食 餌

金 沢 大 学十^全医 学 会 雑 誌 第^{1 0 5}巻 第2 号 2 0 3 ^‑2 1 4(^{1 9 9 6})

食 餌

発 癌

‑ ラッ ト残 胃 発 癌^モデ ^{ル での}研 究 ^‑

金_沢大学 医学 部 医学 科外 科 学 第^二講座 ( 主 任^:宮 崎 速 夫 教授)

木 南 仲

2 0 3

脂肪 摂 取^の多 寡^が, 残 胃 癌^の発 生^と進 展^に及^ぼす 影響^を, 実 験 的^に検 討^{し た.} 体 重^{25 0 ‑3 00}g の W ista r 系雄 性^ラッ ト を用^い , 腺 胃^の幽 門側2/ ^{3 を}切 除, Billr oth [ 法で再建した^. 術後, 脂 肪 含 有 量^0.5% ^の特殊 飼 料を与え る低 脂 肪 食 (lo w fat diet,L F) 群 (^{n = 2 7}), 1 5% ^の高脂 肪 食 (^high fatd iet_, H F) 群 (n ⁼ 2 9) ^の2 群に分 けた. 両群^とも食 餌 摂 取^は自 由と し, 発 癌 剤 を投 与せずに, 術 後5 0週で犠 牲死 さ せ た^. 残 胃^の運 漕^の発 生^{は L F} 群^{の1 8.5 %} (⁵/^{2 7), H F 群の 41.4 % (1 2}/^{2 9}) ^に認め ら れ,

部位^は吻 合 部^であった^. L F 群^の踵 癌^の最 大径 ( 平 均±標 準偏 差) ほ 4^.8 ±2^･5m m で, H F 群^の 8 A 土6^.3m m に比^べ短^い傾 向が み ら れ た(p ⁼0.0 6 5)^. 腰 痛ほ ∴組織 学 的^に癌^{お よ び}腺膣^であ^った. 発 病 率^は, L F 群^{1 4.8 %} (⁴/²⁷),H F 群^{41.4 %} (^{1 2}/^{2 9}) ^で,

L F 群が有意^に低 率^であ^った(p <0^,∽)^. 組 織 型^ほ粘 液腺 病 あるいほ管 状 腺 痛^が認め ら れ た^. 深 遠 度ほすべ て固 有 筋層 以深で,

L F 群^{で は}, 深 連^は紫 膜 下層^{まで に}留まって^いるの に対し, H F 群で ほ, 輿 膜震 出が 3 例. 他臓 器 浸 潤が 2 例 認め ら れ, H F 群 で よ り深 部^へ と浸 潤し^{て い}た^. 腺 魔^の発 生率^は, L F 群^{で は1 4.8}% ^で, H F 群^{3 7.9}% ^に比^べ有意^に低 率^であ^った(p< 0.0 5)^‑ 粘 膜 下 過形 成 性 腺 管 (g^{a s}tritis cystic a pr ofu nda) ^の発 生 率ほ, L F 群7 4^.1% , H F 群9 3^.1% ^で, 両群間^で有 意^に近^い差を認め た (p ⁼ 0.0 5 7)^. 糞 便 中^の総 胆汁酸 濃 度^は, L F 群^{2.45 士1.4 9}pm ol/g, H F 群^{3.7 0 ±2A31}pm ol/g(p< 0^･0 5), ま た糞 便 中^{1 日}総 胆 汁酸 量は, L F 群1 1^.2 士6^.2pm ol/^日, H F 群1 9^.0 ±1 6 Apm ol/^日(p <0.0 5) で, L F 群^が有 意^に低 値であっ た^. 体 重変 化, 残 胃 粘膜 面の pH , 血中^の総^{コ レ ステロ ー ル}, 中性 脂 肪, 遊 離^{コ レス テ ロ ー ル, リン}脂 質, お よ び, 総胆汁 酸濃 度は, L F 群と H F 群^の 間^に有 意 差を認め な かった^. 以上 よ り, 脂 肪 摂取 量^の多 寡^ほ, 残 胃 痛^の発 生率^に影 響 す^ること が 示 さ れ た^.

K ey ^{w o r}ds sto m a ch ne oplas m s, dieta ry fat, g^{a S}tric stu mp^,d uodenog^{a s}tric r eflu x, bile acid

良性 疾 患術 後^の残 胃^に発 生 す^る癌^{の こ}と を,

一 般^に残 胃 癌 (ga stric stu mp c a r cin o ma) と呼ぶ^. 欧 米^の疫 学 調 査^によ る と,

残胃癌 発 生^の相 対 危 険 度^ほ, 切 除^を受^{け ていない}胃に比^べて高

いと結 論さ れ,残 胃^は前 病 状 態^である と容 認さ れ^{て い}る^{1 卜 5 ). 一} 方, 胃痛の多^い日本では, 残 胃 癌は む し ろ少な^{い6 )T ).} Te r s m et‑

te ら^{8 )} ほl 残 胃 癌 発 生^の相 対 危 険 度^は, ア メ リ カ の1.5 3倍,

ヨ ^ー ロ

ッ パの1 ^.66倍^に対し, 日本は 0^.28倍^で, 日本で ほ欧 米^に

比^べ有 意^に残 胃 癌 発 生^の危 険^が少^ないと報告^{し ている. こ の こ} と は, 残胃 癌^の発 生 進 展が, 通 常^の胃 癌と異 なる 可能 性を 示唆 し ている.

