Studies on Marine Bacteria Produclng Lytic Enzymes〜VI Effect ofInorganic Sa圧s on the Retease of Lytic Enzyme from Bacterial Celis

】うull．F；lC．ⅠγisIlりMie Univ．  

N（j．8：61叫7i   Octo】〕erl，1981  

Studies on Marine Bacteria Produclng Lytic Enzymes〜VI   Effect ofInorganic Sa圧s on the Retease of  

Lytic Enzyme from Bacterial Celis 

Isao SuGAHARA，KoichiroIiAYASm，Toshio KIMIJ】ミÅ  

and Akihiko MA・rSUOKA  

Facしl圧y of Fis‡1eries，Mie U11iveま一Sity   

1、Ⅰ−e erfect ofino】1那Inic salts on tile王・eiease oflyticellZyme、VaSinvesとigal e（lusing   bacteriaicells of stl・aillVう7 gl・0、Vn for 6 0r 8110urSin polyl）el）tOne・yeaSt eXtraC仁   王11ediunlCOnはining O．5n101e／Iof NaCl．  

No】・e王11al・lくable effect on theliberaとion oflytic eIIZyme WaSObserve（lby O．5InOie／工   OfinorgaIlic salt＄uSe（1in軌is stu（ly．   

Chlol・a叩頭enicolat t】1eCOnCentr言ItionoflO厘／】111（1id notcauseinhil）iとion ofenzylTle   ヱ■e】e；lSe by strain V37．  

AmonきざVarious chelⅥicaまs，tl・iton X−100（0．1％）active to bacteriaIce】1111ell痛raIle   Seer11e（ltoi）e effective for tile elution oflytic engyme fl・Om Ce11s of＄tl−ain Vう7．  

Key words：marine bacteria，Iytic cnzyme   

11＝he previous papers（SuGAiIARA et al．1978，i980，1981），Strain V37isolated from   COaStalwaters grew wellin thc medium without addcdinorganic salts，but could not  

extraceuulary】〕rOducclytic enzyme， Amonginorganic salts tested，NaClor KCIwas   lⅥOSt effective for the product主0†10flytic ellZymel〕y StraillV37，  

Thc production of extracellular enzymes may be mainly separatedilltO tWO   processcs；tlle nCt Synthesisof enzyme and the followlngliberation from bacterialcells・  

A rlumber of pa13erS have been r叩C：rtedon cnzyme release froml）aCterialcells（KustlNElモ  

aIてd PoLLOCKi96l，PoLI−OClく1961a，i961l），1962，Cou；S a11d GROSS1967a，1967b，LAMPEN   1967，MALVEAUX and SAN CLEMEN・rEi967，SAlモGENTどょ（‡J．i969，SARGENTan（lLAMPEN1970）．  

However，iittle work has been recorded on the relcasc oflytic enzyme− According to   PoLLOCK（1961b），thelil〕eration appeared to rcquire an enzymic reaction，Sinceit was   telT叩el−ature＋depe】1（lent and did not occt王r at PH vaヱuesless t】1an6．0，and tま1e e王1ZylⅥe  

was not eltlted from the ceilsoflhciilus subtilis by hlgh concentrations of salts．  

AltllOL唱11itllaS110t bee11denlOnStrated w王1et！1er t壬1e release oflytic enzyIⅥe行onl   V37celis was e11Zさ′111ic oJ●王10と，t】1ei）reSe雨S抽dy was disignatedとO Cjar塙7the roje of  

inorganic salts on the extl−aCCliular prodtlCtion oflytic enzyme by strain V37．   

62   Sl、（；．＼‖．ヽ＝．＼．1し＼1■．＼ゴ＝l．1く＝＝■t巨＼；l】1（1ト1．＼・l・ドし■川（．＼  

nletI10ds   

Assily Of bilCtCriolyticitCtiヽ・ity  

Lytic activity was determined as described prcviously（SuG斜IARA elal・1976，i978，  

1卵9，1980）．   

Culturc of strain V37producingl）・tic enzyrrLC  

CしIlture of strain V 37 capal）le oF pro（hlCinglytic enzyme was carried out as   desc川）ed pl●eViotlSly（SuGAI】！AIモAど＝‡g．i978，1980）．  

