非特 異 的増殖 性 肉芽性炎症巣 におけ る 脂質 代謝 に関す る研究
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(2) 932. 堀. い て 検 討 し, TG等. 井. の中性 脂質 の局所 蓄積 に続. 郁. 夫. し,脂 質 組 成 お よ び 各 脂 質 分 画 の 脂 肪 酸 組 成 を. い て 湾芽 形 成 時 か ら 消 退 時 に 極 性 脂 質 が 増 加 す. 分 析 した.ま. る こ と を見 出 し,リ. マ リン で 固定 し,組 織 切 片 を常 法 に よ りヘ マ ト. ン脂 質(PL)を. 中心 とした. 極 性 脂 質 の 炎 症 で の 役 割 に つ い て 言 及 した18). 今 回,ホ. ル マ リン 浸 漬 濾 紙 埋 め 込 み に よ り惹. た,一. 部 の 肉 芽 腫 は10%中. キ シ リ ン ・エ オ ジ ン染 色,脂 カVanGieson染. 姓 ホル. 肪 染 色,エ. ラスチ. 色 に よ り染 色 し,組 織 学 的 検. 起 した 非 特 異 的 肉 芽 腫 を 用 い,肉 芽 性 炎 症 の発. 索 に 供 し た.さ. 現 ・進 展 過 程 に お け る脂 質 の 動 態 を,炎 症 局 所. ち に ホ モ ジ ナ イ ズ し, in vitroの 標 識 脂 肪 酸 取. の 脂 質 組 成 な らび に そ の 各 脂 質 成 分 の 構 成 脂 肪. り込 み 試 験 用 の 試 料 と し て 用 い た.. 酸 の 質 的 ・量 的 変 動 の 面 か ら解 析 し た.そ 果,肉. の結. 芽 初期 に局所 的 に脂肪 細 胞の集積 が起 こ. り この 脂 肪 細 胞 のTGに. 由来 する高度不 飽 和脂. 肪 酸 が 肉 芽 性 炎 症 の 進 展 と と も に りン脂 質 へ 移 行 す る こ と が うか が わ れ た.そ. こ で,肉. 芽 性炎. らに 一 部 の 肉 芽 腫 は,摘. In vivoで の 肉芽 腫 組 織 の 脂 質 へ の標 識 脂 肪 酸 の 取 り込 み 実 験 に お い て は,標 懸 濁 液)を,直 こ のin 下)の. vivoで. 肉 芽 腫 に 直 接 標 識 脂 肪 酸 溶 液 を注 入 す る. つ い て 調 べ た ところ,高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 がPLへ. い,大. 選 択 釣 に 取 り込 ま れ る こ とが 見 出 さ れ た.ま た,. 2.. 球 遊 症 ・単 核 貧 食 細 胞 系 の 浸 潤,後. 期 の線 維芽. だ し,. の 取 り込 み 実 験 で は 生 体 内(皮. 操 作 を確 実 に す る ため に,直. れ に つ ぐ白血. 識 脂 肪 酸(5μl. 接 肉 芽 腫 内 に 注 入 し た.た. 症 巣 で の 標 識 脂 肪 酸 の 脂 質 成 分 へ の 取 り込 み に. 肉 芽 彩 成 初 期 の 脂 肪 細 胞 集 積,そ. 出後直. 径7mmの. 濾 紙 を用. 碁 な 肉 芽 腫 が 形 成 さ れ る よ うに した.. 脂 質 の分析 各 肉 芽 腫 摘 出 後,以. 分 析 を行 な い,肉. 下 に 述 べ る脂 質 の 抽 出 と. 芽 形 成 初 期 か ら 肉芽 腫 増 殖 に. 細 胞の 増殖 の一連 の過 程 が脂質 代謝 の面 にお い. い た る全 過 程 に お け る 脂 質 量,脂. 質 組 成 お よび. て 相 互 に 関 連 して い る こ とが 示 唆 さ れ た.さ. ら. 各 脂 質 分 画 構 成 脂 肪 酸 の 質 的,量. 的 変動 につい. に,肉 芽 性 炎 症 巣 に お け るTGお. 代. て 検 討 した.. よ びPLの. 謝 機 構 と こ れ らの 脂 質 の 機 能 的 役 割 に つ い て も. 実 1.. 病 態 モデ ル. 1). 動. 験. 方. 2). (1:1,. 後 の. 雄 ラ ッ トを実 験 に 供 し た.. 皮 膚切開 を. ン セ ッ トで 背 部 皮 下 に 正 中 線 と直 角. に 両 方 向 に 濾 紙 導 入 路 をつ く り,両 側 背 部 下 に 7%ホ. ル マ リン 紅 浸 し た 直径5mmの 2)を. この 抽 出 液 と切 片 との 混 合 物 をBuchner漏. 斗を. らに5mlの. ク. す べ て の 濾 過 抽 出 液 を分 液 漏 斗 に 移 し た.分 液. 控 内 注 射 して 麻 酔 した. ラ ッ トの 背 部 正 中 線 上 に1〜1.5cmの. 濾 紙No.. 間マ グネチ. ロ ロ ホ ル ム ーメ タ ノ ー ル 混 合 液 に て 洗 浄 した 後,. sodium(50mg/ml)を0.3〜0.4. ml/匹(60〜80mg/kg)腹. v/v)を 加 え, 4℃ で1時. ッ ク ス ター ラー で攪 拌 しなが ら脂 質 を抽 出 した.. 用 い て 吸 引 濾 過 に よ り濾 過 し,さ. 実 験 的肉芽 形成. 行 っ た.ピ. 方 法21)の変. に 対 し20mlの クロ ロ ホ ル ム ーメ タ ノー ル 混 合 液. 1週 間 予 備 飼 育 し た 体 重250g前. Pentobarbital. で凍 結 し,約50μ の. 法22)に て 窒 素 ガ ス 封 入 下 で,肉 芽 凍 結 切 片1g. 静 岡 県 実 験 動 物 農 業 協 同 組 合 よ り12週 齢 で購 入 し,. 脂質 の抽 出. 厚 さ の 凍 結 切 片 を作 製 し, Folchの. 法. 物. Wistar系. 1). 採 取 肉 芽 腫 を 直 ちに‑80℃. 考 察 した.. 埋 め 込 み,切. 濾 紙(策. 洋. 開 部 を縫 合 した.. 全 手 術 操 作 は無 菌 的 に 行 っ た.術 後, 4,. 7,. 漏 斗 中 に5mlの し,. 蒸 留 水 を加 え,激. し く転 倒 混 和. 2層(上 層 は メ タ ノー ル ー水 層,下. 含 有 の ク ロ ロ ホ ル ム 層)に. 層は脂質. 分 離 し た.下. ロ ロ ホ ル ム 層 を分 取 し た 後,更. 層の ク. に 上 層 に30mlの. ク ロ ロ ホ ル ム ー水 混 合 液(1:1,. v/v)を. 加 え,. 再 び 転 倒 混 和 し,下 層 の ク ロ ロ ホ ル ム 層 を分 取 し た.全. ク ロ ロ ホ ル ム 層 を合 わ せ た 液 に,約5. 14, 21, 28日 目 に 埋 め 込 み 濾 紙 周 囲 に 形 成 され. gの 硫 酸 マ グ ネ シ ウ ム を 加 え,混 和 し, 10分 間. た 肉 芽 腫 を摘 出 し,試 料 と し た19)20).. 放 置 し脱 水 した.脱. 肉 芽 腫 摘 出 後,埋. め 込 み 濾 紙 を 取 り除 き. 量. を測 定 し,形 成 さ れ た 各 肉芽 腫 毎 に 脂 質 を 抽 出. No.. 5B)に. 水 完 了 後,濾. 紙(東. 洋 濾紙. て 濾 過 し,窒 素 ガ ス気 流 下 に 濾 液 か. ら 溶 媒 を 除 去 し脂 質 を得,全. 脂 質 と して そ の 重.