一 方, 大勝 癌や乳 癌 も, 日本^の死亡率, 曜 患 率^は, 欧 米^に比

べ低^{い. こ の}原 因と し て食 生活 習 慣, 特^に脂 肪摂 取 量^の差 異が

挙げら れて いる^{飢 → 4).} 食 習慣^が欧 米 型^の食事 内 容^{へ と}変 化 す^る

と ともに, わ が国^の大 腸 癌と乳癌^の罷 患 率 も 次 第^に増 加し て^い る事 実ほ, これ を反 映^{している‑ 5).}

欧 米と 日本との残 胃癌^の発 生頻 度^の差 違 も, 大 腸 癌^や乳 癌^と 同様に, 脂 肪 摂取 量^の差 異が関 与^{し ているのか}もし れ ない.

近 年, 国 内^で残 胃^の癌^の発 生 頻 度^が次第^に増 加^{して いる. こ}

の原 因^{と し て}, 消 化 性 潰瘍^で胃 切 除を受け た 人々が痛 年齢^に達 してきた^こと^岬, 早期 胃 癌^が増 加^し治 療成 績 も 向^{上 し た た め}異 時 性 多 発痛が増 加し たこと^{1 7 )}. が挙 げら れ^{て い}る が, 食 生 括^の 欧 米 化^が残 胃^の発癌^を助 長^{して いること}も 考^{え ら}れる.

本 研 究^では, 食 餌性^の脂肪 摂 取 量^の差 異が, 残胃 痛^の発 生と 進 展^{に いか な る}影 響^を及ぼすか を実 験 的^に検 討し た^.

材 料お よび 方 法

Ⅰ. 実 験動 物お よび飼 育 条件

体 重2 0 0g 前後^の W ista r系 雄 性^{ラッ ト}1 3 0匹を 用^いた^. 室温 2 2土3 ℃, 湿 度^{5 5±5} % に保^ち, 各^{ケ ー} ジ 2 ^〜 3 匹 づつに分 け

て飼 育した^. 飲 料 水は水道 水を 用^いた. 全 実験 中を通じ発 癌 剤 ほ ^一 切使用 しな かった^.

Ⅰ^. 実験 方 法 1 ^. 術前 飼 育

術 前^には, 脂 肪 含有 量⁵ % の標 準 飼 料C R F^‑1 ( 日本 C ha rle s

R iv e r, 神 奈川) を自由 摂 取さ せ飼 育し た^.

2 . 手術 方 法

平 成7年¹²月^{1 5 日}受付, 平 成⁸ 年^{1 月26 日受 理}

A b br e viatio n s : Fch, free choleste rol_; G C P, g^{a S}tritis cy^stica p^{r o}fu nda; H F , hi_gh fat diet ; L F,lo w fat diet ; MNN G, N ^‑M eth_yl^‑N^'‑Nitro^‑N ^‑N itr o s og^{u a n}idin e; ^m p, m u S C ula ris p^{r o}p^ria; ^{m uC}, m u Cin o u s ade n oca r cin o m a ; N E F A, n O n^‑e Ste rified fatt y ^{a c}ids; O D C, O r nithin e decarbo xylase; P L,phospholi_pid_;S^‑H F, Sha m ^‑Op^{e r a}ted hi_gh

2 0 4

実験はラッ トの体 重が 2 5 0^‑3 0 0g に増加 し た時 点で行^った^.2 4時 間^の絶 食^{の のち}, ジ^ュチル ^{エ ー} テ ル吸入麻 酔 下^に上腹 部正 中 切 開^{に て}開 腹し, 右 胃 大網 動 脈, 右 胃 動脈, 左 胃 動 脈を結 集

･ 切 離^し, 腺 胃^の幽 門 側2/^{3 を切 除し た. 口側 切 除線は▲ 小 鸞} 側を大 きくと り, 幽 門 腺 領域を残さ な^いよ うにL た. 消 化 管 再 建は B iIlr oth l 法(結 腸 前) ^にて行^った^. すな わ ち, 十^二指 腸 断 端を閉鎖^し, 残 胃^の小 琴 線¹/^{2 を}縫 合^し, 大 湾 側¹/^{2 ほ}▲ ト ライツ敬帯か ら 4c m の上部 空勝と端 側 吻 合し た^. 消 化 管 吻 合

