吻 側 部

1

/

^{3 の}

嗅球

は^エ ボン

包 埋用

^のブ^ロ ッ クと した^.

中 央部

¹

/

^{3 の}

^{嗅 球}

^と

^残

^りの

^脳

^{はミ ク}

ロ ト^{ー ム に}て

前額 断 方 向

^の

厚

さ 2 0〃^m の

連 続 凍 結 切片

^を

作 成

^し

以下

^の

免 疫 阻織 化 学 的 検 討

^に

用

^いた^.

鼻 中隔

と ^一

塊

^に

な

った

鼻 粘 膜

は^エ チ レン ジ^{ア ミン} 4

酢 酸 (

^ethyle n edia min etetr a a c etic a cid,E D T A

)

^にて

脱 灰

, ア ル ^{コ M} ル上

昇 系 列

^にて

脱 水 後

^{パ ラ}

フ_ィン

包

唾 し, ミ ク^ロ ト ムにて

前額 断方 向

^の

厚

さ

録

m の

切 片

を

作 成

し た^.

2 .

免 疫鼠 織 化 学 的 検 討

免 疫 染 色

は^アピ ジン ^ー ビ オチ ソ ^ー

複 合 体 法 (

^{a vid in biotin}

pe r o xida s e c o mple x m ethod, A B C

法)

に て

行

った･

1

) 嗅 球

,

前 脳

凍 結切 片

は 0^.3 % ト ラ イ ト^ンⅩ

加麟 酸 緩 衝 食 塩 水(

pho sphate^‑

buffe r ed s alin e wi th O^.3 % Trito n^‑Ⅹ1 0 0,0^,3 % P B S T

)

^に2 日

間

^つ

け

た

後

1

超音 波

を 1

分 間

^か

け

^{た.0.3 %}

過 酸 化 水 素 加 燐酸 緩 衝 食 塩 水

^にて1 0

分 間 内 因性

^ペルオ キ^シダ ^ー ゼ の

活 性

を

阻

止 し, さ ら に

非特 異 的反 応

^を

阻 止す

^{る た め 5 % 正}

常

^ヤギ 血

清

を1 5

分 間反 応

さ せ た

後

,

一

次 抗 体

を

室温

で ^一

晩 反 応

^{さ せ た. 一}

次 抗 体

^{と して}

抗

^セロト^ニ ン

抗 体 (

1 :5,0 0 0

) (

Euge n e Te ch, Ra m s ey^, U S A

)

,

2 3 3

抗

ド^{ー パ ミン ベ ー} タ^ハイ ド^ロ キシ レ ^ー ス

(

^dop^ami n e

β

^‑hydr o xy^‑ la s e, D B H

) 抗体 (

1 :5,0 00

) (

Euge n e Te ch

)

,

抗

^{タ イロ シ ソハ イ} ド^ロ キシ レ ^ー ス

(

t y^{r o s}in e hydr o xyla s e, T H

) 抗 体 (

1: 5,0 0 0

)

(

Euge n e Te ch

)

を

使 用

し た^{. 二}

次抗 体

^{ほ どオチソ}

化

^{ヤ ギ}

抗

^ウサ

ギ IgG

抗 体 (

^{1:2 0 0}

) (

Ve cto r,Bu rlinga m e,U S A

)

を

使 用

し

室 温

で 1

時 間反 応

さ せ た^{. つい}でペルオ キシダ ^{ー ゼ}

標 識

^{ス トレプ ト}

アピ ジン

(

D A K O, G lo stru P,De n ma rk,1^:60 0

)

と 1

時 間反 応

^さ せ た^.

発 色

^{は ジア ミ ノベ ンチジン}

(

^{3,3㌧diami n obe n zid in e}

) 溶 液

に て 7 ^〜1 5

分 間反 応

し た^.

ま た

隣 接 切片

^{は, クレ シ ー ル}

紫 (

c r e syl vioIet

)

^{に て ニ ッスル}

染 色

を

行

^った.

2

) 喚

上

皮

パラ フ_ィ ン

切 片

^は

脱

^{パ ラ フィ ン し た}

後

】 0^,3 %

過 酸 化 水 素 加

メ タ ノ ^ー ル にて1 0

分 間 内 因性

^{ペル オ キ シダ ー ゼ}

活 性

^を

阻 止

^し た. 0.3 % P B S T ^に2

時 間

つ

け

た

後

, 0^.4 % t リ ブ^{シ ソ}にて1 0

分 間 消 化処

理 を

加

え た^.

非特 異 的 反 応

^を

阻害 す

^{る た め 5 % 正}

常

^ヤ ギ 血

清

を1 5

分 間 反 応

さ せ た^{. 一}

次 抗 体

^は

抗

^{プロテ イ ンジー ンプ}

ロ ダク ト 9.5

(

pr otein g^{e n e} p^{r o}du ct 9^･5, P G P 9^･5

) 抗 体 (

1:

2,0 0 0

) (

U ltr a clo n e,W ello w,Engla nd

)

を ^一

晩反 応

^{さ せ た. ニ}

次抗 体 以降

^{ほ 上}

記

と

同

じ

操作

を お^こな^っ た^.

喚粘 膜

で は P G P 9^･5 は

喚 細 胞

と

嘆 神経 線 経

^で

特 異 的

^に

陽 性

^{と な るの で2 0) 帥,}

嗅 細 胞

^の

形 態 観 察

と

同 時

^に

喚

上

皮

と

呼 吸

上

皮

の

鑑 別

^の目

的

^で

使

用 し た^.

3 . いレイ ジンブ^{ル ー}

染 色

吻側 部

1

/

^{3 の}

喚球

は 2 % オス ミウム

酸

^で

後 固 定

,

エ タ ノ ^ー ル

系 列

で

脱 水 後

^{エ ボン}

包 哩

し, L K B 8 8 0 0 U ltr ato m eⅢ

(

L K B,

Sto ck holm ,Sw ede n

)

^{にて 1}F^Lm の

切 片

^を

作成

^{した. こ の}

際喚 球

の

免 疫染 色 並

びに^ニ ッ ス ル

染 色 標 本

と^の

対 比

を

容 易

^に

す

^{る た} め,

喚球 中央 部

^に

近

^い

部 位

^の

切片 標 本

を

作成

した^･ ト ルイ ジ^ン

ブ^{ル ー}で

染 色 後

¹

光学 顕 微 鏡 下

^で

喚 球

^の

形 態

^を

観 察

^した.

成 績

Ⅰ^.

喚 球

に お け る セ^ロト^ニン

頼 経 ( 図

2 ) 1 .

対 照 群 ( 図

^2a

)

F i_g.2^. P hoto mic r ogr aphs of c o r o n als e ctio n s thr o ugh olfa cto ry bulbs showi ng s e r oto nin^‑im rpu nqr e a cti^{v e} fibbr sin cdnt (01 c a s e

(

^&

)

a nd in

‑

^{n e u r OtO Xin}

‑‑

^irf

I

^{e cted c a s e wi th a n o smi a}

(

b

)

^. NDte that s e r oto nin^‑ir n mu n o r e a ctivit y in glo m e rura r

'

laye r

(

^{G L}

)

^{w a s abs e nt} i_n b^･ E P L, e Xte r n al ple xifo r m laye r; O N L, 01fa cto ry n e r v elaye r^･ Ba rin aindic ate s l O O_FLm fo r a a nd b･