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線 毛 に よ るSerratia
marcescensの
尿 中 で の 凝 集 性 に つ い て
福 岡 大 学 医学 部 小児 科 学 教 室 大 島 久 明 福 岡 大 学 医 学 部 微 生 物 学 教 室 天 児 和 暢 (昭和55年7月21日 受 付) (昭和55年10月14日 受 理)Key words: Serratia marcescens, Pili, Urine, Agglutioation, Urinary tract infection,
Respiratory infection.
要 旨 尿,及 び 喀 痰 よ り分 離 したS.marcescensの 多 くの株 が,ヒ トの尿 中 で凝 集 す る こ とを 見 出 した.24株 中, 凝 集 性 を有 す る株 は,14株 で あつ た.凝 集 性 は,静 置 培 養 の 場 合 に よ く見 られ,振 盪 培 養 で は,凝 集 陰 性 と な る株 が11株 あ つ た.電 子 顕 微 鏡 に よる観 察 で,凝 集 陽 性 株 は,そ の 菌 体 表 面 に 多 数 の 線 毛 を有 して い る こ とが 明 らか に な つ た.線 毛 は 幅 約30A,長 さ約4μmで,い わ ゆ るI型 線 毛 とは形 態 学 的 に 異 つ て い る.凝 集 反応 は,こ の 線 毛 と,尿 中 に 存 在 す る凝 集性 の物 質 との反 応 に よつ て起 る と考 え られ る.こ の 尿 中 の 物 質 は,ミ リ ポ ーア の 濾 過 膜(0.45μm)を 通 過 せ ず,ま た 遠 心(60,000×g)で 沈 降 す る ので,か な り高 分 子 の もの と予 想 され るが,そ の本 態 は,本 研 究 で は まだ 明 らか に され て い な い. 緒 言 尿 路 感 染 症 の 原 因 菌 の1つ と し て,最 近,Serr-atia marcescensの 分 離 例 が 増 加 し,注 目 を 進 め る よ うに な つ て き て い る1)2).そ の 成 因 と し て 基 礎 疾 患 と併 せ て,尿 道 カ テ ー テ ル 等 経 尿 道 的 操 作 の 存 在 も考 え ら れ て い る3).一 方,感 染 症 の 成 立 に 関 す る 病 原 体 側 の 因 子 と し て,最 近,線 毛,あ る い は 菌 体 表 面 の 多 糖 類4)5)に よ る 生 体 へ の 定 着 性 が,重 視 さ れ る よ うに な つ て き た.尿 路 感 染 を 起 こ す グ ラ ム 陰 性 菌 に つ い て も,い くつ か の 菌 に お い て 線 毛 の 存 在 が 報 告 さ れ,そ れ ら の 菌 の 細 胞 表 面 へ の 付 着 に 線 毛 が 関 与 し て い る こ とが,明 ら か に さ れ つ つ あ る.当 然 の こ と な が ら,Serratia marcescensに お い て も,そ の よ う な 線 毛 の 存 在 の 有 無 と,そ の 尿 路 感 染 成 立 へ の 役 割 は,考 え な け れ ば な ら な い で あ ろ う.我 々 は,こ の よ う な 状 況 を ふ ま え て,尿 路 感 染 症 よ り分 離 し たSerratia marcescensに つ い て,そ の 細 胞 へ の 定 着 性 を 検 討 す る 実 験 を 行 な つ て き た が,そ の 過 程 に お い て, Serratia marcescensが,ヒ トの 尿 中 で 大 き な 凝 集 塊 を 形 成 す る こ と を 見 出 し,そ の 反 応 に 線 毛 が 関 与 し て い る こ と を 明 らか に した の で 報 告 す る. 材 料 と 方 法 1. 使 用 菌 株 実 験 に 使 用 したSerratia marcescensは,1979 年10月 よ り1980年3月 ま で の5ヵ 月 間,福 岡 大 学 病 院 中 央 検 査 部 に お い て,尿 路 感 染 あ る い は,上 気 道 感 染 患 者 よ り 分 離 した も の で あ る.Serratia marcescens以 外 の グ ラ ム 陰 性 菌 と し て は,尿 路 感 染 患 老 よ り 分 離 し たPseudomonas aeruginosa及 びP. maltophilia, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris及 びP .mirabilis, Escherichia