(3) 肉芽 性 炎症 巣に おけ る脂 質 代謝 1933 量 を 灘 定 し た. 2). よ り成 る)に 分 離 した.各 分 画 の う ち, PL,. 脂 質 の 分 析23) 24). Glyc.お. 全 脂 質 の 分 画 ・同 定 方 法 の 概 要 をFig. し て あ る,抽. 出 金 脂 質 に つ い て,脂. 体 的 な パ タ ー ン をthin (TLC)で. layer. 検 索 し,各. にphospholipid(PL)よ Gly),. しgasliquidchromatography(GLC)に. (TG),. diacyl. non‑polar E),. wax. v/v/v)を ちpolar. fatty. glyceryl. lipid(NPL; ester(WE)お. Fig.. 1. fatty. acid(FFA),. cholesterol. glycer alcohol. triglyceride. ether(Diacyl. GE), ester(Ch.. よ びhydrocarbon(HC). Separation and analysis PL : Phospholipid P. Gly : Partial Ch : Cholesterol. Glyceride. F. Alc ; Fatty alcohol FFA : Free fatty acid. よっ. 以 下 に,TLC,Thinchrograph,GLCに. lipid(主. り 成 る), partial. cholesterol(Ch),. free. の 分 析 は 試 料 ケ ン化 後 に 脂 肪 酸 部 分 を メチ ル 化. て行 っ た.. 画,即. v/v). に て 各 分 画 の 脂 質 成 分 を抽 出 した.脂 肪 酸 成 分. エチ. 酸=87.5:12.5:1,. 料 を 以 下 の8分. レー トよ り各 分 画 を か き 取 り,ク. 油 エ ー テ ル:ジ. ル エ ー テ ル:酢. P.. よ るTLC分. ロ ロ ホ ル ム ーメ タ ノー ル 混 合 液(1:2,. 開 溶. 媒 系I(石. (F. Alc),. chromatography. 離 後, TLCプ. 媒 系1に. 分 離 症 量 し た.展. 媒 と し て は,溶. ide(P.. 質 分画 の全. 分 画 に 含 有 さ れ る脂 質 の. 量 をThinchragraphyで. 用 い,試. 1に 示. よ びTGは,溶. こよ る. 分 析 方 法 の 詳 細 を 述 べ る. t1)TLCに. こ よ る パ タ ー ン 分 析25)26}. [試 薬 お よ び 蓑 置]:TLCプL一 タ ー ン の 検 索 用 と し てMerck社 レ ー ト,シ em)を. リ カ ゲ ル60FZ5,(G.2mm,10em×10. 周 い,ま. プ レ ー ト,シ. トは,TLCパ 製 のHTLCプ. た,分. 麺iか 碁 取 り網 と し てTLC. リ カ ゲ ル60(0.25mm,20cmx20cm). of lipid components of granulomas TG : Triglyceride Diacyl GE : Diacyl glyceryl NPL ; Non-polar lipid Ch. E ; Cholesterol W. E. ; Wax ester. ester. ether.
(4) 934. 堀. 井. を用 い た.. 夫. (3). ［ 分 析 方 法 ］: TLCプ. ロ ホ ル ム‑メ タ ノー ル 混 合 液(1:1,. v/v)の. 乾. し て 溶 媒 を 除 去 し, 110℃ で2時. 間 オー プ ン 中 で. 活 性 化 し た もの を 使 用 し た.脂. 質 を クロ ロ ホ ル. μlをTLCプ. 割 合 に 溶 解 させ,溶 液10〜50. レ ー トの 下 端 か ら1.5〜2㎝. 置 に0.5〜1cmの 添 加 した.展. の位. 幅 で マ イ ク ロ シ りン ジ を用 いて 開 は,展. 開 溶 媒 が プ レー ト上 端 か. ら0,5〜1cmに 連 す る ま で行 っ た,金 脂 質 成 分 の 一 般 的 分 離 に は 展 開 溶 媒 と し て 溶 媒 系Iを 用 い た. TLCで. 分 離 後TLCプ. レー トに50%硫. 酸を. 噴 霧 し, 110℃ で30分 以 上 加 熱 し,各 分 画 を黒 色 に 炭 化 変 色 させ 検 出 し た.ま. た,試 料 を か き取. り次 の 段 階 の 操 作 を 行 う必 要 が あ る 場 合 に は, I2蒸 気 を 充 満 させ た 槽 中 で 展 開 後TLCプ. レー. 気 に 暴 露 し各 分 画 を確 認 し た.. (2) Thinchrographに. 製Chromarod. 製Thinchrograph. chromatograph. 録 は,島. C,. 18:3(ω‑6),. 査 速 度; 2.96sec/cm,. 40T),の. 条件 で. 2回 空 焼 き した も の を使 用 し た.試 料 は, Thin chrodの. 下 端 か ら1cmの. 位 置 に 約1mg/50μlの. 割 合 に ク ロ ロ ホ ル ム に 溶 解 させ た 溶 液2μlを. 22:4(ω‑6),. マ. 開 溶液は 同様溶. 媒 系Iを. 場 合 と同 様 の 方. 用 い,展. 開 はTLCの. 質 の 各分 画 の 検 出 と定 量 は,水. で分 離 し た脂 素炎 イオン化検. 出 法 に よ り行 っ た.す な わ ち, TLCに. よ り分 離. し た各 脂 質 分 画 を水 素 炎 中 で 燃 焼 させ,水. 素イ. ケ ン 化 法;試. 料(PL,. TGな. タ ノー ル 液 を 加 え,. N2ガ. ス で 封 入 し,室. ャー ト速 度480mm/min,. 検 出 範 囲50〜500mvで. あ っ た.. 温 暗所. ン 化 終 了 後,. に5mlの1N塩. 3mlの. 酸 を 加 え,溶. 間 に し,. 2dmlの. 石 油 エー. ル ージ エ チ ル エ ー テ ル 混 合 液(1:1, 30秒 間 振 盪 混 和 し た.上. テ. v/v)を 層の エー テル層. 層 の 水 槽 に 再 び 上 記 の 混 合 液 を15ml. 加 え 同 様 の 操 作 を 繰 り 返 し,上 を 採 取 し,両. 層 の エー テル層. エ ー テ ル 層 を 合 わせ 脂 肪 酸 含 有 エ. ー テ ル 溶 液 を得 た. .こ. を 加 え 水 層 のpHが. の 液 に 対 し同 量 の 蒸 留 水. 約6に. な る ま で水 洗 を繰 り. ス気 流 下 で 溶 媒 エ ー テ ル を 除 去. し 脂 肪 酸 を 得 た. メ チ ル 化 法:ナ 1〜20mgに. ス型 フ ラ ス コ に 入 れ た脂 肪 酸. 対 し2.5〜3mlの10%. BCl3メ. ル 溶 液 を 加 え よ く攪 拌 し た 後,沸 ス 気 流 下 で,マ 加 熱 還 流 さ せ,メ 却 後,. 10mlの. タ ノー. 石 を 入 れN2ガ. ン トル ヒ ー タ ー を 用 い て5分 チ ル 化 反 応 を 行 っ た.自. 蒸 留 水 と30mlの. え,. 2.96sec/cm(40T),チ. ど)1〜30mgに. KOH‑90%エ. テ ル 層 を 採 取,. 査 速度. 24:. ［分 析 方 法 ］. オ ン検 出 器 に よ り検 出 ・ 定 量 した.分 析 条 件 は, 速2l/min,走. 24:0,. 用 い た.. H2ガ. ス 圧1.3kg/㎝2,流. 22:. 22:3(ω‑3),. 22:6(ω‑3),. 1(ω‑9)を. 20:. 22:0,. 22:2(ω‑9),. 返 し た 後, N2ガ. イ クロ シ リ ン ジで 添 加 した.展. 法 に よ っ て 行 っ た. Thinchrod上. 20:64(ω‑6),. 1(ω‑9),. 液 のpHを2〜3の. ア速. 20:0, 20:3(ω‑6),. 蒸 留 水 を 加 え,更. 用 前 に, H2ガ. 16:1(ω 18:2(ω‑6),. 20:2(ω‑6),. 20:3(ω‑3),. を 採 取,下. 度(走. の16:0,. 18:3(ω‑3),. 1(ω‑9),. 10C/. 使 用 し た.. TFG‑. ス 流 速2l/min,ギ. Silar. 80/100mechを. 標 準 脂 肪 酸 は, NCP社 ‑9) , 18:0, 18:1(ω‑9),. 加 え,. H2ガ. 行 っ た.. ガ ラ ス カ ラ ム を 用 い,. 充 填 剤 に は ガ ス ク ロ 工業製10% Uniport. を用 い た. ［ 分 析 方 法 ］: Thinchrodは,使. 用 い,記. C‑R3Bで. カ ラ ム は, 3mm×3.0mmの. 英棒 に こケ イ酸 を融 着 させ た ケ イ 酸 融 着 ロ ッ ド). ス 圧1.0kg/㎝2,. GV‑6AMを. よ る分. さ15cmの 石. よ. 析 に は 島 津 製gas. 津 製Chromatopack. で 一 晩 ケ ン 化 を 行 っ た.ケ. 担 体 は, IATRON社. S‑II(外 径0.9mm,長. liquid. よ く 混 和 溶 解 さ せ,. ［試 薬 お よ び装 置 ］: Thinchrographに. 10を 用 い た, Thinchrodの. chromatography(GLC)に. 対 し5mlの5%. よ る分 析27)28). 析 に は, IATRON社. liquid. る 分 析29) 30) ［試 薬 お よ び 装 置 ］: GLC分. 間 溶 媒 が プ レ ー トの上. 部先 端 に達す るまで充分 に こ展 開 させ た 後,風. ムに20〜100mg/m1の. Gas. レー トは,使 用 前 に ク ロ. 入 っ た 展 開 槽 に 入 れ,展. トを12蒸. 郁. 然冷. 石 油 エ ー テ ル を加. 60秒 間 激 し く振 盪 混 和 し,上 N2ガ. 間. 層 の石油 エー. ス 気 流 下 に 溶 媒 を 除 去 し,. 脂 肪 酸 メ チ ル エ ス テ ル を 得 た. カ ラ ム の 調 製;内. 径3mm×3mの. の 片 側 に 石 英 ウ ー ル(ガ. ガ ラス カ ラ ム. ス ク ロ 工 業,. Fine‑Bシ.
