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The Clay Science Society of Japan

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The  Clay  Soienoe  Sooiety  of  Japan

粘 土 科 学 

47

 

2

 

82 − 92

2008

論  文

鹿 児島県 入 来 カ オ リ 物 被膜

伊牟

  Hl

 “ ’

和 江

* *

* *

金 沢 大 学 大 学 院 自然 科 学 研 究 科

920−1192

石 川

金 沢

市角

間 町      

鹿 児 島 大 学 理 学 部

890−0065

鹿 児 島

市郡 元

1−21−35

Formation

 

of

 

Biofilms

 

in

 

lriki

 

Kaolin

 

Deposit

 

Kagoshima

 

Prefecture

 

Japan

Miharu

 

IMUTA

 

and

 

Kazue

 

TAZAKI

* *

℃ raduate  

School

 of 

Natural

 

Science

 and  

Technology

 

Kanazawa

 

University

       

Kakuma −

machi

 

Kanazawa

 

Ishikawa

 

920−1192,

 

JAPAN

     

Faculty

 of 

Science ,

 

Kagoshima

 

University

     

1− 21 −35Korimoto,

 

Kagoshima

 

8900065

 

JAPAN

       

Abstract

   

Red

 

brownish

 microbial  mats  

grow

 on 

the

 surface  of 

drainage

 

pond

 

at

 

Iriki

 

Kaolin

 

deposit ,

 

Kagoshima

 

Prefecture ,

 

Japan,

are 

predominantly

 

iron

 oxidizing  

bacteria .

 

The

 

Fe−bacteria

 

quickly

 

occur

 

on

 

the

 surface  of acidic water  

pH

 

3 , 4

 within  

few

 

days .     The

 

biofnms

 are composed  of amorphous  

iron

 

hydroxides

 

and

 

ferrihydrite

 are 

found

 

both

 

in

 natural  system  and  cultured solution  after 

90

 

days

 under  

pH

 

6→ 2 . 5

 condition

    Optical

 and  

SEM − EDX

 microscopy  showed  

the

 

formatiQn

 

processes

 of 

Fe −

rich 

biefilms

 with  

green

 unicellular  

bacteria

occurred  

in

 

the

 system  of 

deionized

 water  and  

kaolinite

 

blocks .

 

In

 

the

 system

 

Fe

 and  

S −

rich 

biofilms

 around  

kaolinite

 

blocks

can  

be

 seen

 

suggesting

 

kaolin

 minerals  encourage  

to

 

form

 

the

 

biofilms

 as accelerator  

in

 

the

 acidic  

drainage

 

pond .

 

The biofilms

 use 

ferrous

 

ions

 as 

their

 energy  source  

through

 

the

 oxidation  

into

 

ferric

 

ions .

Key

 words

Kaolin

 

deposit ,

 

Biofilms ,

 

Kaelinite

 

Ferrihydrite ,

 

Bacteria

1 .

は じ め に

 

水 面成 長 し ゆ く皮 膜

要 因に は

pH ,

 

Eh ,

流 速

成 分 な ど物 理 化 学 的 条 件L2加 え微 生 物代 謝重 要 な

た し て S

9

鉄 細

に よ る

化 作 用 は 多 く 報 告 が あ

118

珪 酸 鉱 物

ブ リ

ア紀

さ れ てた珪 化 した微 生 物報 告 が あ19

20

さ ら

ア の光 合 成

た め

, 先

ブ リ ア

に お ロ マ イ ト藻光 合 成大 気進 化 を もた ら した と報 告さ れ て

2D

に お

温 泉 地 帯 な ど光 合 成 微 生 物 と珪 素 と 関 わ り

炭 素 や 光 合 成営 ま

態 系

に お

, 鉄

硫黄

の 元生 体 濃 縮 な ど

化 学 変 化

の影響 を水 質

地 質 環 境与 え

報告

22

23

.  

