Title
Platelet protein kinase C isoform content in type 2 diabetes
complicated with retinopathy and nephropathy( 内容の要旨
(Summary) )
Author(s)
木村, 美香
Report No.(Doctoral
Degree)
博士（医学）乙 第1282号
Issue Date
2001-10-16
Type
博士論文
Version
URL
http://hdl.handle.net/20.500.12099/14986
※この資料の著作権は、各資料の著者・学協会・出版社等に帰属します。
氏名 (本籍) 学位の種類 学位授与番号 学位授与日付 学位授与の要件 学位論文題目 審 査 委 員 木 村 美 香(岐阜県)
博
士(医学) 乙第1282 号 平成13年10
月16 日学位規則第4条第2項該当
Platelet protein kinase Cisoform contentin type2diabetes COmPlicated with retinopathy and nephropathy
(主査)教授 安 田 圭 吾 (副査)教授 中
島
茂 教授 石 塚 達 夫 論 文 内 容 の 要 旨 糖尿病性細小血管合併症の発症･進展機序の詳細は未だ不明であるが,高血糖,高血圧,各種糖化蛋白質など と共に,血小板機能異常の関与が示唆されている｡すなわち,糖尿病患者血小板では,血小板凝集能の元進,イ ノシトールリン脂質代謝元進,およびアラキドン酸放出の増加･ノトロンポキサン産生増加などが報告されている｡ 一方,糖尿病性細小血管合併症の発症･進展に高血糖によるproteinkinaseC(PKC)の活性化が重要な役割 を果たしていることが判明しつつあるが,血小板凝集機能にイノ㌢トトールリン脂質代謝を介したジアシルグリ セロール産生の増加やPKC活性化の関与が指摘されている｡我々も,これまで糖尿病における血小板機能異常 の械序を解明するため,血小板凝集能,イノシトールリン脂質代謝(PI回転)などに対する,in vitr｡でのスル ホニル尿素札 インスリンの影響などについて報告してきた｡ 今回我々は,血小板における各種PKCisoform(a,β,()活性と血小板凝集能,糖尿病合併症及び糖尿 病治療などとの関係を明らかにする目的で･治療中の2型糖尿病患者における血小板cytosol,membrane,CytO-Skeleton各分画のPKCa,β,(各isoform含有量を測定した｡ 対象および方法 2型糖尿病患者20名(男性7名,女性13名,25-68歳,インスリン治療8名,スルホニル尿素剤7名,食事 療法単独5名)･および健常者5名(男性3名･女性2名･25-35歳)を対象とした020名中14名が網膜症を, 12名が神経症を,9名が腎症を有していた｡3名は合併症を有していなかった｡空腹時に採血,直ちに遠心血 小板を採取,一部を血小板凝集能検査に用いた｡血小板浮遊液からcytosol,membraneおよびcytoskeleton各分 画を得た｡各画分の蛋白30FLgをSDS-PAGEにより分離し,Westernblot法によりニトロセルロース膜へ転写し た0このニトロセルロース膜を,PKC a,β,(特異抗休と24時間反応させ,enhanced chemiluminescence(EC) 法で各PKCisoform免疫活性をⅩ線フイルム上に検出し,レーザー≠ンシトメーターを用いて解析･定量化 (健常対象者1名のcytosolのPKC活性を100%として計算)した｡ 結果と考察 血小板凝集能の元進は,糖尿病20名中7名で認められたのみであった｡スルホニル尿素剤やインスリン治療が 凝集能を改善していた可能性が示唆された｡ 各分画中のPKCisoform(a,β,()含有量は全ての検休で一律にcytosolで最も多かった｡健常対象者と 糖尿病者の各分画血小板PKCisoform含有量に有意の差はなかった｡このことは,血小板PKCisoform含有量 が凝集能,血糖コントロール,雁病期間,合併症など多くの因子によって影響を受けることを示唆した｡ 網膜症を有する糖尿病患者の血小板各分画のPKCβは,網膜症を有さない糖尿病に比べ増加傾向を示したが,-97-統計学的たは有意でなかった｡糖尿病性腎症におけるisoformの検討では,蛋白尿の有無では差はなかった｡し かし,腎機能低下のない(Cr<1.5mg/dl)糖尿病患者血小板cytosol画分のPKCβは,健常対象者および腎機能 の低下(Cr≧1.5mg/dl)した糖尿病患者に比べ有意に増加していた｡さらに,糖尿病患者血小板のcytosol画分 のPKCβは血清クレアチニン値と有意な負の相関関係を有していた(p<0.05)｡ 各糖尿病治療の血小板PKCisoformに対する影響の検討では,スルホニル尿素剤治療の糖尿病患者の血小板 PECβ含有量は.健常対象者およびインスリン治療糖尿病患者のそれに比べ有意に増加していた｡また,血糖 コントロール指標であるグリコヘモグロビン値と血小板PECisoform含量の間に有意の相関はなかった｡ これらの結果から,腎機能の低下のない(Cr<1.5mg/dl),スルホニル尿素剤治療の糖尿病患者では,血小板 PKCβ活性が増加するが,インスリン治療あるいは腎機能低下の存在下では,血小板PKCβ活性が低下するこ とが考えられる｡今回調査した検体ではたまたまインスリン治療糖尿病患者においてクレアチニンレベルが有意 に高値で,いづれの因子がPKCβ活性低下に影響をおよぼしたのか確認する事が出来なかった｡しかし,もし, インスリン治療がPKCβ活性低下作用(効果)を有するとすれば,PKCβ括抗剤と同様,インスリン治療が糖 尿病の細小血管症に基づく合併症の進展を抑制する可能性を示唆するものである｡ 論文審査の結果の要旨 申請者 木村美香は,糖尿病合併症の発症･進展における血小板機能,_特に血小板PKCa,β,(各isoform の関与を明らかにするため,2型糖尿病において食事療法,スルフォニル尿素剤治療,インスリン治療の各治療, および糖尿病網膜症,神経症,腎症の血小板PKCisoform含量に対する影響を検討した｡その結果,インスリ ン治療が血小板PKCβ含量を低下させる可能性,血清クレアチニン値がPKCβと負の相関関係を有すること, などを明らかにした｡これらの成果は,糖尿病合併症の機序解明に資するばかりでなく,糖尿病臨床においても 重要な意義を有しているものと認める｡ [主論文公表誌]
Platelet protein kinase Cisoform contentin type2diabetes complicated with retinopathy and nephropathy
Platelets2001;12:138∼143