(5) 肉芽 性 炎症 巣 におけ る脂 質代 謝 1935 ラ ン処 理)を. つ め,そ. の側 か らアス ピレー ター. で 吸 引 し, Vortexミ. キサ ー で 振 動 を与 え な が ら. 反 対 側 か ら徐 々 に こ10% 充 填 し た,他. Sitar 10C/Uniport. Cを. 方 の 端 濠 で 担 体 を約25〜30ml隙. な く詰 め た後,他. 間. 方 の 端 も石 英 ウ ー ル で 封 を し. た.カ. ラ ム の 調 整 は220℃ でN2ガ. minで. 行 い,そ. ス 流 量10ml/. 媒 を 窒 素 気 流 下 で 除 去 し 脂 質 を 得 た,得 脂 質 を 前 述 のTLC分 展 開 し,各. 脂 質 分 画 を 分 離 し,. 析 の 条 件; GLCに. よ る分 析 は,カ ラム. 温 度195→260℃(1℃/minで. 昇 温),イ. ク ター お よび 検 出 器 温 度250℃, ml/min,. FIDのH,ガ. N2ガ. ン ジエ. 用 い た 標 識 化 合 物 は,. 1kg/cm2の 条 件 で 行 い,チ. 気 圧は. ャ ー ト速 度 は2.5〜5. mm/minでChromatopackに. リン ジ で1〜2.5μl(5〜800ngの. 試 料 を 含 有). 18:. 20:4(ω‑6),. あ っ た,. ま た,取. り込 み の 選 択 性 を他 の 脂 肪 酸 分 子 種. の 共 存 下 で 検 索 す る た め に,基. In vitroに お け る遊 離 脂 肪 酸 の 取 り込 み 14C‑標 識 脂 肪 酸 の 分 子 種 の 違 い(鎖 長 ,飽 和 よ る各 脂 質 分 画 へ の 取 り込 み の 違 い に つ 芽 性 炎 症 進 展 時 の 肉 芽 腫 よ り調 製 した. 2.5nmolの14C‑標. A.)と2.5nmolの さ せ,. 質 と し て,罪. A.. . A.. A.. (16:0)とF.. (20:4)とF.. (16:0)とF.. 3)とF. F. A.. A.. 14C‑F.. (16:0),14C‑F.. A.. A.. A.(18:. (18:3)と. よ び20:4),14C‑F. (16:4お. A.. よ び18:3)の. わ せ に つ い て 取 り 込 み 実 験 を 実 施 し た.. よ って 検 討 し た.. (2). 14C‑標. 組織 抽 出液 の調 製. 濾 紙 埋 め 込 み 後14日. 目の 肉芽 腫 を採 取 し,細. 対 し5mlの1/15Mリ. 衝 液(pH. 加 え,. メ ッ シ ュ(100mesh)で. ン酸 緩. 4℃ でPolytronホ. ジ ナ イ ザ ー に て ホ モ ジ ナ イ ズ し,ス. 識 グ リセ ロ ー ル お よ び14C‑標. モ. テ ン レ ス製. 濾過 した濾液 を組織抽. 脂 肪 分 解 時 に 遊 離 脂 肪 酸 と共 に 産 生 さ れ る グ. に, 10nmolの14C‑標. 時 間 と し た.. 7.4)10μlを. 製 した14C‑標. ら に1/15Mリ. ン. 加 え 混 和 し た もの を 200W)し. た.こ. 間 イ ン キ ュベ ー トし,. ク ロ ロ ホ ル ム ーメ タ ノー ル 混 合 液(1:1, を加 え 反 応 を停 止 させ た.さ. らに8mlの. 2mlの v/v) クロロ. ホ ル ム‑メ タ ノー ル 混 合 液 を加 え, 5分 間 振 盪 し 脂 質 を抽 出 し た.抽 心 分 離 し下 層(ク. 出 後, 2500rpmで5分. り ン 酸(54nCi/nmol)で 4.. In vivoに 14C‑標. の調. 識脂 肪酸 液 に ご対 し組 織 抽 出 液1ml. を加 え37℃ で2時. の14C. ‑グ リ セ ロ ー ル(50nCi/nmol)と14C‑グ. 肪 酸(50nCi/nmol)を10. 1分 間 音 波 攪 拌(45KHz,. の 場 合 の イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン 時 調 は1. 基 質 と して 用 い た 標 識 化 合 物 は, NEN社. (1) 14C‑標 識 脂 肪 酸 の 取 り込 み. μlの エ タ ノー ル に 溶解 し,さ. ,上 述 と 同 様 の. 組 織 抽 出 液 と の イ ン キ ュ ベ ー シ ョ ン を 行 っ た. な お,こ. 取 り込 み 反 応. 識 グ リ セ ロ ー ル お よ び14C. ‑標 識 グ リ セ ロ リ ン 酸 を 基 質 と し. 2). 酸 緩 衝 液(pH. 識 グ リ. 琴セ ロ ー ル 部 分 の 脂 質 へ の 移 得 性 を 調 べ る た め. 出 液 と し て使 用 し た.. 5nmolの14C‑脂. (20: 組 み合. セ ロ リ ン酸 の 取 弓込 み. 切 後,組200mgに 7.4)を. 共存. (20:4),. A. (16:0),14C‑F.. A. (18:3),. (16:0お. 4)とF.. A.)を A.. 組 織 抽 出 液 を用 い たin vitroの 取 り込 み 実 験 に. 1). 標. 識 脂 肪 酸(14C‑F.. 非 標 識 脂 肪 酸(F.. 14C‑F.. 14C‑F. 3.. い て,肉. 20:5(ω‑3)で. 肪 酸. 18:2(ω‑6),. 20:3(ω‑6),. す な わ ち,. マ イ クロシ. 注 入 す る こ とに よ り行 っ た.. 度)に. の14C‑脂. 識 脂 肪 酸 を 付 加 し た 場 合 に つ い て も 検 索 し た.. よ り記 録 した.. 試 料 の か ラム へ の 添 加 は, GLC用. NEN社. 18:1(ω‑9),. 3(ω‑3),. ス流 量40. ス圧0.6kg/cm2,空. 12蒸 気 下 で 各 分. を 測 定 し た.. の16:0,. GLC分. て. 画 を 検 出 確 認 し,各 労 画 を か き 取 り,シ ンチ レ ー シ ョ ン カ ウ ン ター に て 各 分 画 へ の 取 り込 み 量. の完 了 は基線 の安 定性 で確 認 し. た.. られた. 析 と 同 様 に 溶 媒 系Iに. 間遠. ロ ロ ホ ル ム 層)を 分 取 し,溶. リセ ロ. あ っ た,. お け る 遊 離 脂 肪 酸 の 取 り込 み. 識 脂 肪 酸 の 憂 子 種 の 違 い に よ る各 脂 質. 分 画 へ の 取 り込 み の 稲 違 を,肉. 芽 性炎症 進展 時. の 肉 芽 腫 に 直 接 標 識 脂 肪 酸 を注 入 す る こ と に よ っ て 検 討 し た. (1). 肉芽腫 組織 中へ の標識 化合物 の注 入 濾 紙 埋 め 込 み 後,. 7日. 目 お よ び14日. エ ー テ ル 麻 酔 下 で 肉 芽 腫 内 に, 識 脂 肪 酸 を25ゲ. 目に 軽 い. 5μCiの14C‑標. ー ジの注射 針 を用い て直接 注入.