Relcasc oflytic cnzymc from bacteriillcells  

Cells of strain V37were grown 之江300Cror 60r8110しl】一S WitllS】1alくi欄iIlう00  

111j SaiくagL！Clliflas！くS CO‡1taif川1g2う0Illiofi30iypeptone・yeaSt eXぐま膚aCtlT）edimll．鮎cとeま−jal   Cells，harvcsted by centl・ifugation，WerC WaShed twicc wit王1SOlution to bc tested an〔1   resしISi〕ellde（壬iI＝lle Same SOlし1tioIltO glVe al〕Outl．ノ2」′ノづ・Of tlle Or喝inalvoluIlle・Fcr tlle   rclease exper主ment，10．O mlof this sLISPenSion wasincubated at300C fcr2hours with  

Shaki11g，and centriftlgCd at13，000 × g for 20 minutes at O Oc．The supernatant  

SOltltio11S，aftel■＼VaSili11g t王1e Ceiis aIld 二行olⅥi11CしぬationlⅥix仙▲e ねri elease experilTle11t，  

WCre aSSayed fcr bacteriolytic activity after dialysIS against distilled water for3hours  

at5 0c．  

Results   

Time eollrSe Of rele乱Se Oflytie enzyme   

I】10r（lel▲to（1etel−111i11e aPl）Ⅰ明）riatei11Cul）atiolltiIlle fcr tlle‡ elease oflytic ellZy11−e  

frorn strain V37ce11s，Cells grown fcr6and8hGurS WerellarVCStCd by centrifし喝ation，  

WaShed twicc with distilled watcr，and tllen reSuSPendedin dist主1led water・Ce11   Sし1Sl〕eIISioIl（IO．01111）wasi11Cubated atう00C witllS董1乙lくirg，a王1（ice王1tl・ifし喝ed仁O reI】10Ve   tllel）aCLerialcells at tlle times sllOWIl．Tlle Stll）el・ilatallt S（）1しItions cbtこirled wel−e  

assayed for bacteriolytic activity after dialysIS against distilled waterl  

As s】10Ⅵ7Ili11Fig．1，i11tlle CaSe Of tlle Cells g】一OW11ねr6IlOurS，tIle decreaseillt王1e   Opticaldensity or cellsuspcnsion wasobservcd dtlrirgincub乙ticまぺ：al30ut42・う％cf thc   Originalcells seellled tol〕elysed玩汀一410urS Ofi！1CtlぬtioIl■ だowevel■，t蜃1ere、㌔一asI−O   appreciable difreI・e11Cei111ytic と1Ctivity released fl■0】ⅥCells fしril？Ctlbation tinてeぐrlto   4】10ur鼠  

0】↑ tile Otller ha】1d，i11tlle Cells grow】1foI・8110urS，tlle（1ecreaseilltile（叩ticai  

density was very siight：about5．3％for2hours alld a130ut12．0％for4hotu・S．Never−  

tileless，1ytic activity Hl〕erated froITICells（iid noti】1Cl・ease for4王10urS Ofircul）atioIl．   

It waslikely that thei11CrCaSeinlytic activity released from celis was】ニOt（1ircctly   associate（iw汀h‖le decl−eaSeiilO担jcaiderlSity ofぐeiまsLIS王）ellS呈0】1・ Lytic之Ctivity】つ1ay  

Ⅲ〕erate frol¶l）aCtel・ialcelIs of straiIlV37i11CellsuspellSio11Witllinlll仇汀tm流汀111is  

coIld主tion．   

Mari11e Bactelイia‡）】・odtlCi咽1JyticEnz〉rn−eS−VI   63  

5   0  

＞l一≧︼U屯 じこ千一  

1  2   3  4   1  2   3   4  

Reactior＝ime（11「）   Roao一泊nllnleくぎ1r）  

C釧s grow11fol  C釧S grOV州 for  

8ilr   811r   

Fig．1．Time course of relcase oflytic enzyme from V37cells gl．OWninl）0】ypel）tOne−yeaSt   extl・aC亡】11ediしl慮11CO】1taining N之ICl（0．うI1101e／り．CF；iytic ac＝vi仁さr Of ctllture filtl ate，  