別 刷 請 求 先:(〒 814) 福 岡市 西 区七 隈34福 岡大
coli(人 赤 血 球 凝 集 株 を 含 む)を 用 い た .こ れ ら の 菌 も上 記 検 査 部 で 分 離 さ れ た 株 で あ る .又, こ れ ら の 株 は,著 者 ら に よ り,Api解 析 シ ス テ ム (ア ス カ純 薬 株 式 会 社)及 び 通 常 の 試 験 方 法 に よ り再 同 定 を 行 つ た.菌 の 培 養 に は,普 通 寒 天 培 地,又 は,肉 汁 培 地(Difco製) を 使 用 した. 2. 尿 ヒ トの 尿 は,研 究 老 自身 の も の を 排 尿 毎 に 採 取 し て 使 用 した.そ の 他,福 大 病 院 入 院 中 の 尿 路 感 染 患 者,及 び 非 尿 路 感 染 患 者 の 尿 も使 用 した.こ れ ら の 尿 は,採 取 後24時 間 以 内 に 実 験 に 供 した. ヒ ト以 外 の 動 物 の 尿 は,福 大 ア ニ マ ル セ ン タ ー の 協 力 を 得 て 採 取 した. 3. 尿 中 で の 凝 集 反 応 の 判 定 小 試 験 管(1cm径 ×高 さ7.5cm)に 尿1mlを と り,こ れ に 菌 液0.5mlを 加 え て 振 盪 混 和 し, 室 温 で 数 分 放 置 後,凝 集 を 判 定 し た.判 定 は,肉 眼 で の 凝 集 性 の 有 無 で 行 い,肉 眼 で の 判 定 が ま ぎ ら わ しい 場 合 は,混 合 液 の 一 部 を エ ー ゼ で 取 り, メ チ レ ン ブ ル ー で 染 色,光 学 顕 微 鏡 で 凝 集 塊 の 有 無 を 判 定 し た.菌 液 は,液 体 培 地 で 増 菌 さ せ た も の は,そ の ま ま使 用 し た.又,固 形 培 地 で 培 養 し た も の は,白 金 耳 で 集 め0.25Mの 燐 酸 緩 衝 生 理 食 塩 液(PBS) 中 に 混 合 し て 菌 液 と し て 使 用 した. 4. 尿 の 物 理 的,化 学 的 処 理 尿 の 酸 処 理 に は,1NのHClを 尿 に 滴 下 しpH メ ー タ ー でpH 6.0に な る よ う に 調 整 した .尿 の 濾 過 は,ミ リ ポ ー ア 社 製 の メ ン ブ ラ ン フ ィル タ ー(穴 径0 .45μm) を 用 い て 行 つ た .尿 遠 沈 上 清 は,日 立 分 離 用 超 遠 心 機(65P) に て,RP 55T ロ ー タ ー を 用 い,60,000×g, 30分 間 遠 沈 し作 成 し た.尿 の 酵 素 処 理 に は 尿1mlに ト リ プ シ ン(P-L Biochemicals, Inc) 又 は ,プ ロ ナ ー ビ(科 研 化 学 株 式 会 社)を100μg/ml加 え,37℃ 30分 間 処 理 後,そ の ま ま菌 液 を 加 え 凝 集 性 を 判 定 し た. 5. 菌 の 物 理 的,化 学 的 処 理 菌 の 洗 浄 操 作 は,菌 を3,000回 転15分 間 遠 沈 に て 集 めPBSに 浮 遊 さ せ,ピ ペ ッ テ ィ ン グ 及 び 遠 沈 操 作 を5回 く り返 す.最 後 は,遠 沈 後 の 菌 を PBSに 再 浮 遊 し て 菌 液 と し た .酸 ア ル カ リ処 理 は,pH 5.0及 び8.0のPBSを 作 り,こ の 中 に 菌 を 浮 遊 さ せ 室 温 で30分 間 放 置 後 遠 沈,PBSに 再 浮 遊 して 菌 液 と した.同 様 な 方 法 に て0.1% Glutaraldehyde, 0 .02% Hibitaneに 浮 遊 さ せ,そ れ ぞ れ の 薬 剤 で の 処 理 を し た.音 波 処 理 は,菌 液 を 小 試 験 管 に 入 れBranson音 波 処 理 機 を 用 い20W で60秒 間 処 理 後 遠 沈,菌 をPBSに 再 浮 遊 さ せ 尿 中 で の 反 応 を 見 た. 6. 