(6) 936. 堀. し た. 2お よ び8時. 井. 郁. 間 後 に そ の 肉芽 腫 を摘 出 し,. 夫. 光 純 薬,ク. ロマ トグ ラ フ 用),メ. 純 薬,ク. 肉芽 腫 に 直 接 注 入 す る 標 識 脂 肪 酸 の 懸 濁 液 は, 14C‑脂 肪 酸5μCiに つ き0 .2μlの 生 理 食 塩 液 を. 水 滴 定 用),水 酸 化 ナ ト リ ウ ム(和 光 純 薬,特 級),. 加 え 約30秒 間 湯 浴 上 で 加 温 しVortexミ. 純 薬,定. 1(ω‑9),. 18:2(ω‑6),. 20:3(ω‑6), 3)を. 18:. 20:4(ω‑6),. 20:5(ω‑. 1.. 酸(和 光 純 薬,非. 級),. 10%. boron. trichloride/. 験. 成. 績. 肉芽 腫 の 脂 質 組 成 お よ び 各 脂 質 分 画 の 脂 肪. 1). 摘 出 した 肉 芽 腫 を直 ち に‑80℃. で 凍 結 し,約. v/v)を 加 え15分 間 振 盪 し,更 に,. 肉 芽 腫 の形 成. 肉 芽 腫 はTable. に対 し. ク ロ ロ ホ ル ム ーメ タ ノー ル 混 合 液(1: 4mlの 蒸. 1に 示 す よ う に,そ の 進 展 の. 推 移 を 重 量 で み る と,濾 紙 埋 め 込 み 後4a目. に. は,湿. な. 重 量186.7±3.3mg(平. り,7日. 均 値 ±S, D.)に. 目 に は 最 大 の 大 さ さ289.8±8.8mgに. 留 水 を加 え15分 間 振 盪 して 脂 質 を 抽 出 し,そ の. し, 14〜21日. 後, 2500rpmで10分. 目に は 非 常 に小 さ くな っ た.肉. 間 遠 心 分 離 し下 層(ク. ロロ. 分 取,窒 紫 ガ ス 気 流 下 で 溶 媒 を絵. 4日 圏 〜7日. 去 し,脂 質 を得 た.. 逹. 目に は 減 少 し始 め, 21日 か ち28日 眼 的 な観 察 で は. 圏の 肉 芽 増 大 時 に は 表 面 の 大 部 分. は 白色 の 脂 肪 様 色 調 を帯 び 軟 らか な 状 態 で, 14. 得 ら れ た 脂 質 を 前 述 と 同 様 のTLCに 析 に 供 し た.す. 酸(和 光. 酸組 成の変 動. 50μ の 厚 さ の 切 片 を作 製 し,肉 芽 腫1個. ホ ル ム 層)を. 1N塩. Science社). 実. 18:3(ω‑3),. 脂 質 の 抽 出 お よ び分 析. 20mlの. 量 分 析 用),. methanol(Applied. 用 い た.. (2). 1,. エ タ ノー ル(和 光 純 薬,特. キサー. で 混 和 す る こ とに よ り調 製 し た. 14C‑脂 肪 酸 と し て は , NEN社 の16:0,. ロ マ トグ ラ フ 用),酢. タ ノ ー ル(和 光. 遊 離 脂 肪 酸 の各 脂 質 分 画 へ の 取 り込 み を調 べ た.. な わ ち,溶. 媒 系Iに. 日 目 〜21日 目で は 色 調 は灰 黄 褐 色 で や や 硬 くな. よ る分. り, 28日 目以 降,肉. よ り各 脂 質. 芽 は 退 縮 に 向 っ た(Fig. 2).. 分 画 を分 離 し, 12蒸 気 下 で の 各 分 画 を 検 出確 認. 組 織 学 的 に は,濾 紙 埋 め 込 み 後4日. の 後,各. 目 ま で の 初 期 に は 濾紙 を 囲 む 肉 芽 は脂 肪 組 織 が. 分 画 をか き 取 りシ ン チ レー シ ョ ン カ ウ. 目か ら7日. ン タ ー で 放 射 能 を測 定 し各 分 画 へ の 標 識 脂 肪 酸. 大 部 分 を 占め,一. の 取 弓込 み を調 べ た.. が認 め られ た. 14日 目に は リン パ 球,単. 5.. 潤 を伴 っ た 線 維 芽 細 胞 の 著 しい 増 殖 お よ び新 生. 優 用 した試薬. 血 管,線. 維芽 細胞 球 の浸. 使 用 した 試 薬 は 次 の 通 りで あ る.. 血 管 の み られ る 肉 芽 が 形 成 さ れ,脂. 石 油 エ ー テ ル(展 開 溶 媒 用:和. わ っ て 肉 芽 組 織 が 大 部 分 を 占め る よ うに な っ た.. ケ ン 化 用:半. Table. Each. 光 純 薬,特 級;. 井 化 学,残 留 農 薬 試 験 網),ジ. ル エ ー テ ル(和 光 純 薬,特 級),ク. age. 部 に は,小. result. is mean“ySD. significant. Time-dependent by. one-way. 21日 目 以 降 は,組 織 は ほ とん ど結 合 織 間 質 成 分. ロ ロ ホ ル ム(和. 1 Time course of changes in weight of formalin-soaked filter paper. were. ェチ. analysis. で 占め られ て い た(Fig.. and lipid content. changes of variance. 肪組織 にか. in. of granulomas. granuloma. weight,. (ANOVA). (P<0.01).. 3).肉. induced. lipid. weight. 芽 組 織 形 成初 期. by the implantation. and. lipid. percent.
(7) 肉芽性 炎症 巣 にお け る脂 質代 謝 1937. Fig. 2 Granulomas. Fig.. 3. Histological (A-D,. removed. changes HE. B:. day. 7. D:. day. 21. stain). (•~75), (•~37).. on day. 4-28.. of granulomas A:. day. C : day. 4. (•~75),. 14. (•~37),.
(8) 938. 亀. Table. 堀. 2 Time course. of changes. formalin-soaked. Lipids with. were solvent. patters. tion. of. the. analyzed. by of. filter. paper. Time-dependent. modified. total. and are. in. に お け る脂 肪 組 織 はSudan. 夫. contained. in all. of. diethyl. in granulomas. induced by the implantation. of. Folch. ether:. et. al.,. acetic. applied. to. the. acid=87.5:. chromarod 12.5:. S and. 1,. v/v/v.).. developed Lipid. class. (IATROSCAN). lipid. the. shown. changes. method. ether:. TLC-FID. the. is mean•}SD. 郁. paper. I (petroleum. represent% value. in lipid classes. filter. by. system. were. Results Each. exracted. 井. content.. numbers. of. respective. lipid. experiments. performed. parentheses.. classes. determined. N. were. D.:. different not. significant. periods. determined. by. after tr.:. one-way. the. implanta. trace. ANOVA. (P<0.01).. IIIによ る脂 肪 染 色 に. よ り,ま た 線 維 組 織 は エ ラ ス チ カVan. Gieson. 染 色 に よ り確 認 さ れ た. 2). 肉芽 形 成 過 程 に お け る脂 質 成 分 の 動 態. (1) 脂 質 量 の 変 動 肉 芽 組 織 の 脂 質 含 量 は 組 織 重 量 と異 な り4日 目 に 最 大 値 約50mg(肉 比 率126.6%)を 約45mg(15.5%)と (9.6%),肉 (約5%)に. 芽 の 重量 に対す る脂質 の. 示 し,. 7日 目に は や や 減 少 して. な っ た. 14日 目 に は 約15㎎. 芽 消 退 時(21〜27日. 目)に は 約2mg. な り, 7日 目以 降 の 総 脂 質 含 量 の 経. Fig. 4. 時 的 変 化 は,組 織 重 量 の 変 化 とほ ぼ 平 行 して い た(Table. 1)。. (2) 脂 質 成 分 の 変 動 肉 芽 形 成 の 各 時期 の 肉 芽 腫 の 脂 質 構 成 成 分 の 質 的.量. 的 変 動 に つ い て 検 討 した 結 果 をTable. 2に 示 し て あ る.ま. た,そ. のTLCパ. ター ン を. Fig. 4に 示 して あ る. 濾 紙 埋 め 込 み 後7日. 目 ま で は,全. 脂 質 の 約98. %がTGで. 占 め ら れ て い た が, 14日 目に は そ れ. が 約85%,. 21日 目に 約64%に. 減 少 し,さ. 日 目に は 著 明 に 減 少 して 約6%ま 逆 に, PLは7日. で に な っ た.. 目 まで は,全 脂 質 の 約1%程. で あ っ た の が14日 目 に は 約10%, 25%,. ら に28. TLC pattern of whole lipids extracted from granulomas Lipid samples were applied to the TLC plate and developed with solvent system I (petroleum ether: diethyl ether: ace tic acid=87.5: 12.5: 1, v/v/v). NPL; Non-polar lipid Diacyl GE; Diacyl glyceryl ether TG; Triglyceride FFA; Free fatty acid Ch; Cholesterol P. Gly; Partial glyceride PL; Phospholipid. 度. 21日 目に は 約. 28日 目に は さ らに 著 明 に 増 加 して,約77. %に. 達 し た.そ. の 他,. P. Glyc.,. Ch,. NPLも. 脂. 質 全 体 に 占 め る 割 合 は 少 な い も の の14日. 目か ら. 28日. Diacyl. 目 に か け て 増 加 し た. FFA,. F. Alc.,.