フ ィケ イ酸 塩で は

面 体

頂 点酸 素 を

トが

共有す

に よ

面 体

ト と

トが 結 合 し

カ オ リ ナ イ ト を

1

1

の 八

トの表 面

OH 一

あ り

陽 イ オ に は

2

02 −

面 体

頂 点酸 素 )

4

OH

配 置し て 24

こ の こ とが 水 蒸 気保 持 元 素酸 素 結 合

に し

な ど の

化 学変化

を利 用して 無 機 栄 養 微 生 物生 存

確 保 を可 能に し 25

  本

で は カ オ リ鉱 床か ら

出 す酸 性地 下

沈 殿 池流 入 し

水 面 を 覆 形 成 し

被 膜

特性

つ い 調

カ オ リ鉱 物 と微 生 物 膜りを 明 らかる た め に電 子 顕 微 鏡 観 察

下 水 中

し て 鉄 細 菌自然 培 養 実 験 を 行

ま た

オ リ鉱 床 内塊 (カ オ リ ナ イ ト

オ フル ム の形 成 過 程 を 観 察 し た

. pH

や 電 気 伝 導 度変 化お よ び

被 膜

観 察

2008

年 (平 成

20

年 )

2

10

受 付

, 2008

6

6

日受 理

N工 工

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(2)

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47

巻  第

2

号 (

2008

カ オ生 物

83

微 生

オ リ ナ

に よ被 膜 成 過 程 を明 らかした

2 、 実 験 方 法

試料 2 −1. 研究試

  鹿 児 島県 薩 摩 川 内 市入 来 町藺牟 田 火 山西 麓 入 来カ オ

採掘 跡

,2006 年 10

7

日 に

採取

し た カ オ リ

流 出 す地 下 水 そ沈 殿 池 表 面形 成 さ

れ た

皮膜

に 用

( Fig. 1A ,

 

B

  入 来オ リン の産 状

, K − Ar

年 代 測 定

, 藺牟

山 を

( 35−45

の両 輝

. 1

安 由 岩 類 と

下 位鮮 新 世酸 性 凝 灰 岩 熱 水 変 質作 用

る こ と に よ て生

さ れ た

報告

れ て Z6

ま た

に カ オ リ ナイ トと イ トか

ら なる カオ リ帯 が安 山岩 およ び凝 灰 岩 中不 規 則

に はメ ク タ イ ト帯形 成 さ れ

本 鉱 床 を形 成 した 熱 水 変 質 作 用に よ成 され た の他と し て

ク リ ラ イ ト

CT ,

黄 鉄 鉱

産 出 そ他 詳細 な性

生 成 過 程

報告

さ れ て Z7

2S

  カ オ リ鉱 床 か ら流 れ 出 る地 下 水 は

50cm,

長 さ

30m

に お よ び 地

色 にめ な が ら

殿

れ て

殿 池 全 体光 沢赤 褐 色被 膜 る (

Fig , 1B

矢 印

) .

現 地に お

殿

pH ,

気伝 導度 ( EC ) ,

酸 化 還 元 電位

( ORP

溶 存 酸

DO

) を測 定 し (

Table

 

1 ) ,

沈 殿 池 被 膜形 成 過 程 を明ら か にる た め に

, 沈

殿 池流 入 口 の

ま た

オ リ鉱 物 内微 生 物有 無 を 知る た め

カ オ リ頭 か ら白 色の カ オ リ鉱 物 緑 色脈 が 存 在 す部 分採 取 し

イ オン水

, 自

培養 実

験 を

go

Fig. 6

, 2 −2 .

験観 察

析方法

  粘

土 お よ び 沈 殿 池 被 膜

DAPI ( 4. 6−diamido−2−

Phenylindole )

染 色を ほ ど こ し

, 落 射

蛍 光 顕 微 鏡

オ リ

ン パ ス

AX80

を 用 紫 外 線 照 射 下観 察 し

粘 土お よ び沈 殿 池

被膜

分 散 型

X

線 分 析 装 貴 を備 え た 走 査 型 電 子 顕 微 鏡 (

PHILLIPS −EDX −LQw

vacuum

−XL

 

30CP, 加

速 電

15kV

SEM −EDX

) お ト走 査 型 電 子 顕 微 鏡 (

S−410011 ,1, 6nm ,15kV

( FE −SEM

) を用い て化 学 組 成分 析 と微 細 な 形 態 観 察

さ ら に

,X 線粉

嘱 折

( Rigaku−RINT

 

1200

) (

CuK

α

加 速 電 圧

40kV,

電 流

30mA

) (

XRD

) を用 物 組

A

Fig . 1

                         

・ ・ 一

pm  晦

_ 箪 ・

Location

 map  of 

Iriki

 

Kaohn

 

depos

t .