電 子 顕 微 鏡 に よ る 観 察 菌 の 観 察 は,影 つ け 法,及 び ネ ガ テ ィ ブ 染 色 法 を 用 い て 行 つ た.影 つ け 法 は,菌 を2%酢 酸 ア ン モ ニ ウ ム 水 溶 液 中 に 浮 遊 さ せ,そ の 一 部 を パ ス ツ ー ル ピペ ッ トで 電 顕 用 の 銅 製 の グ リ ッ ドに 乗 せ る.グ リ ッ ドは,EM材 料 社 のNo.200を 使 用 し,こ れ に 常 法 に 従 い フ ォ ル ム バ ー ル 膜 を 張 つ た も の で あ る.菌 を 乗 せ た グ リ ッ ドは,酢 酸 ア ン モ ニ ウ ム 液 で2 ,3回 洗 い 乾 燥 後 蒸 着 装 置(Edwards E 301型,電 子 ビ ー ム蒸 着 装 置 付 ,日 酸 エ ドワ ー ド社)に 入 れ,タ ン グ ス テ ン を40度 の 角 度 か ら約 40Aの 厚 さ に 蒸 着 した.ネ ガ テ ィ ブ染 色 は ,2% 燐 タ ン グ ス テ ン酸(pH 7.0)を 用 い て 行 つ た.菌 液 を カ ー ボ ン で 補 強 した フ ォ ル ムバ ー ル 膜 を 張 つ た グ リ ッ ドに 乗 せ,こ の 上 で 燐 タ ン グ ス テ ン酸 と 混 ぜ 余 剰 の 混 合 液 を 濾 紙 で 吸 い 取 り 自然 乾 燥 後 鏡 検 した.な お,グ リ ッ ドは 使 用 前 グ ロ ー 放 電 に よ り親 水 化 した.大 き さ の 計 測 は,ネ ガ テ ィ ブ 染 色 法 を 用 い,カ タ ラ ー ゼ 結 晶 格 子 の 大 き さ を 基 準 と して 実 測 値 を 計 算 した.使 用 した 電 子 顕 微 鏡 は , 日立HU-12A型 で 加 速 電 圧75KVで あ る. 結 果 1. ヒ ト尿 中 で のSerfatia marcescensの 凝 集 性 液 体 培 地 で 増 した 菌 を そ の ま ま,あ る い は 固 形 培 地 上 の 菌 をPBSに 浮 遊 さ せ た 後,人 の 尿 に 加 え 振 盪 す る と数 分 で 肉 眼 で 充 分 見 う る 凝 集 塊 を 作 る(Fig.1).凝 集 塊 は,光 学 顕 微 鏡 で の 観 察 で は 尿 中 物 質 に 細 菌 が 付 着 凝 集 し て で き て い る も の で あ る こ とが は っ き り 認 め ら れ た(Fig.2) . Serratia marcescens以 外 の グ ラ ム 陰 性 桿 菌 と し
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Fig. 1
The agglutination of S. marcescens in
human urine.
Left: Agglutination positive strain (US5)
Right: Agglutination negative strain (US3)
Fig. 2 Light micrograph of bacterial aggligate of strain US5 of S. marcescens stained with methy-lenhlue.
pneumoniae, Pr. mirabilis, Pr. vulgarisに つ い て
の 性 質 を 調 べ た が,い ず れ も 陰 性 で あ つ た(Table 1).又,Serratia marcescensに つ い て は,呼 吸 器 疾 患 患 者 の 痰 よ り分 離 さ れ た 菌 株 に つ い て も調 べ た が(Table 1),尿 中 で の 凝 集 性 は 尿 路 感 染 分 離 株 に 特 異 的 な 反 応 で は な く,呼 吸 器 感 染 分 離 株 に も陽 性 株 が 多 く見 ら れ,又,尿 路 感 染 分 離 株 に も 陰 性 株 が 見 出 さ れ た.一 方,尿 の 違 い に よ る 凝 集 性 の 有 無 を 調 べ る た め,多 数 の ヒ ト(健 康 者,及
Table 1 Agglutination of several Genus of bacteria in human urine
* Strains isolsted from urine of patients with
urinary tract infections.