(9) 肉芽 性 炎症 巣 におけ る脂質 代謝 1939 GEの. 各 分 画 に は,肉. 芽 形 成 の 全 過 程 を通 じて 著. 20%,. 変 は 認 め ら れ な か っ た. (3). 濾 紙 埋 め 込 み 後7日 TG,. P. Glyc.,. 目 と14日. PLの. 濾 紙 埋 め 込 み 後14日 Glyc., 3に. PLの. 肉 芽 性 炎 症 進 展 時,即 は こお い て, PLに. 目 の 肉 芽 腫 のTG,. P.. は,. 18:2(ω‑6)が. と 豊 富 で あ り, 16:1(ω‑9), 3〜5%,ま. た,. 16:0,. お り, TGは. 18:. 各 々 約20〜30%. か し,高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 の 前 駆 体 と な る脂 肪 酸,. 18:0が. 18:2(ω‑6),. 18:3(ω‑3),. は,. TGと. 成 が み ら れ た が,. TGに. 20:6(ω‑6),. 各 々約. 20:1(ω‑. b). PLで. は,. の変 化 Table. 銘 べ て20:4(ω‑6),. 16:0,. Table. 3 Fatty. acid. Each. fraction. methylated. by. Methyl. esters. Results. represent. Each. value. * Significantly. 18:1(ω‑9),. is. removed. was. separated. BCI3. in. of. fatty %. meanŽmSD different. P. Glyc.,. PLの. 18:. ‑6)を. of phospholipid,. TLC. (solvent. 7日. 目 と14日. は こお い て も, 16:0,. 約. 7 and 14 days after. by. は,. were. the. total of. 脂. partial. I),. 18:1(ω‑9),. 18:2(ω. 中 心 と す る 組 成 で あ っ た が, 16:0,. glyceride. the implantation. system. 目の 肉 芽 腫 の い ず れ. and. triglyceride. of filter. saponified. 18:. contained. 6 (day. (P<0.05). analyzed lipid. by. with. 5%. alcoholic. KOH,. GLC.. content. 7) or. from. 5 (day the. 14). experiments.. corresponding. values. N.. D.:. on. day. in. paper. methanol. acids. of. TGで. ら れ,. 20:4(ω‑6)が. components. granulomas. 目お よ び14. 肪 酸 組 成 が 比 較 して 示 して あ る。. 18:0,. 認 め ら れ ず,. 3に は 濾 紙 埋 め 込 み 後7日. 日 目 に お け る 肉 芽 腫 のTG,. どがや や 多. 各 々 約10〜20%み. 3(ω‑3)は. 多 く含 有 さ. 肉芽 形 成 過 程 で の 各 脂 質 分 画 の 脂 肪 酸 組 成. ほ ぼ 類 似 し た脂 肪 酸 組. 22:4(ω‑6)な. 18:3(ω‑3)も. れ て い た.. く存 在 す る の が 認 め ら れ た.. 18:2(ω6)が. 飽 和 脂 肪 酸 を主 と し,そ れ 以 外 で. は 比 較 的 不 飽 和 度 の低 い脂 肪 酸 が 多 か っ た.し. ど もわ ず か に 認 め られ た 。. P. Glyc.で. も14日 目 の脂 肪 酸 組 成. は プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ンの 前 駆 体. と な り得 る高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 が 多 く含 有 さ れ て. 脂 肪 酸 組 成 を 調 べ た と こ ろ, Table. 1(ω‑9),. 9)な. 目の 肉芽 腫 の. 脂肪 酸 組成. 示 し て あ る よ う にTGで. 約6%,22:6(ω‑3). 高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 が 多 く含 有 さ れ て. い る の が 認 め られ た.. 各 脂 質 分 画 の 脂 肪 酸 組 成 の 変 動.. a). 22:4(ω‑6)が. が 約2%と. not 7 by. determined.. tr.:. Student's. t-test.. trace.. and.
(10) 940. 堀. 井. 郁. 夫. 0な どの 飽 和 脂 肪 酸 の 変 動 は ま ち ま ち で, 20:. で 存 在 し, PLへ. 4(ω‑6),. れ 以 下 で,. 22:4(ω‑6)そ. の他 の高度 不飽. 和 脂 肪 酸 の 比 率 が 増 加 し た が,こ. れ らの 高 度 不. 約4〜5%, (ω‑6)は. 低 か っ た.. PLに. 20:3(ω‑6)は. 飽 和 脂 肪 酸 の 比 率 は14日 目の 肉 芽 腫 で も極 め て. P. Glyc.で は,高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 の20:4(ω ‑6),. 22:4(ω‑6)が7日. (ω‑9)な. ど の脂 肪 酸 は7日. %以. 18:. PLで ‑6),. は,. 目か ら14日 目に. 18:2(ω‑6)な. GEに. vitroに お け る脂 肪 酸 そ. 識 グ リセ ロー. 20:5(ω‑3)が の 他,. 約2%取. Ch,. , 14C‑グ. Ch‑Eへ. はい. り込 ま れ た 。. リ セ ロ ー ル は, PLに. よ く取 り 込. リ セ ロ リ ン 酸 は,ど. 紙 埋 め 込 み 後14日. の脂質成 分. 20:5(ω‑3))がPLに. リセ. も 比 較 的 よ くPLに 14C‑標. 20:4(ω‑6),. 画 に 多 く取 り込. た,. 18:3(ω‑3)). 取 り 込 ま れ る 事 が 示 さ れ た.. 識 グ リセ ロ ー ル は. た が, 14C‑グ. 各 脂 質 分 画 へ の 標 識 脂 肪 酸 の 取 り込 み を み る. 実 験 で高 度 不. よ く取 り 込 ま れ,ま. そ の 前 駆 体(18:2(ω‑6),. 4に 示 して あ る.. 目 の 肉芽 腫 よ り得. vitroの. 飽 和 脂 肪 酸(20:3(ω‑6),. ロー ル の 各 脂 質 分 画 へ の 取 り込 み に 実 験 の 結 果. と,高 度 不 飽 秘 脂 肪 酸 がPL分. TG,. た 組 織 抽 出 液 を 用 い たin. 濾 紙 埋 め 込 み 後14日 目の 肉芽 腫 よ り得 た 組 織 抽 出 液 に よ る14C‑標 識 脂 肪 酸 お よ び14C‑グ. 各 々. 20:3(ω‑6)と20:4(ω‑6). 以 上,濾. 識 脂 肪 酸 お よ び14C‑標. 18:1(ω‑9)は1. 中 に も ほ と ん ど 取 り込 ま れ な か っ た 。. ル, 14C‑標 識 グ リセ ロ リ ン酸 の 取 り込 み. をTable. は,16:0,. は 各 々 約1〜3%取. 一 方. どの 脂 肪. の他 の 取 り込 み 1) 14C‑標. 約11%が. 18:2(ω‑5)と18:3(ω‑3)が. ま れ た が14C‑グ. 肉芽 臆 脂 質 へ のin. 20:4. ず れ の 脂 肪 酸 も ほ と ん ど 取 り 込 ま れ ず, Diacyl. 酸 は 減 少 して い た. 2.. 下,. り 込 ま れ た.そ. 増 加 して い る の が 認 め. に16:0,. 約14%,. 20:5(ω‑3)は. が 各 々 約4〜5%,. 7日 目 に 比 べ14日 目で は20:4(ω. 22:4(ω‑6)が. ら れ,逆. 約17%,. 約1〜2%,. か け て減 少 す る の が 認 め ら れ た.. るい は そ. 取 り 込 ま れ た.. P. Glyc.へ. 圏 よ り14日 圏 の 肉. 芽 腫 に 多 く含 有 さ れ,逆 に16:1(ω‑9),. の 取 り込 み は 約1%あ. 18:2(ω‑6)と18:3(ω‑3)は. , PLに. よ く 取 り込 ま れ. リセ ロ リン酸 は い ず れ の 脂 質 分 画 に. も 取 り込 ま れ な い 事 が 示 さ れ た 。. ま れ る の が 認 め ら れ た.す な わ ち, 16:0と18: 1(ω‑9)は,約93〜96%が. Table. 4 In vitro incorpolation of [1-14C] fatty acids, [1, 2, 3-14C] glycerol and [1, 2, 3-14C] glycerol phosphate into lipid components of granuloma extracts. Granuloma. extract. containing incubated. 遊 離脂肪酸 の まま. 5 at. (1ml). nmol 37•Ž. [1-14C] for. 2 hr.. in. 1/15M. fatty Results. phosphate. acid, are. [1,. 2,. means. buffer 3-14C] of. (pH. glycerol duplicate. 7.4). was. or. [1,. experiments.. added 2,. 3-14C]. to. the. glycerol. reaction phosphate. mixture and.
(11) 肉芽 性 炎症巣 にお け る脂 質代 謝I. 941. Table 5 Effects of different molecular species of fatty acids on the in vitro incorporation of [1-14C] fatty acids into lipid components of graluloma extracts. Granuloma extract (1 ml) in 1/15M phosphate buffer (pH 7.4) was added to the reaction mixture containing 2.5 nmol [1-14C] fatty acid and cold fatty acid. Results are means of duplicate experiments. Table 6 In vivo incorporation of [1-14C] fatty acids into lipid components of granulomas on day 7 after the implantation of filter paper. Each [1-14C] fatty acid (5pCi/0.2m1) was directly injected into granulomas. The granulomas removed 2 or 8 hours after injection. Results are means of duplicate experiments. 2). 異 な っ た脂 肪 酸 分 子 腫 の 存 在 下 での 真4C‑標. と 同 様 に,. Diacyl. 識 脂 肪 酸 の 取 り込 み. る 他 は,い. ず れ の 脂 質 分 画 に も ほ と ん ど 取 り込. 標 識 脂 肪 酸16:0, 18:3(ω‑3), 20:4(ω ‑6)を ,そ れ ぞれ 鎖 長 お よ び 不 飽 和 度 の 違 う他. GEに. 約2〜3%と. were. ま れ な い 事 が 観 察 さ れ た.. 18:3(ω‑3)は,. PLに. 約3〜4%,. P. Glyc.に. の 非 標 識 脂 肪 酸 の 等 量 と共 に 添 加 した 場 合 の 取. GEに. 約1〜2%取. り込 ま れ,. り込 み をTable. はPLに. 16:0は,標. 5に 示 し て あ る. 識 脂 肪 酸 を単 独 で 添 加 した 場 合. 1)iacyl. 約14〜16%, GEに. 約1〜2%取. り込 ま れ. 約3%, 20:4(ω‑6). F. Glyc.に. 約7〜8%,. り 込 ま れ た.. Diacyl.