 

Kagoshima Prefec

re

 

Japan

A

 a

d

 

the

 sampl {Bg 

point

 

in

 

the drainage

 

pond

 which  occurred  red  

brownish

 

biofilms

B

an arrQw

 

The

 samples  were  collected  

from

 

B

 on

Oct . 17ti ‘ 2006

2 3 . SEM EDX

 EDX

よ る化 学 組 成分 析 用

 

Cu

試料 台

の せ て

,Au

ィ ン

接 着 剤は銀

を 用

水 蒸

低真

境 型 走 査 型 顕 微 鏡

( E−SEM

に よ る化 学 組 成分 析 を行

  一

カ オ リ

か ら侵 出 す

1 − 2

に は赤 褐 色変 化 す とか ら

塊 を脱イ オ水 中 に 人 れ

導 度

お よ び

pH

変 化 を

90

間測 定 し

微 生 物増 殖 状 況 を光 学 顕 微 鏡 およ び丿

L

頭 微 鏡 を用 観 察

容 器

付 着

し たル ム

SEM −

EDX

を用形 態 観 蔡 およ び化 学 組 成分 析 を行

Table

 

l .

 

Characteristics

 Qf water  

in

 mining  

drainage

 

pond

 where  occurred  red 

brownish

 

biofilms ,

Samp

e

 

Location pHORP ( mV ) EG ( mS /cm) DO ( mg / 1 ) DO ( %) W

゜ C lnf

ow

 

water

 

of

 

an

 

entrarlce3 . 4 415 1 675 2.5 28 . 221 . 6 CeRter

 

of

 

drainage

 

pond 3 . 4 435 1 . 684 4 5 52. 02

. 4

N工 工

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84

田 吁

田 崎 粘 土 科 学

2 −4 ,

自然 培 養 実 験

 

沈 殿 池 表 面形 成 す イ オ 形 成 過 程 を 明 か に

た め に流 入ロ の地 下 水採 取

ポ リ

製 容 器 に 満た し た水 中ラ イ ド グ ラ

10

を 間を開 け

1

観 察

1

枚 ず ス ライ ド グラ ス

り 出 し 光 学 顕 微 鏡 観

. 容

室 温 (

25 〜 35

軽 くブ タを し静 置

採 取日 か ら

90

間 写 真 撮 影光 学 およ び蛍 光 顕 微 鏡

Wet −SEM

形 態

観 察

 

オ リ鉱 床 露 頭か ら採 取し た

50g

イ オ

水 300cc

中 に室 温静 置し た

 

pH

お よ び 電 気 伝 導 度変 化 を

90

日間 測 定 し

イ オ

SEM

に よ る形 態 観 察

EDX

る化 学 組

分 析

物 質を 光

蛍 光 顕鏡 を 用

て 微 生 観 察 を 行 うと と

, Wet − SEM

た は

Dry − SEM

 

EDX

い て形 態 観 察お よ び化 学組 成を 行

3 .

お よ び

観 察 結 果 3− 1.

 オ リ鉱 床 浸 出 す下 水お よ び沈 殿 池 中

の水 質

, 2006

10

17

日現 地 に お て 測し た

Table 1 pH

流 入

, 沈

殿 池 中心 部

3. 4

強 酸 性 を示

、 ’

¢

Fig

 

2

 

0ptical

 micrographs  of 

bio

lms

 collected 

from

 

drainage

 

pond

A 〜 D

)and cla

s 

in

 

kaoHn

 

deposit

E

 

F

 

Fiuorescence

     micrographs  of 

DAPI

 stained 

bio

lms

 shox

blue

 

bacteria

B ,

 

D ,

 

F

 arrowsl  at 

green

 clayey 

fnms

D ,

 

F

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47

巻  第

2

号 (

20G8

カ オ リ鉱 床微 生 物 被 膜

85

,ORP

415,435mV

と 酸 化 的 あ り

 

EC

1. 675,

1. 684mS

cm

値 を 示 して い

. DO

2, 5,4. 5mg

l

( 28. 2,

 

52. O

) , 水

21. 6,21. 4

流 入

口 の

DO

28. 2

と還 元 的の に対 し

沈 殿 池 中

52. 0

的 で

.ORP

EC

は 流 と池 中 心 部有 意差 は認られ な か

3 2 .

沈 殿 池被 膜 お よ び カ オ リン 鉱 床 の 粘 土

  沈

殿被 膜

に は小 顆 粒 状 物 質 (

1 ・ 3

μ

m

) が 光 学 顕 微 鏡 観 察 さ

Fig , 2A ,

 

c

 

DAPI

染 色で は

青色

光発

し た

( Fig. 2B ,

 

D

矢 印

) .