**
Strains isolated from suputum of patients with respiratory infections.
び 尿 路 感 染 者,非 尿 路 感 染 者)よ り尿 を 採 取 し, 凝 集 陽 性 株 陰 性 株 に つ い て 凝 集 性 の 変 化 を 調 べ た が,凝 集 陽 性 株 は,す べ て の 尿 で 陽 性 反 応 を 示 し,陰 性 株 は,す べ て 陰 性 で あ つ た.こ の こ と は,ヒ トの 尿 で あ る 限 り こ の 反 応 は,極 め て 再 現 性 の 高 い も の で あ る こ と を 示 し て い る 。 2. ヒ ト以 外 の 動 物 尿 で の 凝 集 性 ヒ ト以 外 で の 動 物 尿 で の 反 応 を 知 る た め に ヤ ギ,モ ル モ ッ ト,ラ ッ ト,ネ コ,イ ヌ,ウ サ ギ の 尿 を 用 い て 調 べ た.ヒ トで の 凝 集 株 も ヒ ト以 外 の 尿 で は,全 例 ヒ ト尿 で み ら れ る よ う な 凝 集 現 象 は 観 察 さ れ な か つ た. 3. 培 養 法 と 尿 凝 集 性 Serratia marcescensの 尿 で の 凝 集 性 は,菌 の 培 養 法 に よつ て 変 化 す る.静 置 培 養 菌 の 方 が 陽 性 に な る 率 が 高 い.Table 2は,尿 路 感 染 分 離 株 (US)と 呼 吸 器 感 染 分 離 株(SS)の 各 株 を 静 置 培 養 と振 盪 培 養 の 後 に 凝 集 反 応 を 見 た も の で あ る. 両 条 件 で 凝 集 す る 株 は3株,静 置 培 養 条 件 の み で 凝 集 す る 株 は12株,両 条 件 で 共 に 凝 集 しな い 株 は 9株 で あ つ た. 4. 凝 集 陽 性 株 と 陰 性 株 の 形 態 Table 2の グ ル ー プ 中 よ り 凝 集 陽 性 株 と して US 1,陰 性 株 と し てUS3を 選 び,そ れ ぞ れ 影 つ け 法 を 用 い 電 顕 で 観 察 し た(Fig.3, 4).US 1
Table 2 Culture conditions and the agglutinability of S. marcescens in human urine
* US indicated the strain isolated from urine
and SS from sputum.
Fig. 3 Elctron micrograph of shadowed preparation of strain USI.
Fig. 4 Electron micrograph of shadowed prepara-tion of strain US3.
Table 3 Proportion of the piliated cells in the strain of S. marcescens cultured in different conditions.
* S meant stationary culture and A aerated
culture. で は,そ の 表 面 に 多 数 の 線 毛 が 見 られ た が ,US3 で は,こ の よ うな 構 造 は 見 ら れ な か つ た .次 い で 線 毛 の 人 き さ を ネ ガ テ ィ ブ染 色 法 を 用 い て 計 測 し た.US 1の 線 毛 は,幅30A,長 さ 平 均0.4μm, 最 も 長 い も の は,0.51μmで あ つ た. 培 養 条 件 に よ り凝 集 性 が 変 わ る こ と と 線 毛 の 発 生 の 関 連 を 調 べ る た め,Table 2に 示 した 株 の う ち,い くつ か の 静 置,振 盪 両 培 養 条 件 に て 増 殖 さ せ,そ れ ぞ れ に つ い て 電 顕 下 で 線 毛 を 有 す る 菌 を 数 え た(Table 3).両 条 件Fで 凝 集 す る株 は, い ず れ の 条 件 下 で も85∼100%は 線 毛 を 持 つ て い る.静 置 培 養 で の み 凝 集 す る 株 は,静 置 培 養 で は 80%以 上線 毛 を 持 つ て い る が,振 盪 培 養 で は10% 以 下 に 減 少 して い た.又,両 条 件 下 に て 凝 集 陰 性 株 は,両 条 件 に て10%以 下で あ つ た 。 5.血 球 凝 集 性 と 尿 凝 集 性 の 関 係 線 毛 を 有 す る菌 は,赤 血 球 を 凝 集 す る能 力 を 有 す る例 が 多 い6).尿 凝 集 株 の 有 す る 線 毛 の 血 球 凝 集 を 人,及 び 羊 の 赤 血 球 を 用 い て 調 べ た が,い ず れ の 血 球 も凝 集 しな か つ た.少 な く と も,こ の2 つ の 血 球 に 対 し て は ,こ の 線 毛 は 凝 集 性 を 示 さ な い と 言 え る.一 方,E.coliの5株 は,ヒ ト赤 血 球 を 凝 集 した が,こ れ ら の 株 は 全 例 尿 中 で は 凝 集