(12) 942. 堀. 井. 郁. 夫. Table 7 In vivo incorporation of [1-14C] fatty acids into lipid components of granulomas after the implantation of filter paper. Each. [1-14C]. removed. fatty. 2 or. acid. 8 hours. (5ƒÊCi/0.2ml). after. was. injection.. directly. Results. are. い ず れ の 標 識 脂 肪 酸 も,等 量 の不 飽 和 度 の 異 な る 他 の 脂 肪 酸 存 在 下 で も そ の 取 り込 み に 差 が な く,肉 芽 腫 で の 脂 肪 酸 の 各 脂 質 牙 画 へ の 取 り 込 み は,他. の 共 存 脂 肪 酸 の 存 在 に よ り影 響 さ れ. injected means. into of. granulomas.. duplicate. The. on day 14. granulomas. were. experiments.. な差 が な か っ た. す な わ ち, in vivo実. 験 の 結 果 は,(1)肉. では 標 識 高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 は 注 入 後 早 期 にPL. な い 反 応 で あ る事 が 示 唆 され た.. へ 取 り込 まれ,飽 和 脂 肪 酸 のTGへ. 3.. に は か な り時 間 が か か る こ と,ま た,(2)線. 肉 芽 腫 脂 質 へ のin. vivoに. お け る脂 肪 酸 の. 取 り込 み 目お よ び14日 目 の 肉 芽 腫. 識 脂 肪 酸 の 直 接 注 入 に よ るin. vivo. は 標 識 脂 肪 酸 は 注 入 後 か な り急 速 にPLの らずTGに. 6,. 7日 目の 肉 芽 腫 に お い て はin vitroと 同 様 に 高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 はPLに. 約20〜50%,. り込 ま れ, TGへ. り もは まる か に 多か っ た,逆 1(ω‑9)は, PLへ. 考. 7に 示 し て あ る.. に 約5〜15%取. TGに. の 取 り込 み よ. に16:0お. 約40〜90%取. P. Glyc.. よ び18:. り込 ま れ た が,. の 取 り込 み は わ ず か で あ っ た.高 度 不 飽 和. 脂 肪 酸 のPLへ. 維芽. の 取 り込 み は,注. 入 後2時. みな. も取 り込 ま れ る こ とを 示 唆 して い る.. で の 各 脂 質 分 画 へ の 取 り込 み 実 験 の 結 果 を Table. の 取 り込 み. 細 胞 や 炎 症 性 細 胞 の 集 積 す る成 長 し た 肉 芽 腫 で. 濾 紙 埋 め 込 み 後7日 へ の14C‑標. 芽形. 成 初 期 の 脂 肪 細 胞 が 多 く集 積 して い る 炎症 組 織. 今 回 の 実 験 結 果 は,皮. 察 下 に埋め 込 まれた濾紙. の 周 囲 の 組 織 学 的 反 応 が 次 の よ うな 経 過 を た ど る こ と を示 し て い る.(1)ま. ず,濾 紙 周 囲 に 脂 肪. 細 胞 が 集 積 す る.(2)つ. い で5主 に 増 殖 した 線 維. 芽 細 胞,新. ンパ 球 や 単 球 な どの 浸 潤. 生 血 管,リ. 細 胞 よ りな る 肉芽 組 織 が 形 成 され,こ. れが脂肪. 間 と. 細 胞 集 団 に 置 き巷 わ る.(3)日 数 の 経 過 と と もに. の取. 肉 芽 組 織 は 次 第 に 結 合 織 間 質 が 増 加 し,肉 芽 腫. 2時 間 よ り8時 間 と時 間 が 経 過 し た. 方 が は るか に 多 か っ た, 14日 目の 肉芽 腫 に お い. は 退 縮 期 に 入 る. 一方 ,肉 芽 腫 の 総 脂 質 含 量 は 濾 紙 埋 め 込 み 後. て も,7日. 4日 目 と7日. 8時 間 で大 差 が な く,飽 和 脂 肪 酸 のTGへ り込 み は,. TGへ. 目 とほ ぼ 同 様 の 傾 向 が み られ た が,. の 標 識 脂 肪 酸 の 取 り込 み は 急 速 に 行 われ,. 注 入 後2時. 間 と8時 間 で7日. 目の そ れ ほ ど著 明. 目 で は 大 差 な く, 7日 目以 降 総 脂. 質 含 量 は 組 織 重 量 とほ ぼ 平 行 して 漸 次 減 少 した. 肉 芽 形 成 初 期 の4〜7日. 目には組 織 の総脂質 の.
(13) 肉芽 性炎 症巣 にお け る脂 質代 謝I 大 部 分 はTGで. あ っ た が, 14日 目以 降TGの. 占 め る割 合 は 減 少 し, PLを の 比 率 が 増 加 し た.こ. 943. や ロ イ コ トリエ ン の よ う な 活 性 物 質 の 前 駆 体 と. 中 心 とす る極 性 脂 質. の脂 質分 画の 比率 の経時. して 利 用 さ れ る こ と で あ る. 初 期 肉 芽 組 織 の 脂 質 の 主 要 分 画 で あ るTGに. 的変化 は 濾紙 周囲 にお け る組織像 の経時 的変化. は,脂 肪 酸 と し て16:0,. と関 係 が あ る と考 え られ る.. 0, 18:1(ω‑9), 18:2(ω‑6), 18:3(ω ‑3)な どが 含 ま れ て お り ,脂 肪 分 解 に よ り遊 離. 濾 紙 周 囲 組 織 の脂 質 の 各 分 画 の 脂 肪 酸 組 成 が. 16:1(ω‑9),. 18:. 経 時 釣 に 変 化 す る こ とか ら,肉 芽 性 炎 痙 の 進 展. さ れ た これ らの 脂 肪 酸 と グ リセ ロ ー ル は,そ. 過 程 で 局 所 組 織 の 脂 質 の 活 発 な 代 謝 回転 が 行 わ. ほ と ん ど が局 所 の 細 胞 に お け る エ ネ ル ギ ー 代 謝. れ,各. の 基 質 と して 利 用 され,極. 脂 質 分 画 間 に 構 成 脂 肪 酸 の受 け 渡 しが あ. る こ と が;考え られ る.ま に か け てTGの. ず,. 7日 目か ら14日 目. 比 率 が 明 らか に 減 少 し た の で,. こ の 期 間 に 活 発 なTG分. 解 が 起 こ っ た もの とみ. WE,. HC)やChに. 一 部 がNPL(Ch.. の. E,. 変 換 さ れ る もの と考 え ら れ. る5).. 脂 肪 酸 経 成 に お い て,. し か し,遊 離 した 脂 肪 酸,特 に ω‑3お よび ω ‑6系 列 の18:2(ω‑6) , 18:3(ω‑3)は,. 7日 日に 比 べ て14日 目 で は 明 ら か に 高 度 不 飽 和. 炭 素 鎖 延 長 と脱 飽 和34)‑37)によ り遊 離 型 の ま まで. 脂 肪 酸 の 含 有 率 が 増 加 し て い た.こ. ア ラ キ ドン 酸,エ. られ る. PLやP.. Glycの. こ の期 間 にTGか. の こ とは,. ら遊 離 した 高 度 不 飽 和 脂 肪 酸. が か な り選 択 的 にPL分. 画 やP.. Giyc分. 画 に取. り込 まれ る可 能 性 が あ る こ と を 示 唆 して い る. こ の 推 測 は,肉 vivoで. 芽 腫 脂 質 へ のin vitroお よ びin. の14C‑標. 識 脂 肪 酸 の 取 り込 み 実 験 で も,. 高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 がPL分. 画 に 多 く取 り込 まれ. た こ と か ら支 持 さ れ る.. され,一. イ コサ ペ ン タエ ン 酸 等 に. 換. 部 が プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン や ロ イ コ トリ. エ ン 等 に な り,初 期 の 肉 芽 性 炎 症 に 影 響 を及 ぼ す とい う 前 述 の 第2の 運 命 をた ど る可 能 性 が あ る38),ま た,遊 離 不 飽 和 脂 肪 酸 お よ び そ れ か ら 変 換 さ れ た 高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 は,選 PLに. 択的 に細胞 の. 取 り込 ま れ る こ とが 知 られ て お り39)‑62),. 前 述 の 第3の. 運 命 を経 て 炎 症 の 進 展 に 関 与 し得. 線 維 芽 細 胞 は脂 肪 細 胞 の 前 駆 細 胞 に な り得 る. る もの と考 え ら れ る.濾 紙 埋 め 込 み 後14日 目 の. こ と33)32),脂肪 前 駆 細 胞 が 脂 肪 細 胞 に 分 化 し,さ. 濾 紙 周 囲 は典 型 的 肉 芽 組 織 の 組 織 像 を示 した が,. らに 線 維 芽 細 胞 に 脱 分 化 す る こ と もあ る と い わ. そ のPL分. れ る33).濾紙 周 囲 の 炎 症 局 所 に お け る こ の よ うな 細 胞 の 分 化 ・脱 分 化 の 過 程 も脂 質 分 画 の 比 率 お. 小 板 な ど の 膜 成 分 のPL分 画 の脂肪 酸 組 成15)16)43)44)と よ く類 似 し て お り ,こ の こ と は 肉. よ び 各 分 画 の 脂 肪 酸 組 成 の 変 化 とあ る程 度 関 係. 芽 腫 のPLの. が あ る か も し れ な い.. のPLに. TGの. 減 少 は局 所 に 集 積 した 脂 肪 細 胞 に お け. る 脂 肪 分 解 の た め で あ り, TGの. 分 解産 物 は肉. 画 の 脂 肪 酸 組 成 は 多核 球,単. 球,血. か な りの 部 分 が こ れ らの 細 胞 の 膜. 由 来 す る こ と を示 唆 す る.. 濾 紙 埋 め 込 み 後 比 較 的 早 期 に 形 成 さ れ る脂 肪 細 胞 に 富 ん だ 濾 紙 周 囲 組 織 と典 型 的 な 肉芽 組 織. 芽 性 炎 症 の 進 展 過 程 に お い て 次 の3通. りの 役 割. の 像 を示 す と きの 周 圏 組 織 の 脂 質 分 画 の 脂 肪 酸. を 果 た す 可 能 性 が あ る.そ. TGの. 組 成 の 比 較 か ら, TGか. の 第1は,. 分. ら遊 離 され た 高 度 不 飽. 解 産 物 が 局 所 の 脂 肪 細 胞 以 外 の 細 胞 に取 り込 ま. 和 脂 肪 酸 が 趣 性 脂 質,特. にPLに. れ て,エ. こ とが 推 測 さ れ るが.脂. 肪 酸 だ け で な くTG由. ネ ル ギ ー 代 謝 の 基 質 に な り,細 胞 の 活. 動 を支 え る こ とで あ る,そ. の 第2は,遊. 離脂肪. 酸 が 他 の 脂 質 分 画 に 取 り込 ま れ る こ と な く,直 接 的に プ ロ ス タグラ ン ジンその他 の活性 物質 は こ 変 換 さ れ,炎 の 第3は,. 症 反 応 を媒 介 す る こ と で あ る.そ. TGの. ろ な 細 胞 の 膜,特. 分 解産 物が 一度縄 所 の いろい にPLに. 取 り込 まれ,膜. 取 り込 ま れ る こ とが. 考 え ら れ る.こ の よ う な 推 測 は14C‑標 ロー ル のPLへ. 識 グ リセ. の 取 り込 み のin vitro実 験 の 結. 果 か ら支 持 さ れ る. 結. 語. 構造. の 再 構 築 に 関 与 し た り,ボ ス ホ リパ ー ゼ に よ っ てPLか. 来 の グ リセ ロー ル もPLに. 取 り込 ま れ る. ら再 び遊 離 さ れ て プ ロ ス タ グ ラ ン ジ ン. ホ ル マ サン 浸 漬 濾 紙 埋 め 込 み に よ り惹 起 し た 非 特 異 的 肉芽 腫 を 用 い 肉芽 性 炎 症 の 進 展 過 程 に.