にほ針 付 き^{7 ‑ 0 シ ル ク}糸を 用^い , 全 層^の結 節 縫 合を行った ( 図1 )^. 術 後2 4時 間は絶 飲 食と し, 1 日 日 よ り水 分, 2 日 目 よ

り食 餌を与え た^. 3 . 実験 群 作 成

特 殊 飼 料と して_, 成 分を そ れぞれ蓑1 ^のよ う^に調 整^{したオ リ}

エ ンタ ル酵母 工業 株 式 会 社 ( 名 古 屋)製^の低 脂 肪 食(脂 肪 含 有 量 0.5 %), 高 脂 肪 食 ( 脂 肪含 有量^{1 5 %}) を使用 し た^.

胃 切 除 後^に低 脂 肪 食を与え る低 脂 肪 食 (lo w fa t diet,L F ) 群 (^{n =} 5 0), 胃 切 除 後^に高 脂 肪食^を与^{え る}高脂 肪 食 (^high fat diet_, H F )群 (n ⁼5 4), 単 開腹 後に低 脂 肪食を与え る(^{sha m}‑^{OPe r ated}

lo w fatdiet_, S^‑L F) 群 (n ⁼1 4), 単 開 腹 後^に高 脂 肪 食を与え る (^{sha m}‑^{Ope r ated h igh fatdiet,S‑H F ) 群 (n =1 2) の4 群を作成し}

た^.

4 群^とも, 飼 料^は自 由摂 取^{さ せ},1 0週 毎^に体 重を測定し た.

術 後5 0週 経過 例を有効 動 物と し た^. 4 . 標 本採 取

犠 牲 死さ せ る2 4時 間 前よ り絶 食と し た^. L F 群^の1 6 匹, H F 群

の1 9匹は, 床が金 網と なった代 謝^{ケ ー} ジに1 匹 づ^つ入 れ, 2 4時 間^の便^を採取^{し た.}

犠 牲死 は, エ ^ー テル深麻 酔に て行った^. 呼吸停 止 後, 直ち^に 開腹し, 下 大 静 脈か ら採血 し た^. つづい て残 胃を摘 出し, 大琴 側^で切 開^し, デ ジ_{タ ル p}H/^{I O N メ ー タ ー T P‑}1 0 0 (東 興 科 学 研究

F ig^.1^. Ope r ativ e p^{r o c e}du r e s^. D i_{s t a}l _pa rtial _ga str e ct_{o m} y a nd B illr oth II r e c o n str u ctio n. G, r e m n a nt gla ndula r sto m a ch.; F,fo r e sto m a ch.

所, 東 京) に て腺 胃 粘 膜面の pH を測 定し た^. 次^に, 肝 臓を肉眼 的 観 察お よ び手 指^にて触 知し, 腫 瘍(転 移) ^の有無を検 索し た.

大 膀(結 腸) も同時^に摘 出^{し た.}

残 胃は, 粘膜 面^の腫 瘍 発生を肉 眼 的^に観察し た後, 粘 険 面を 上にし^コ ル ク板^{に ピンで}貼^り付 け,1 0% ^{ホ ル マリン}液^で固 定^し た^. 大 腸ほ, 長 軸 方 向にそっ て腸間 膜 対 側^で切 開し, 腫 瘍^の発 生を観 察^{し た.}

T able l. Co mpo sitio n of thelo w a nd the high fatdiet Co m p^{o s}itio n(%) ^of e a ch c o mp^{o n e n}t in

Co mpo n e nt

Lo ll^▼fatdiet H igh ^fatdiet Soさ^▼be a n oil

M ilk c a s ein(^1'it ami nfr e el De xtr o s e

M in e r al mixtu r e

V it_{a m}in mixtu r e α^･Potato sta r ch β‑^{Co r n sta r ch}

5 0 5 0 0 0 0 0 5 6 6

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0 0 1 2 3

1 1 B oth the high ^{fatdiet a nd thelo w fatd iet w e r e} pu r cha^･ s edfr o m Orie ntaI Ye a st Co.Ltd.( Nagoya).

F ig^.2. M a c r o s c opic find ing^{s o}f _ga stric stu m p ^{c a r c}in o main a r atfed the high fat d iet. A tu mo r w a s lo c ated at the ga str o e nte ric a n a sto motic site.