 

SEM

観 察 お よ び

EDX

分 析

毬 状 突 起 を持 粒 子

O. 3−2

μm

が 互 連 結

そ れ らを 覆 う薄 膜 が

た (

Flg . 3A ,

 

Fig4A

a

こ の 部 分化 学 組 成

,S

Fe

め ら れ

 

Si,

 

Al

微 量

( Fig, 3A

 

x

線 粉 末 回折 分 析 は低 結 晶 性の フイ ト

4. 98,3. 38,2. S6A )

め ら れ る

( Fig.

 

3

 

a ) .

 

こ の毬 状水 中 方

成 長し て

表 裏

に な る が

Fig.

 

4

 

A −

a

) ,

面 方 向粘 土 膜 (

裏 は逆

Fig. 4A −b

) は 平 滑

表 面 方

SEM

で は 六

角 板

な ごり を止

め て お

, EDX

で は

Si,

 

A

2

1

)が 主体

Fig . 4 A −b

な わ ち

面 に 形さ れ た カ オ リ ナ イ ト 主 体薄 膜 を基 盤 と し

,S

Fe

を 含 む栗毬 状 部 分水 中方

拡 大し て

  一

カ オ リ鉱 床露 頭 か ら採 取 した 粘 上 は

白色 粘 土緑 色混 在て い部 分が あ

緑 色の

EDX

に お

Fe,

 

S

と め ら れ た

ま た

こ の部 分

DAPI

蛍 光 染 色に おい て

呈 す

粒状 物質 ( 3

μ

m

前 後 ) が あ

り ,

青 緑 色

の蛍 光 発 色 を示 す塊 状 (直 径

50 −

00

μm ) も

さ れ た

( Fig. 2E .

 

F 、

な お

E

は 同光 顕 〉

こ の 粘 土 部 分

SEM

観 察 によ れ ば

角 板 状粒 子層 状 て お

り ,EDX

で は

Si.

 

Al ( 2

1

の み 化 学 組 成 を示 した (

Fig. 3B ,

 

inset

の部 分

X 線粉 末

O

 

 

    

 

    

 

 

 

0

 

4

     

       

 

h

Hm

01

Fei

lhv

b

  抽 ユ

   

o

   

   

g

  

 

 

    5

   

 

口〕

旧 喞 丶 ガ

O

垣 羊 爻

H20

. U

Kao

iRmlnerEls

o

oc

・ 1

O

O 噸

〔 庄

Kaqiinlle

O

LEiobniit

e

 

C

2

            叡

嚇 輛 丿 嵐

                u

Fig . 3 Scanning

 electron  Inicrographs {

SEM

equipped  with  

the

 energy  

dispersive

 

X −

ray analyses

EDX

)(

A ,     lnset

 and 

X −

ray 

powder

 

diffraction

 analysis 〔

XRD

>(a

f

 

biofilms

 coUected  

from

 

drainage

 

pDnd

A ,

 a

     aiid clays 

in

 

kaolin

 

deposit

B ,

 

b

 

The

 

b

films

 of chestnuts  shape

0 . 3 − 2

μmin  

diameler

which  wears

    

on membranes

 composed  of  

O

 

S

 and  

Fe

A

 

identify

 as 

ferrihydriLe

 with  sulfuL  

The

 

kaolin

 minerals

    

colnpose  of 

the

 

hexagQnal

 

plates

B

 

The

 spectra  

illdicate

 

peaks

  of  

O ,

 

Al

  and  

Si

B ,

 

ins .

eO

     characterized  

kaoiinlte

 and  crstobalite

b

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86

田 吁

崎和 科 学

Fig . 4

 

Scanning

 electron  micrographs  equipped  with  

the

 energy  

dispersive

 

X −

ray analysis

EDX

of 

biofilms

     collected  

froln

 

drainage

 

pond

A

 

Thc

 characterized  shape  of chestnuts 〔

0 . 3 − 2

μln  

in

 

diameter

with

     membranes  which  were  associated  with  

ferrihydrite

 

 

The

 

biofilms

 occurrcd  reverse  side of clayey      

films

回 折 に よオ リ ナ イ トお よび ク ラ イ ト定 し

Fig .

 

3

 

b

3 −3 .