(14) 944. 堀. 井. 郁. 夫. お け る 肉芽 腫 糧 織 の 脂 質 組 成 お よ び そ の 構 成 脂. っ て 影 響 さ れ ず 選 択 性 の あ る反 応 で あ る こ とが. 肪 酸 の 質 的 ・量 的 変 動 を調 べ た.次. 示 さ れ た.4. いで各脂 質. 成 分 へ の 標 識 脂 肪 酸 の と り込 み 試 験 を 行 い 肉芽 組 織 内 で のtriglyceride(TG), (PL)の. . 標 識 した 高 度 不 飽 和 脂 肪 酸 のin. phospholipid. 炎 症 組PLへ. 代 謝 回転 と そ の 意義 に つ い て考 察 し た.. 増 量 が み ら れ,次. 以 上 の 結 果 か ら,(1)肉 芽 形 成 初 期 に 濾 紙 周 囲. 増加 が. に 脂 肪 細 胞 が 集 積 し,そ の た め 組 織TGの. 増加. が み られ る こ と,(2)肉 芽 性 炎 症 の 進 展 と と もに. 起 こ っ た. 2.. の 取 り込 み. に は 注 入 後 長 時 間 が 必 要 で あ っ た.. いで肉芽性. 減 少 とPLの. は 飽 和 脂 肪 酸 が 多 く取. り込 ま れ,初 期 の 炎 症 組 織 のTGへ. 炎 症 進 展 と と もに 線 維 芽 細 胞 の 増 殖 お よ び 結 合 組 織 間 質 が 形 成 さ れTGの. の 選 択 的 取 り込 み は,肉 芽 性 炎. で あ っ た.一 方, TGへ. 肉穿性 炎症 初期 の 肉芽増 大時 に脂肪 細胞 の. 集 積 に よ るTGの. の. 症 の 初 期 で も 肉 芽 腫 彩 成 の 進 ん だ 時 期 で も急 速. 以 下 に,そ の 結 果 を要 約 す る と次 の 通 りで あ る. 1.. vivoで. 肉芽 形 成 初 期 に 増 量 したTGに. どの 飽 和 脂 肪 酸, 18:1(ω‑9)の. は16:0な. TGの. 他 に プ ロス. か ら肉 芽 性 炎 症 初 期 に集 積 した脂 肪 細 胞 でのTG. 減 少 とPLの. 増 加 が 起 こ る が,こ. のこと. タグ ラ ンジ ンの 前 駆 体 とな り得 る18:2(ω‑6),. の 分 解 に よ っ て 遊 離 した 脂 肪 酸 が 局 所 に 集 積 し. 18:3(ω‑3)が. た炎 症 「 生細 胞 の 膜 成 分PLへ. 比 較 的 多 く合 まれ て お り,肉. 芽 形 成 が 進 ん だ 時 期 に 増 量 し たPLに (ω‑6),. 22:4(ω‑6)な. は20:4. 変 換 塔 れ て い る可. 能 性 が あ るこ とが 想 定 され,さ ら に(3)遊 離 した. どの高度 不飽 和脂肪. 脂 肪 酸 は 活 性 物 質 に 変 換 さ れ る か,局. 所に 集積. 酸 が 多 く含 有 され て い た.. し た 諸 細 胞 の 膜 のPLに. 3.. に よ っ て 緩 胞 機 能 に影 響 し,炎 症 の 進 展 は こ寄 与. In vivo,. in vitroい ず れ に お い て も高 度 不. 飽 和 脂 肪 酸(20:3(ω‑6), 20:5. (ω‑3))が. 20:4(ω‑6),. す る こ とが 考 え られ る.. 選 択 的 に 肉芽 腫 のPLに. り込 ま れ る こ とが14C‑標. 組 み 込 まれ る こ とな ど. と. 識 脂 肪 酸 の 取 り込 み実. 稿 を終 わ る にあ た り,終 始御 懇篤 な御 指 導 と御校. 験 に っ て 認 め ら れ た,こ れ らの 脂 肪 酸 の 取 り込. 閲 を賜 りま した佐 伯 清美教 授 に深甚 な る謝 意 を表 し. み は,他. ます.. の 不 飽 和 度 の 異 な る脂 肪 酸 の 共 存 に よ. 文 1). 鶴 見 介 澄: IX.全 代 謝(1984). 21,. 献. 動 物 を 用 い て の 代 謝 研 究 法12)実. 験 動 物 に お け る 炎 症 作 製 と そ の 病 態 生 化 学 的 研 究 法.. 1345‑1357.. 2) Udaka K: Arthus reaction:. in Inflammation,. Immunity and Hypersensitivity,. Movat ed, Harper and. Row, New York (1970) pp. 389-423. 3). 堀 井 郁 夫,宇. 高 奎 二:. 4). 堀 井 郁 夫,礒. 部 竹 雄,宍. Arthus現. 本 免 疫 学 会 誌(1975) 5). 堀 井 郁 夫,宇. 6). 丹 羽 靱 負,横. 6,. 象 局 所 に お け る 脂 質 の 変 動.日. 戸 信 之,宇 5,. 高 奎 二:. 高 奎 二:. Arthus現. 病 理 会 誌(1975). 象 局 所 に お け るlipolytic. 64,. 90.. degradationの. 機 序.日. 430‑432.. Arthus現. 象 局 所 に お け るlipogenic. biosynthesisの. 機 序.日. 本 免 疫 学 会 誌(1976). 416‑417. 山 三 男:炎. 症 の パ ラ メー タ.炎. 症(1981). 1,. 481‑492.. 7) Peck MJ, Piper PJ and Williams TJ: The effect of leukotrienes C, and D, on the microvasculature of guinea-pig skin.. Prostaglandins. (1981) 21, 315-321.. 8) Bravy MA, Cunningham FM, Ford-Hutchinson vascular permeability.. Br J Pharmacol. AM and Smith MJH: Leukotriene B4: A mediator of. (1981) 72, 483-486.. 9) Dahlen SE, Bjork J, Hedqvist P, Arfors KE, Hammarstrom S, Lindgreen JA and Sammuelsson B Leukotrienes promote plasma leakage and leukocyte adhesion in postcapillary venules: In vivo.