W：1ytic activitylibel・ate（lfroIllCells（lしIriれg WaSlli咽，R；lさ′tic acとivity】一elease（】frolll   Cells（11汀i咽1nCubation．   

Effcct of temperature on ttlC rCleilSC Oflytic enzyltlC   

Strai11V37cellsgrown for6and8110しげS WereilarVeSted sel）aユーately by ce−−けiftl・  

gatio11，WどSIled twice with distilied watcr andl−eSuS】〕elldedin〔1isti11ed water・Ccll   suspe11SiollS（10．Omり werei11Cul〕ated for2I10ul−s at tlle fo1lowi‡−gtelT】Feral：tlre：0，10，  

20，30，利〕鋸1dう00C．   

Fig．2sllOWS tlle effect of tell叩el・atし汀e Ol一】tlle 肋e】・atioI− Oflytic eIIZyl−1e rrOl−−  

strai】1V37cellsgrownil＝11e】11editlm COntaini咽0．う】1101e／′lof NaCl・T】−ere WaS nO   l膚emarkablc differenceinlytic activity rcleascdfromstrain V37cclls grown for6hours，  

aMlO帽11t】le decreasein cl〕ticaldensity of cellsuspel？SioIli−−CreaSe（1withincl eaSi】1g   te‡1叩el・attl】・el）etWeen O a11d400C．   

On the other harld，thcliberation oflytic act主vity from cells grown for8hours   increased withincreasⅢg temPCraturel）CtWCCn Oand400C，and thendecreasedslightly   atう00C．There may bc diffcrent mechanism of enzyme川〕erationl）etWCC11Cells grown  

for（§110u∫S alld ＝10Se for8llOtlrS．   

Su（jAIIA】lA，を王AYASl‖，KⅢUlくA and MArrSUOlくA   64  

ぎ∽こ茎こむ0 こ岬 宗冨し0老 中0訳  

︵U      5  

0 10 20 30 40 50   0 10 20 30 40 50  

Rea帥Oilte汀叩eralし】re〈心c）   Rea（〕l昭一＝即叩闇加現C）  

Ce要‡s〔j‡■OWrlfor811r   Cel短∬i■OV川ior8妻1r  

Fig．2．Effect of ten叩eraとureon tlle reまease ofl〉′tic enzy11−e fl−Om V37cells gl◆OWnin   ド01yl〕el丸011e・yeaSteXtl・aCt】lleditlmCOIltai！1i帽NaCl（0．うIl10le／り．CF；1yticactivity   ofcし11tui・e fi旺ra略ⅥJ；lさ′tic activit〉rⅢニel・ated行olⅥCells dし11・i】1g WaSIling，R；1ytic   acとivityI・eleased fro111Cel】s（lul◆inglnCu短旺km．  

Effcct of plIvaluc on thc relcilSC Ofl）▼tic cIlヱyme   

illOrder to dell10nStrate tlle effect of pH value on tlle 川〕eratio王10flytic ellZyIⅥe   fro111Strai】1Vう7ce11s即OWnin tllelllediu11て COntai11i11g NaCl（0．う】110まeノノ1），Tris・HCl  

ご誘こむPニむ0こー宗讐岳名二〇訳  

5    〇．  

h豆＞こひ佗 Cこト﹂   〇．〇↑   

Od   

○  ば〉  ⊂⊃  の  C〉  幻  C〉  ⊂〉 く0 （￡〉  卜・ 卜・ 0：〉  ∝〉  00 （⊃  

事）H of 代引津orlflllXtLjre   【）H oす「eao篭‡0日 nllXhげ℃  

Cei妻S9「OV州 for8！1r   Ce事fs9rOWn fo】−8llr  

Fig，3．Effec仁OfI）Iil′alue o】1tlleI・eleaseoflytic enzy】11e fl・OnlVう7celis gl●0、Vni111）Ol〉リ】e王）tOne−  

yeast extl・aCtllle（liunlCOntaini主唱NaCl（0，5mole／1）．′エ、ris・HCll〕u汀e】・waS しISe（las pl−l  