F ig^,3^. H istologic al find ings of the tu m o r sho w n in F ig^･2^･ M u cin o u s ade n o c a r cin o ma^. D ir e ctin v a sio n intoliv e r. H E,

×2 5 0^.

f^at diet; S^‑L F. sha m ^‑Op^{er a}t^ed l^{o w} fat diet ; S e, S占ro s a e xp^osed ; Si, S e r O S a. ^{infiltrating ; S S, S ub}s e r o s a; T G ,

tri_gl_yc e rid_{e ;} Tch ,tOtal chole ste r ol; tub ,tubular aden o c a r cino m a

食 餌 性 脂 肪と残 胃 発癌

5 ^. 残 胃^の病理組 織 検 索 法

2 4時間^{の ホ ル マリン}固 定の乱 残 胃 空 腸 吻 合 線と直角^に交わ る よ う な方 向で, 全 残 胃を 3^{m m} 間 隔^で切り出^し, パラフ ィ ン

包埋 した^. 腫瘍^のある場 合は同方 向での最 大 割 面が得られ る よ うに切り出し た^{. こ の}ブ^ロ ッ クを 5甚m で薄^切し, H E 染 色^を行

い, 鏡検^{し た,} 6 ^. 病 理 学 的 記載 法

肉 眼的^に腰痛 形成を認め, 細胞 異型, 構 造 異 型を有^し, 粘 膜 下層 以 下^に浸 潤増 殖 す^る腺 増 生を癌と定 義し た^･(囲2 , 3 ,

4 ) 癌^の組 織 型お よ び覿 織 学 的 深 達 度^の判定^は1 胃 癌 取 扱^い演 約 第^{1 2}版¹町 に準じた^.

背景 粘膜^の病 変^{と して}, 腺 腫, 粘 膜 下 過 形 成 性 腺 管(ga stritis cy^stic a pr ofu nda,G C P), 拡 張 腺 管, 偽 幽 門腺 化 生を, 次^のよう

に定義^{し た.} 腺 鷹^は, 粘膜 下 層に腺 管^の増 生を認め る が, 異 型 性が弱く▲ 浸潤 傾 向^に乏^しいも^の( 図⁵), G C P ほ, 粘 膜 下 層^に 小嚢胞 状^の過 形 成 性 腺 管を認め るも^の(図6 ), 拡 張 腺 管は, 腺 腔^の拡 張を 示す も^の ( 図⁷), 偽 幽 門腺 化 生^はl 体 部腺^に幽 門 腺 様組織^の出現を認め るもの( 図8) と し た^.

7. 血液生 化 学 的 検 討

血清 分 離後^, 総^{コ レ ステロ ー ル}(^{totalchole ste r ol},Tch), トリ グリセ リ ド(^triglyc e ride, T G ), 遊 離 ^{コ レ ス テ ロ ー ル} (fr e e chole ste r ol, Fch), リン脂 質 (pho spholipid, P L), 遊 離 脂 肪 酸 (n o n^‑e Ste rified fatt y a cids,N E F A), 総胆汁 酸^の濃 度を測 定^し

た.

F ig^.4. Tubula r ade n o c a r cin o m a in a r at fed the high fat diet. H E, ×5 0 0.

F i_g･5･ A de n o m a sho w n at the a n a st_{o m}otic si^te^. A de n o m a W a s c o n sisted of gla ndula r pr olife r atio n with lo w g^{r a}de at y pia. H E, ×2 5 0^.

20 5

8 ^. 糞 便 中総 胆 汁 酸 量^の測 定

糞 便 中^の総 胆 汁 酸 濃 度は, 石 本^{1 9〉の}方 法^に準じて胆 汁 酸成 分 を糞 便^{よ り}抽 出し, 3α^‑ヒド^ロ キ シ ス テ ロ イ ド脱 水 素 酵 素 (3α^‑hydr o xy^ste r oid dehydr og^{e n a s e}) ^によ る酵素反 応^{2 0)}で測 定し

た.

抽 出方 法^を以下^に示す^. 集^{め た}糞 便^は一 分 析 暗^{ま で ‑20 ℃ で} 凍 結 保 存し, 均^一 化し た後,2 5 0mg を分析 用^の試 料と し た^{. エ} タ ノ ^ー ルと 0.5 N 水 酸 化^{ナト リ ウム}(^{NaO H}) 液^{の8 : 2の}混 合 液2 5ml を加え, 遠 沈 管^の中で6 0分 間7 0 ℃^の温 浴 抽 出を行^い,

遠 沈後^{, 上}清を採取した^. 抽 出3 回分^の上清を集め て分液^{ロ ー} ト に移^し, 中 性^{ス テロ ール} を除 去 す^{る た め}, 石油^{エ ー テ ル}

F ig^.6^. Ga stritis cystic a pr ofu nda(G C P)^･ G C P w a s c o n sist^‑ ed ofthe fo r matio n of cystic gla nds a nd their o v e rgr o wth into the s ubm u c o s al laye r witho ut at y pis m ^. H E, ×5 0 0.

F ig^.7^. Dilated _gla nd^. H E, ×2 5 0^.

Fig^.8^. Ps e udop ylo ric gla ndula r m etapla sia^. H E, ×2 5 0^.