(15) 肉芽 性 炎症 巣に おけ る脂質代 謝I effects with relevance to the acute inflammatory -3891 . 10) Ueno A, Tanaka D,. pleurisy.. Morzenti. G,. phosphorylcholine aggregates arachidonic acid metabolism. 12) O'Flaherty. of rat. Prostaglandins. (1983) 26, 493-504 . C , Cassina G and Remuzzi G: Acetyl glyceryl human platelets through two distinct pathways both dependent on Lab Invest (1985) 52, 159-168 .. Livio-Morelli. potentiates. the human neutrophil. degranulating. 5-L-hydroxy. 6,. 8,. 11,. action of platelet-activating. Biochem Biophys Res Commun (1983) 111, 1-7.. 13) Yoshioka S, Nakashima. S, Okano Y and Nogawa Y: Arachidonic. pholipids in murine mastocytoma 27, 939-944. 14). C, and D, in the exudate. JT, Thomas MJ, Hammertt MJ, McCall CE and Wykle RL:. 14-eicosatetraenoate factor.. response . Proc Natl Acad Sci USA (1981) 78, 3887. K and Katori M: Detection of leukotriene. carrageenin-induced 11) Macconi. 945. 井 上 圭 二:炎. P-815 cells: Role of ether-linked phospholipids.. 症 と 血 小 板 活 性 化 因 子.代. 15) Adams DO: The granulomatous. acid mobilization among phos. 謝(1986). 23,. inflammatory. 891‑899. response.. J Lipid Res (1986). .. A review. Am J Pathol (1976) 84, 164. -191. 16) Papadimitrion. JM and Spector WG: The origin, properties and fate of epithelioid cells. J Pathol. (1971) 105, 187-203. 17) Clark RAF, Dvorak. HF and Colvin RB: Fibronectin. tions: Associations. with vessel permeability. in delayed-type hypersensitivity. and endothelial cell activation.. skin reac. J Immunol (1981) 126,. 787-793. 18). 堀 井 郁 夫,宇 高 奎 二:ア. レ ル ギ ー 性 炎 症 の 病 態 機 序 一 増 殖 性 肉 芽 性 炎 症 巣 に お け る脂 質 経 成 の 変 動 とそ の 意. 義.ア. 29,. レ ル ギ ー(1979). 19) Nakamura. 66‑67.. H and Shimizu M: Acceleration. phenomenon of granuloma formation caused by felt. pellet in rats. Eur J Pharmacol (1974) 27, 198-205. 20) Saeki K, Yokoyama J and Wake K: Inhibition of granulation Pharmacol. tissue growth by histamine.. J. Exp Ther (1975) 193, 910-917.. 21) Folch J, Lees M and Stanley GHS: A simple method for the isolation and purification of total lipids from animal tissues.. J Biol Chem (1957) 226, 497.. 22) Bligh EG and Lyer WJ: A rapid method of total lipid extraction. and purification.. Can J Biochem. Physiol (1959) 37, 911-917. 23) Horii I, Isobe T, Shishido N and Udaka K: Quantitative nents in experimental. laboratory. animal models of diseases.. animals.. analysis of serum and tissue lipid compo. II. Analysis of tissue lipid components in experimental. J Toxicol Sci (1976) 1, 94.. 24) Horii I, Shishido N and Udaka K: Quantitative. analysis of serum and tissue lipid components in. experimental laboratory animals III. Analytical method of non-polar lipid and its practical applica tion. J Toxicol Sci (1977) 2, 73-74. 25) Kates M: Techniques. of lipidology:. in Laboratory. Biology, Work and Work eds, North-Holland, 26) Shenstone. FS: Thin-layer chromatography. Techniques. Amsterdam. Johnson and Davenport eds, Wiley-Interscience, Sci (1975) 13, 398-402.. and Molecular. of lipids: in Biochemistry and Methodology of Lipids, New York (1971) pp. 171-194.. 27) Mangold HK and Mukhey'ee KD: New methods of quantitation Chromatogr. in Biochemistry. (1972) pp. 132-146.. in thin-layer chromatography.. J.
(16) 946. 28). 堀. 金子. 弘;. TLC‑FID法. 井. 郁. 夫. の 油 脂 お よ び 脂 質 分 析 へ の 応 用.油. 科 学(1983). 29) Kuksis A, Myher JJ, Marai L and Geher K: Determination chromatography. and computerized. data analysis.. J Chromatogr. 30) Johnson AR and Stocks RB: Gas-liquid chromatography. 32,. 43‑51.. of plasma lipid profiles by automated gas Sci (1975) 13, 423-430.. of lipids; in Biochemistry and Methodol. ogy of Lipids, Johnson and Davenport eds: Wiley-Interscience,. New York (1971) pp. 195-218.. 31) Green H and Meuth M: An established pre-adipose cell-line and its differentiation. in culture.. Cell. 32) Van RLR and Roncari DAK: Isolation of fat cell precursors from adult rat adipose tissue.. Cell. (1974) 3,. 127-133.. Tissue Res (1977) 181, 197-203. 33). 関 谷 敬 三,奥. 田 拓 道:脂. 34). Alfin-Slater. RB. and. 肪 組 織 の 分 化 を調 節 す る 化 学 因 子.実 Aftergood. L:. Essential. fatty. acids. 験 医 学(1986). 4,. reinvestigated.. 10‑16.. Physiol. Rev. (1968). 48,. 758. -784. 35). Leikin like. 36). Al. and. fraction. in. Rosenthal. MD. availability. 37). Biochim. Biophys. Chapkin. RS,. and. 吉 本 谷 博,上. rat Hill. Regulation liver. JR:. Acta VA,. (1986). linoleic. microsomes.. 875,. Marcelo. Biophys. arachidonic from. and. the. by Acta. (1986). a. cytosolic 876,. 300-308.. eicosapentaenoic. glycerolipids. of. lipoprotein. acids. vascular. limits. their. endothelial. cells.. 382-391.. CL. 本 尚 三:ア. acid ƒ¢6-desaturation. Biochim of. release. preparations:. 田 夏 生,山. of. Elongation. thrombin-stimulated. Ziboh. enzyme. RR:. isolated. for. epidermal. 38). Brenner. and. evidence. Voorhees of. JJ:. chain. Metabolism elongation.. of essential J. Lipid. Res. fatty. acids. (1986). ラ キ ド ン酸 カ ス ケ ー ド研 究 の 最 近 の 進 歩(I).蛋. 27,. by. human. 945-954.. ・核 ・酵(1988). 33,. 136‑149. 39). 奥 山 治 美;リ. ン脂 質 分 子 種 組 成 の 制 御 一 最 近 の 進 歩,生. 化 学(1984). 56,. 1239‑1250.. 40) Sugiura T, Onuma Y, Sekiguchi N and Waku K: Ether phospholipids in guinea pig polymorphonu clear leukocyte and macrophages.. Biochim Biophys Acta (1982) 712, 515-522.. 41) Nordq6y A, Lyngmo V, Vartun A and Svensson B: Docosapolyenoic fatty acids and human endoth elial cells. Biochim Biophys Acta (1986) 877, 31-36. 42) Blank ML, Spector AA, Kaduce TL and Snyder F: Composition and incorporation. of. [3H] ara. chidonic acid into molecular species of phospholipid classes by cultured human endothelial. cells.. Biochim Biophys Acta (1986) 877, 211-215. 43) Mahadevappa. VG and Holub BJ: The molecular. species composition of individual diacyl phos. pholipids in human platelets. Biochim Biophys Acta (1982) 713, 73-79. 44) Mountford CE and Wright LC: Organization of lipids in the plasma membranes stimulated cells: a new model.. Trends Biochem Sci (1988) 13, 172-177.. of malignant. and.
(17) 肉芽 性 炎症巣 に おけ る脂質 代謝 1947. Lipid. metabolism. Part. 1.. in. Changes. nonspecific. in. lipid. productive. composition of. each. and lipid. Ikuo of. 700,. formalin-soaked An. filter. increase. tissue. in. in. the. early. phospholipids of. ed. fatty. stage. of. (ƒÖ-6)). fatty. These adipose pholipids changes. acids. and. (20:3. granulomatous. the. in. selective. (ƒÖ-9),. 18:2. and. stage in. tissue. of. growth. 20:5. acids. released. and. 18:3. incorporation (ƒÖ-3)). into. formation. of. granulomatous In. saturated (ƒÖ-3)). fatty. of. investigated.. the. content.. mainly. polyunsaturated. implantation. were. with. triglyceride. (ƒÖ-6). in vivo. (ƒÖ-6),. subcutaneous. parallel. contained. mainly. in vitro 20:4. in. decrease. contained. by. inflammatory. the. triglycerides. Saeki). rats. observed In. gradual. (18:1. (ƒÖ-6),. in. classes was. formation,. granulomas. Rapid. acids. lipid. inflammation.. with. tissue. unsaturated. 22:4. of. increased. growing. and. K.. induced. content. stage. granulomatous. and. paper. triglyceride. School,. Japan. Prof.. was. component. Pharmacology, Medical. (Director:. inflammation. acid. class. University Okayama. Granulomatous. fatty. tissue. HoRII. Department Okayama. inflammatory. of. adipose tissue,. the. early. fatty. acid. Phospholipids acids. in. (20:4. (ƒÖ-6). of radio-labelled phospholipids. stage (16:0) the and. unsaturat. was. observed. in. tissue.. results tissue in in. suggested in. cells lipid. the. that early. fatty. stage. accumulating metabolism. of in. play. by. granulomatous. maturing important. lipolytic inflammation. granulation roles. degradation. in. tissues, the. progress. are and of. also. of. triglycerides. converted that. inflammatory. into these. in phos. dynamic processes..
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