昭 和56年1月20日 29 反 応 は 陰 性 で あ つ た. 6.尿 の 凝 集 能 に お よ ぼ す 物 理 化 学 的 処 理 の 影 響 尿 の 凝 集 性 はpH6.0以 下 で は 消 失 した が,タ ソパ ク分 解 酵 素 処 理(ト リ プ シ ソ,プ ロ ナ ー ゼ) は 影 響 を 与 え な か つ た.凝 集 能 は,0.45μmの 濾 過 板 を 通 過 せ ず,ま た,60,000×g,30分 の 遠 心 で 沈 澱 した. 7菌 の 物 理,化 学 的 処 理 に よ る 凝 集 性 の 消 失 l菌の 凝 集 性 は 洗 浄 や 音 波 処 理 の よ う な 物 理 的 処 理 で は,そ の 凝 集 性 に 変 化 は 見 られ な か つ た が, Glutaraldehyde,Hibitane等 の 化 学 的 処 理 で は 凝 集 性 は 消 失 した.し か し,pH5.0の 酸 処 理 で は 凝 集 性 は 保 た れ て い た.蛋 白 分 解 酵 素 処 理 は,凝 集 性 に 影 響 を 与 え な か つ た(Table4). Table 4 The influences of various treatments
on the agglutinability of S. marcescens in human urine. 8.色 素 産 生 性 と 尿 凝 集 性 分 離 さ れ たS.marcescensの 色 素 産 生 性 を,普 通 寒 天 培 地 上 で 室 温 で2日 間 培 養 す る こ とに よつ て 調 べ た が,色 素 産 生 株 は,一 株 の み で あ つ た. こ の 株 は,尿 凝 集 性 を 示 した が,色 素 産 生 性 と尿 凝 集 性 は,特 に 関 係 は な い も の と考 え られ る. 考 案 最 近,グ ラ ム 陰 性 菌 の 線 毛 の 存 在 とそ の 感 染 へ の 役 割 が 注 目 さ れ て い る.E.coli 6),Klebsiella 7), Neisseria gonorrheae 8),Proteus 9)等 で は,上 皮 細 胞 へ の 定 着 に お い て そ の 線 毛 の 存 在 が 重 要 な 因 子
とな つ て い る こ とが報 告 され て い る.今 回,我
々
は 臨 床 よ り 分 離 され たS.marcescensの
多 くの
株 が,尿 中 の物 質 と凝集 現 象 を起 こす こ とを観 察
した.凝 集 を 起 こす株 と起 こ さな い株 の電 子 顕 微
鏡 に よ る形 態学 的観 察 か ら,凝 集 陽 性 株 は全 て線
毛 を 有 して い る こ とが 明 らか に な つ た.ま た,培
養条 件 に よ り凝 集 反 応 が起 こつ た り,起 こ らな か
つ た りす る株 の形 態観 察 で も線 毛 の 出現 と凝 集 反
応 の 有無 が 完全 に 共軌 した事 柄 で あ る こ と も確 認
され,凝 集反 応 は菌 の線 毛 が尿 中 の物 質 と反 応 し
て 起 る現 象 で あ る こ とは 間 違 い な い もの と思 わ れ
る.
これ まで 知 られ て い る線 毛 の な か に は,機 械 的
外 力 に弱 く,音 波 処 理,頻 回 の 洗 浄 で脱 落 す る も
の も知 られ て い るが,本 実験 で は,こ れ らの処 理
は尿 で凝 集 性 に影 響 を 与 えな か つ た.こ れ は,こ
の菌 の 線 毛 が これ らの操 作 に よつ て脱 落 しな いた
め凝 集 性 も消 失 しな い もの と思 わ れ る.こ の菌 の
線 毛 は幅30Aで,E.coli等
で知 られ て い る血 球
凝 集 性 を 示 す,い
わ ゆ る1型 線 毛6)10)より細 く,
又,よ
り柔 軟 性 に 富 ん で い る よ うに 見 られ た.線
毛 自体 の こ の構 造 の 差 が,物 理 的外 力 に よ り脱 落
しに くい 原因 で は な いか と思 わ れ た.こ の線 毛 の
形 態 学 的,化 学 的 本 態 を 明 らか に す るに は 線 毛 の
分 離 精 製 を含 め,さ らに 多 くの 実 験 が 必要 で あ ろ
う.