紬1utio11．C王γ；Ⅰさ，とic activitさr Of culture filtl・ate，W；1y仁ic activityliberate（lfl●0Im Cells（it汀iI帽  

waslュ毒ng，Ⅰそ；iytic activit〉r released f王・OlllCells（】l11−i帽＝−Ctib之Itio−−・   

Ma】・ineIヨacたeria ProdllCii唱LyticEngy王ⅥeS−ⅤⅠ  

bしIffer was used for washing and sus】〕ending the ceus（Fig．3）．No significant differencc   WaS Observcdin thelytic activityln WaShing solution and that relcased from ceils at   I）H valtleSl〕etWeen6．O and8．0．Above8．うOfl）H v…11tle，tlle release oflytic e11Zyme   WaS Stimulated．The decreaseirlinitialopticaldcnsity of thc cclls grown for6hours  

WaS aboしIt90−94・％at】）王1values frqlⅥ6．O to9．0．  

Fig．4sllOlVS the effect of王）H valtle On tile release oflytic eIIZyllle uSi11g Tris・HCl  

btlf（er containlng O．5mole／lof NaCl．Thc decreaseininitiaiopticalde11Sity durlng   2 hours ofincubation was about38N96％in the cells grown for6 hoLlrS and about  

26M87％in the cells grown for8hours．The maximし1m川）eration oflytic enzyme was  

Obscrved at pH valucs from9．O tolO．0．  

5    〇．  

言＞こ0の0こゝJ  

くっ  しゎ （⊃ lの  C〉 1の  O Cl O  の （⊃  の  C〉  の  く⊃ （⊃  

ミロ （D 「ヽ  卜・ の  00  ロ〉  ○   くD （D  卜．lヽ． ∞  CO  ロ） く⊃  

PH of「ea（川0】1r†1iXtUre   F）H of r（うa（〕いOrlrmXtL汀Q  

C釧S那OW11†0「8】1「   celts9‡■0㈲n for8」恒  

Fig．4．Effect ofl〕H value on t圭一e relea＄e OfIytic enzyme 二行0In V 37 cells gl◆0Ⅵ＝−in   ド01y】：e！）tOneうreaSt eXtraCt111ediuIm COntainil鳩 NaCl（0．うmo】eハ），Tris・HClbuffer   containil鳩0．う1mOie／lof NaCIwas used asl）‡王soltltio11．CF；1ytic ac仁i＼′iけ Of   Ct‡lture filtl・ate，Ⅵ′りytic activ圧y 川〕erated fl■0王11CelIs dし11■ing waslllng，R；Iyとic   activiとyl・eleased from cel】s dしIringlnCし1bation・  

Effect ofinorganic salts on thc release oflytic enzyme  

Ⅳ乳Cl，ⅩCl，artifici乳Iseawater；Fiきざ．5sllOWS tlle effect ofi110rga11icsaltsontlle  

liberation oflytic cnzyme fromstrain V37ceils．For washlngand suspending solution，  

distilled water，artificialscawatcr，NaCisolution（0．5moIc／i）and KCIsolution（0．5   mole／1）were used．Stl・ai11V37 was grow11in thc media without added NaCland  