自然 培 養 実 験

3 −3− 1 .

微 生 物 被 膜構 造

  採 取 直 後地 下 水目視 透 明 た が

翌 日 に

赤 褐 色変 化し た

( Fig . 5A

.5

容 器 内 部取 り出 しみ る と透 明で あ

( Fig. 5B

右 )

こ の水

容 器取 り出 し し た もの は

, 60

日 以

L

も容器 を 再赤 褐 色め る こ

採 取 直し は じめ た 水 を 光 学 顕 微 鏡 で 観

察 す細 菌ま ば観 察さ れ

2

日 目に は連 鎖 状

な り (

Fig . 5C

,3

日以 イ オル ム 形 成

Fig .

 

5

 

D ,

 

E

60

日 以光 学 顕 微 鏡視 野 ら れ

粒 子た さ れ て

Fig , 5F

こ の容 器 内

60

pH2 , 5

で あ

採 取

1

囗 目

細 菌

蛍 光 顕 微 鏡

DAPI

染 色に よ る青 色蛍 光 発 色

Fig . 5H ,

な お

,G

は 同

) ,

ま れ に光 合 成む ク ル の赤発 色 を 呈 す め ら れ た

Fig . 5

J

1

同 視光 顕 )

ま た

チ レ ン製 容

中 で 約

3

月 培 養 す る と に よ り形 成 し た 微 生 物 被

N工 工

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47

巻  第

2

 り  

r2

08

カ オ リ 微 生 物 被 膜

87

F

g5  Biofi

ms  

qu

ck ]y eccurrc

d

 

inside

 w

1U   of 廿e cmainer  after 

l − 5

 

days

 

in

 

Fe

rich water  coUected  

frQm

     

draLnage

 

pond

A ,

 

B

〔〕

pticu

microgrn

 

phs

 o

blofitfl

h slltN cccL

Lls 

typed

 

bacter

a alk

r  

2

 

days

C

 and

     

becarne

 

h

gher

 

del

se  Hl

1er

 

3 , 5 ,

 and  

60

 

day

D − F

 

The

 

hlghel

 magnificalion

f

 

the

  optical

    

micrographs

f

 

bacterin

 aher  one  

day

G −・ J

 and  wet scanlllng  e !eetron  mlcrogral

h

 of 

bacteria

K ,     

llll arrow on

 

the

 

w

alt   of  

Po

yc

th

lene 

container

 

nltc

r 

9

〔>

da

s

 coliected  

fronL

 m 「

low 

water   of  an

     mrance

f

 

drall

age 

pDnd

 

Ei

larged

nLurugrtiph  of

he

 

bk

filrns

 Is lLsd m 

K

膜 は 水面 に 形 成 さ せ るこ と

直 接ポ リ チ レ ン製 容 器 成 さ れる の で

, 沈

殿水 表 面微 生 物 被

膜 と は 異 な

物 被 膜 定 着面 が直 接 wel

− SEM

に よ 観 察さ れ た

( Flg 、 5K ,

 

inset

直 斧 約

iOOI

11 微 粍 子 でま れ た網 状物 質蛇 行

張 り 巡ら され る こ り膜を 形 成 し

内側に は 直 径

1−3

μ

m

前 後 毬 状

S

成 長

直 径 約

3

μn の 単 細 胞 微着 床 が 認 め ら れ

Fi9 , 5K

3 . 3 . 2 。 粘

土 と微 生 物関 係

 

鉱 物 中緑 色 部分 (

Fig

 

6

 

A

に は

Fc,

 

S,

 

Si,

Al

め ら れ

元 素 濃 度 グ を 示 し た

Fig

 

6

 

B

 

a ,

 

b,

 

c 、

 

d

こ の

然 培 養 実 験

90

に は自 色

tt

に肉

li

艮的 にも緑 色が 認られ

,90

日 後

pH

60

か ら

2 . 5

に変 化

Fig. 6C ,1

ま た

し た

は さ ら に緑 を深

郡 褐 色

部 分 を 含ん で

Fig . 6C .

 

D

 a

白色

L

基 盤

b

れ ら

1

翔 を ボ イ ドで取 り出光 学 顕 微 鏡 観 察 を行 う

鉄 分ん だ破 片 物

り 囲 む よ

ロ ニ

を 形 成し て 観 察 さ れ た

Fig . 6

N工 工

Eleotronlo  Llbrary  

Figure

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