この線 毛 と反 応 す る尿 中 の物 質 に つ い て は,ま
だ そ の本 態 は 明 らか で は な い。 現 在 まで に 知 られ
た事 実 は,ヒ
トの尿 に特 異 的 に 存 在 す る もの で あ
る こ と,尿 路 感 染 尿 のみ な らず,多
くの ヒ トに 普
遍 的 に存 在 す る もの で あ る こ と,超 遠 沈(60,000
×g,30分)で
沈 降 し,0.45μmの
濾 過 板 を 通 過
せ ず,か な り高分 子 物 質 で あ る こ とな どで あ る.
蛋 白分 解 酵 素 の影 響 は,ほ
とん ど受 け な いの で,
蛋 白 が そ の重 要 部 分 を しめ て い る の では な いだ ろ
うと思 わ れ る.最
も可 能 性 が あ る の は,尿 路 粘 膜
の分 泌物(例
え ば ムチ ン様 物 質)11)12)では なか ろ
うか と考 え て い る.
尿 路 感染 に お け る この 凝 集 性 の 役 割 につ い て
は,ま
だ多 くの こ とは言 え な い.尿
中 に,こ
の
よ うな 物 質 が 存 在 す る こ と は,侵 入 し て き たS. marcescensを 凝 集 塊 と して,排 尿 時 に 体 外 に 排 泄 さ せ て し ま う機 会 が 多 く あ る の で は な い か と考 え ら れ る.し か し,一 方,凝 集 塊 と な つ た 菌 は, 尿 路 粘 膜 に 親 和 性 を 増 し尿 路 へ の 定 着 性 が 向 上 す る可 能 性 も,現 状 で は 否 定 で き な い.又,菌 の 線 毛 に よ り,尿 路 上 皮 に 定 着 し て し ま う こ と も 充 分 あ り う る.こ れ は 凝 集 性 物 質 が,本 来,上 皮 細 胞 よ り分 泌 さ れ る も の で あ る な ら考 え う る こ と で あ ろ う. 一 般 に,S.marcescensは 基 礎 疾 患 の あ る 患 者 に て 臨 床 的 に 有 意 な 菌 数 が 分 離 さ れ て も,何 の 臨 床 症 状 も伴 わ ず,抗 生 物 質 の 投 与 な しに カ テ ー テ ル 抜 去 の み に て 自 然 消 失 す る 例 も多 い と言 わ れ て い る3).実 際 に 我 々 の 使 用 した 尿 由 来 のS.mar-cescensも 半 数 以 上 が,尿 道 カ テ ー テ ル 抜 去 の み に て 自 然 消 失 して い た.こ の こ と は,S.marces-censは 健 康 者 で は 尿 路 に 定 着 しに く い 状 況 に あ る と も考 え られ,尿 で の 凝 集 は,む し ろ 生 体 に と つ て は 有 利 に 働 い て い る と考 え た 方 が 良 い よ う に 思 わ れ る. 稿 を終 わ るに あ た り菌 の分 離 に 御 協 力 頂 い た 福 大 病 院 中 央検 査 微生 物 部 門,村 上 紀 文 氏,及 び動 物 尿 を 採 取 し て い た だ い た ア ニ マ ル セ ン タ ー の 方 々 に 感 謝 致 し ま す. 本 論 文 の 要 旨 は 第45回 日本 感 染 症 学 会 西 日本 地 方総 会 に お い て発 表 した. 文 献
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Pili-mediated Agglutination of Serratia marcescens in Human Urine
Hisaaki OHSHIMA
Department of Pediatrics, School of Medicine, Fukuoka University, Fukuoka
Kazunobu AMAKO
Department of Microbiology, School of Medicine, Fukuoka University, Fukuoka