CO】1taiIli11g NaCl（0．5moie′′′′1）for6a】1d8110tlrS・   

111t王1e CaSe Of cells growllilltllelllediし11Ⅵ WitIlOしIt added NaCl，‡10S脚1ifica11tlyt■ic  

activity was ol〕Sel・Vedin washing solution andin thc supernata11t Of ce＝ suspcnsion   

d6   S一丁GJもJ∧ま′tiモ〜l，！JAY′tSli】，iくf鈷壬U柁A a】1d M。もTSUOJ（A  

ご誘こむ℃ニぎこ欄宗冨﹂0むp言訳  

0  5  

5        c⁚  

雲き0﹂u．ご；霊雲仙9至て  

−∵∴・  

一∵∵、−‥∴てニ ーー∴∴・       亘 Z      ＜ Z   ^＜ Z  

rl】e（jiし川1  

medlunl  

WltilOt】l   COrlta圭！11日g   洲IilOしI1  

ad血d N8CI   NaCl   鋸怖血 NaC】   NaCI  

C釧S9「0鞘1for611r   Ce】ls伊℃裾1†or8ll「  

Fig．5．Effect ofinol▲ganic だalts（artificialseawatell，NaClaIld KCl）on t壬1e reiease of   lytic ellZy−11e rl−om V37cellsgI・owninl）01yl：引）tOne・）reaSt eXtl−aCt−Ⅵe（王ia w旧−OLlt   ad（きed NaCland containing NaCl（0．うmole／l）． CF；lytic activity of culture   filtl・ate，W；1ytic acとivi丹Iibel・ate（lfroIⅥCe11s dul・ing waslling，Ⅰミ；1ytic activity  

release（1froiⅥ Ceils dt汀ingincubatio11，DW；disti11e（lwater，ASW；al■tificial   Seawater．  

usiIlg any O‡1e Or distiiied＼Vater，artificialsea＼棋ILei・，NaC呈a11d KCユsolし壬t主o11S．  

011tlle OtlleI・iland，i11t壬1e CaSe Of cells gro＼＼7】1i】1tilelllediしIm CO11tai11i帽NaCl，tlle   levcloflytic elつZymC releascd from cclis was co17Sidel・ablein dist汀kd watcr rather   thanin artificialseawater，NaCialld KCIsolutions，although the decrcascin optical   dc17Sity of ce11suspension using dist汀kd watcr was very slight：about33％in the ce11s   grown for6hours alてd ollly8％in thc cclis grown for8hours．NaCland KCIseemed   tollaVe110erfect oiltユ1elil）eratiolュOflytic e】1Zyllle frolⅥCells of strain Vう7・  

LiCl，MgCl望，CaC12，Na2SO。，Ⅹ2SOヰ，もi2SOヰ；As sllOWl1iIIFig．6，t】1e decrease   iilOPticalde王てSity of celまsとjSPe】1S主0】1WaS】1egligi】）ユe except for78．8％ of decrease fol   

LiCl， Lytic activity reicased from ce11s grown for6 hours was not so slgnificant by   thc treatl17ent Of everyinorganic solution tol）C tCSted． Cells grown for8hours also   Showed）10Clla閥Cin optiぐaider！Sity by thc treatmcnt of MgCl望，CaC12，Na2SO4，K望SO。  

an（1Li2SO．．Slight川〕eration oflytic enzyme was observed when MgC12WaS uSed for   WaSlli】1g and suspelldi咽tlle Cells of strai11V37．  

MgSO．l，Ⅳa‡‡2PO。，N払Ⅳ0る，N軋Cl；As silOWllin Fig．7，t】1eOpticalde11Sityofcell   StlSPeIISioIl（1ecIでaSe（la加ut う7−69％ of origi11alcellde11Sityi】1NaNO8 and NHヰCI  

