学
論 文 内 容
要 旨
博士 専攻分 称 博士 医 学 氏 山田 健司
学 論 文 題
腫瘍血管内皮マ あ CXCR7 腫瘍血管内皮 け 機能解析 関 研究 (A functional analysis of CXCR7 expressed in tumor endothelial cells)
背景 目的 近年，VEGF 中和抗体 代表さ 血管新生阻害療法 様々 治療 用い ，生存率 向 し い ．し し，VEGF 正常血管 け 血管新生
要 分子 あ ，そ 阻害 高血 や創傷治癒遅延 様々 副作用 報告さ い . 々 こ 腫瘍血管内皮細胞 Tumor endothelial cell: TEC 分離培 養し，そ 正常血管内皮細胞 Normal endothelial cell: NEC 比較し 染色体異常 あ こ ，抗 剤 薬剤 対 感 性 いこ ，様々 遺伝子 発現 亢進 し 血管新生能 高いこ 報告し た．こ 異常性 獲得したTEC
標的 治療法 開発 ， 腫瘍血管 選択的 副作用 少 い新規血管新生阻害薬 開発 考えた．TEC NEC け 遺伝子発現 DNA Microarray
比 較 し ，TEC NEC 発 現 差 大 た C-X-C chemokine receptor type 7
(CXCR7) 着目した．CXCR7 7回膜貫通型 ン あ ，胎生期 心 大血管形
関 し い ．近年CXCR7 脳腫瘍や前立腺癌 肺癌 様々 癌細胞 発現 亢進し
い 報告さ 肺癌や大腸癌 い CXCR7 高発現 予後 関係 報告さ い . た，前立腺癌 腎細胞癌組織 腫瘍内 血管 い 発現し い こ 報 告さ い . 本研究室 過去 腎細胞癌 分離 培養したTEC い NEC
CXCR7発現 ベ 高い 報告した.し し，TEC け 機能 明 あ
た．本研究 TEC け CXCR7 発現 機能 解析し，CXCR7 標的 した血管 新生阻害療法 臨床応用 可能性 検討 こ 目的 した．
材料 方法 腫瘍血管 け CXCR7 発現 ，CD31 蛍光 免疫染色法
解析した． 臨床検体 医師主 自主臨床研究 プ 従い， 意書 前 得した患者 手術標本 用いた.機能解析 高転移性悪性黒色腫マ 皮 移植腫 瘍 TEC ， ン し 正常皮膚 NEC 分離培養し 用いた．動物
扱い 海道大学動物実験 関 規程 従 た．CXCR7 機能解析 CXCR7 siRNA transfection法 しく CXCR7阻害剤(CCX771 : Chemocentryx 供 ) 用い
CXCR7阻害 行 た．血管新生能 評価 boyden chamber 用いた 走能試験 マ
け 管腔形 能試験 無血清培地培養 け 生存能試験 MTS法 用い た増殖能試験 用い 解析した．シ 解析 Western blotting 法 解析した． CXCR7 ン あ Stromal cell derived factor 1 (CXCL12) 発 現 解 析
qRT-PCR法 ELISA法 用い，CXCL12中和抗体 用い CXCL12-CXCR7
イン機構 解析した．in vivo け CXCR7阻害実験 , シフ ゼ ン フ ションした 高転移性悪性黒色腫 マ 皮 移植し, CCX771 ン し
10% Captisol 毎日1回皮 注した. 遺伝子組 換え 関し 海道大学遺伝子組
換え実験等安全管理規定 従 た．抗腫瘍効果 腫瘍体積，IVIS 肺転移 評価，
腫瘍組織 微 血管密度 Microvessel density : MVD 計測し判定した．各群間 統計
意差あ 判定した．
結果 in vivo け 腫瘍血管 CXCR7発現 マ 皮 移植腫瘍 び 腫
瘍 肝癌 肺癌 大腸癌 解析した こ い 腫瘍血管 い ，正常血管
CXCR7発現 高頻度 認 た．分離培養した TEC NEC 血管内皮 性質 保
い こ 確認した ち，CXCR7発現 比較した こ mRNA， ン TEC
発現 亢進し いた．TEC い CXCR7発現 ノッ ン ， 走能，管腔
形 能，無血清培養 け 生存能 した．し し，増殖能 影響 え
た．こ ，CXCR7 TEC 高い血管新生能 関 し い 示唆さ た．TEC
CXCR7 ン あ CXCL12 刺激 ，ERK1/2 ン酸 さ た ，
CXCR７ノッ ンTEC ン酸 阻害さ た．Akt ン酸 関し 検討し
た ，Akt ン酸 阻害 認 た．こ TEC い CXCR7
CXCL12 結合し，ERKシ 活性 さ 考え た．さ ，TEC CCX771
，CXCR7ノッ ン実験 様 走能，管腔形 能 血管新生能 し
た ，CXCR7 発現 い NEC 対し 影響 え た．CXCR7 ン
あ CXCL12 TEC NEC 比 高発現し ，培養 清中 高濃度 分泌し
いた．CXCL12 非存 い CXCR7 ノッ ン TEC 動能 認 ，
CXCL12中和抗体存 い TEC 動能 認 た．こ ，TEC
け CXCL12-CXCR7 イン機構 そ 高い 動能 関 し い こ 示
唆さ た．CCX771 in vivo治療実験 ，治療開始26日目 時点 有意差 い
腫瘍増殖 抑制 肺転移 減少 認 た．腫瘍組織 MVD CCX771群 有意
し CXCR7阻害 in vivo 腫瘍 血管新生阻害 抗腫瘍効果 た こ
示唆さ た． た，NEC VEGF 刺激 ，CXCR7発現 亢進しVEGFR
ゼ阻害剤 発現亢進 阻害さ た． た， 酸素刺激 CXCR7発現亢進 認
，TEC け CXCR7 発現亢進 し 腫瘍微 環境中 少 く
VEGFや 酸素環境 関 し い 可能性 考え た．
考察 本研究 ，CXCR7 正常血管 比較し 腫瘍血管内皮 発現亢進し い こ
示さ た．TEC CXCL12-CXCR7 イン機構 獲得し，ERK 活性
し 走 管腔形 生存 い た血管新生能 強く関 し い こ 示唆さ た．
CXCR7阻害剤 血管新生 抑制 伴 ，腫瘍増殖 抑制さ 傾向 肺転移 抑
制 た． 後さ 検討 必要 あ ，以 結果 CXCR7阻害 血
管新生阻害 抗腫瘍効果 期待 こ 示唆さ た． 結論
本研究 い CXCR7 腫瘍血管新生 要 あ ，CXCR7 標的 した治療 腫瘍血