SOj11tioIIS．Tlleiel′まofユibeユ・atjcIlOflytjc eilZyille froユ11Ceilsl）y NaNO3 WaS Sligiltly  

high as comparcd with that by NaCl▲ No remarlくable effect on the releasc oflytic   e11ZyIlle WaS Ol）SerVedI）y tlle a〔lditiollOf MgC12（0．う11101eノ／りi11tO NaCl（0，うlⅥ01e／′1）  

so王utio】1．   

Marine‡うactel■ia pro（111C川虜LyticEng押1eS一Ⅴ‡   67  

首∽∪名二警：意む重器﹂崇竜ヤ0訳  

︵U   5  

ザOSNコ   

YOSN叉  

竹OSへ．ゐZ   

N一〇将0   

．⁚一じ打ち﹂   

一︵︶一﹂  

．〇SNコ   

州．OSN叉   

WdS蒜Z   

N一じ和0   

いぃ一〇ロてム   

ー〇コ  

Cel【s grown for   Ce‡ls9「OWn for  

611「   8 tlr   

Fig．6．王三frecと0ぎillOrganic salts（ⅠィiCl，MgC12，CaC12，Na望SO l，K2SO．1aIld Li2SO l）0Iltlle   I・elease ofl〉rtic e】1ZyエⅥe rI・OlⅥ V 37 ce‖s grow11in】〕Oiy】〕el）〔0Ile・さ7ea釦 eXtl・acと  

Ille（iimllCOntaining N之ICl（0．う王110：e／1）．Ci？；lさ−ticact汗ity orculturefiitl・aは，W；1ytic   achvit〉71il〕el｛ated行0】11Cells（1しIri帽WaSll；ng，Ⅰモ；l）′tic activityl■elea冥e（1fl・O111Cells  

dtlrir唱111Ctlbation．   

Effcct of glllCOSC O11tliC rCleilSC Oflytic cnzymc  

As sllO＼Vni‡1Fig．7，altil仇嘱h‖1e ad（iitioIlOf glし1COSe（3gノ′1）s】10Wed tlle decreasei11   0Ptjcal（‡e王1Sまty or cellsuspellSioflat ai！ⅥOSt SajⅥe jel′eias co】11pare（iwjt】1t】1at WitjlOt】t   added gltlCOSe，tlle川〕el ation oflytic e11ZylⅥe＼＼′aS Sliglltlyi11Ilil）ited．   

Effcct of chlol・ilmphenicol（）11thc rt！1casc oflytic cnzymc  

A（】dition of cわ】cra】1叩ilenjcoi（200／吼ノユー1ユ）to a cL】1ture of stl−aillV 37illllil扇ted  

the growth alldlytic enzymcl）rOduction almost completely．ChloraI叩henicolat a   COnCentration oflO／鳴／mldid nGt CauSCinhibition Gf crlZyme reicasc by strain V37  

（Fig．7），   

Effcct（Ifl，arious cllCmicals on the releasc oflytic cllZ）・mC  

As t王1e C】1e】Ⅵicals active to tllel〕aCte】・ialcellnleIlll〕rane，t】le followlr唱 CllelⅥicals   wcreused；triton X−100（0．1％），tWCen80（0．1％）deoxycholic acid（0．1％），guaIlidine−HCl  

（0．4M），tryl）Si11（iO／榔1111），けSOZyllle（100／Jg′ノ1111）aIldIこDTA・2Na（0．0うM）．As sl10＼もr】1  

in Fig．8．thc dcllSity of bacterialcells did not decrcase considerabiy by the trcatment   

68   Su￠上川J11もA，Ⅰ−王AlrASIl】，KmlURA and MA′rSt】0ⅠてA  

音芸名ニ8こ二要撃崇竜芯油  

∩︶  5  

一〇ご≡r三ニ  

・∈巴○芸0＋5汚Z   

むSOロコB＋一じ犯Z  

憲笠ぎ＋5母Z   

己⁚丁︼   

〇？J空・﹂   

いCd二﹂空﹂  

占Sひ芝   

一〇のZ  

一〇U︼⊂⊥r一仁  

・E巴○≡0＋一〇帝Z   

むの0崇︺一び＋一〇和Z  

⁝⁚5∽芝十6母Z   

一〇Z   

門OZのN   

‖Od・±貸L  

ヤOS00芝  

一〇母Z  

C（川S9rO酬1for 6−1「   Cel‡s grow【1†or8暮1r  

Fig．7．1ミffectsofinorganic salts（NaCl，MgSO4NarI2PO4，NaNO3，NH4Cl，NaCl＋MgCl望），  

glし1COSe and clllorall叩】1enicolon tile release ofiytic enzylme fron− V 37 cells   那・ownin】〕Olyl〕eI）tOne・〉reaSt eXtraCと111e（liし1王11COntaini11g NaCl（0．うmole／l）．  

C‡㌻；1ytic activity of ctlltt汀e filtI◆ate，W：1ytic ac亡ivityliberate（lfroIl−Ce11s（lしIri咽  

＼VaSlling，lモ；iytic act汗ity release（lfI・onlCdは（れriれ膚InCubatわ11．  

Of trito11Ⅹ・100，tWee】180 and gualュiこIine・HCl． Triton X・iOO＼VaS1110St effective foI・  

t】le release oflytic e11Zyllle frolllCells of strain V37， However，110 effect of NaCl   a〔1〔lition to various chcmicals was observed o11the relcase ofiytic enzyme．  

Dis（：uSSil‖n  

MALVEAuX and SAN CLT三MEIヾTE（1967）describcd that clution ofioosely bound acid   p王10SpllataSe froIT】乱ゆ恒加昭胴乱研削用aS artll二Ction of 軒Ialldiollic strengt王l：Tlle  

e17Zyme WaS maXimaly eluted fl−ornlog・Phase ce11s withi．O moIc，バノ′lof KClat pH7．う   a11（ltlle alllOu】1t elし1tedillCl−eaSed as a fulてCtio】ュ OrioIlic stl・engtllup tOl．01110le′ノ／1，l汎1t   Stationary−Phase ce11s required twice the concelltration ofKCl．rheyinferred that the   ellZyllle＼VaS aSSOCiate（iwit王1tlle Cells tllrOugIlelectl・OStatic 呈11teraCtio11S・CoL†三S and  

GROSS（i967a，Ⅰ9671カobserved t】lat Part Of celトl）0Ⅲ1d exol〕e‡1icillinase of 励〟♪ん〆0ど0どど〟∫  

‡肝ピヱJ∫111ayl〕eⅢ）erate（li11Stallta11eOtlSlyl）ylnOrgallic a11io】lS．Maxilllulllliberatio】1WaS   achieve（1witlleit王1erI）ilOSP王1ate Oi■arSellate、Polya11ioIIS an（1lo＼V CO王1Ceiltrations（0．トM）  

Of organic a11io11S Were also ef∫ectivei11releaslng Pellicilli】1aSe．  

0】1tlle Ot王Ierlla王1d，王〕ellicilli11aSe Of 励rgg／iJ∫ ∫ヱJ∂g∠∠わ was not eluted rroiⅥ Cellsl）y   treati帽Wit】1ll廟ICOIICe11tratjoIIS Of salとs（i）oLLOClく196il〕）．   

In this stLldy，nOl・emarkabic effcct on thc reicasc oflytic enzyme of strain V37   

M；ll ine】うacte王■ia‡）1−0（lucing Lytici三nzy111eS・ⅤⅠ   69  

2  4 （う  8（ilr）   

0．5   1．00  

Lyl事C a（細州y  

O．5   1．0  

TritorlX−100  

1￣w〔〉O1180  

Deoxy（）旨10‡ic aci（】  

GしIa11idけ1￠一HCI  

T「yp8日  

EDTA−2Na   Lysozymo  

Ci！rat￠−3Na   NaCけT「】tO‡1X−100   NaCH一丁wee！180   NaC什DeoxydlOlic acid   

NaCけGua11id‡ne一日CI   NaCけT「ypsirl   NaCけE［）TA−2Na  

NaC什」ysozy‡Ⅵe   NaCl＋Citrat￠−3Na  

100  

0   50   1000   50  

％of d￠0「eaSei110融Iden＄ily    Ce】is grown for6r−r   Ce蔓【s g「OW−1化汀∈＝1「   

Fig．8．Effect of various cllel11icals on t】1e releaseofly【ic ellZynle fl・onlV 37 cells   gl■OWnin polyl）el）tOne・yeaSt eXtraCt medium containing NaCl（0．5moIe／l）．  

C‡？；1ytic activity of cu】仁ure filtrate，W再′tic ac仁ivit）r 川〕erated from ceIIs   dul−ing was王−1ng，iモ；1ytic activity released fl・0！11Cells duringⅢCtlbation．   

WaS Ol〕SerVed by O．うmole／lofinorganic salts． A further study wot11d be required to   exalⅥiIle tlle effect of aniollS（pllOSpllate，arSe11ate，Orga】1ic alliollS etC．）o11tile川〕eratioll  

Oflytic enzyme frorn strain V37cells．  

The penicilliIlaSe川）eratio11fl■Om ぶ明和血伽蝕＝m一だ￡ ∫l）y】）hospllate and al・Se】1ate  

Showed marked pH−dependencc（CoLES and GIモOSS1967a）． Liberation of peniciuinase   by BacilluslicheJ‡Ubrnds was also dcpender！t uPOn temPeratt11・e and pH value（LAMPI：N  

I967）．PoLLOCK（Ⅰ96Il））re夏〕Orted tilat pe王1icillillaSe 川）el・atioIlfronlβ飢諭仏が∴用ム症払 did   llOt ta重くe place at O OC and＼VaSIlearly completelyi】111i吾〕ited at pH valtleSl）elolV6．0．  

Penicillinase 川）erationincreased further with temperatしIreS abovc3うOC，but at45OC   this was aiways associated with considerable celldamagc． MALVEAUX and SAN  

CLEMENTE（1967）also reported that maximalelution ofloosely bound acid phosphatase   fronlSiaPh3｝lococcusaurel（S，Pl・eSumal〕1y from the surface ofcclls，OCCuredin the alkaline  

PH ralヽge．   

SljOAiI llミA，王−IAl，ASlvll，三く【hltプまモA an（iMA7、SUOl（A   70  

TIleSe facts s咽geSt tIlatlil〕el・ation111ayIlaVe aIlenZyl¶e‡〕aSis．  

C】1loralⅥ王）11e11icol，ataCOIICeIlt陀tio11（40／唱ノ】Ⅵ1）w】1icllinllil〕itedl）e壬1icilli11aSeSy】1‖1eSis，  

1）artiallylllllil〕ited erz）りⅥ（！SeCretio！10fβ飢■J∠J〟∫Sl）．if adde（ldul轟i‡へg t王1e王）eriod of active   SyntlleSis（PoLLOCK1961l），LAⅣlPEN1967，SARGEN′1、ど∠ ‡g．1969）．  

Release oflytic e】てZy】Ⅵe froiⅥStl■ai】1V37 was observedIllglllyiI＝he allくali11e Pii  

rangc（Fig．3）and was notinhibitedl）y ChiGramPhcnicolat a concentration of10〃g／ml．  

So（liし1111（1eoxycholate（0．05刷l．0％）iilCreaSed peIlicillhase 川）eratioIて frol¶ βαrJ払J∫  

Subliiis but rapidlylet to celldamage（tビ・glucos主dasclealく）（PoLLOCK196ib），and at a   concelltratioIlOflOlll軌ノ′1111was effect主vei：or ral〕i〔l川〕eration or 王〕e11icilli】1aSe fl■Om   Bacillus sublilis（KusrINEIモ and Pou，OClくⅠ961）． Al〕Out O．う％ ol：so（lium deoxycholate，  

1Vき1主cll（lisintegraとed t】1e m訂正那脚e 脚・ePaj▲atiolつ，pl・eVeJ鳥e（li・elease oi free 王〕enicillillaSe   of 挽c眈′∫J〜ど／iど7‡ぴb7膚ノ77∫∫（LAⅣlPEN1967）． EDT丸 wlliclll）reSunlal）1y relllOVed Mg望i   alてd otIlel■Cations fro】¶thelTleIⅥ1）ralleS，＼VaS alsoil血ibitory for t主1e】 elease of free   l）eniciuinasc of Bacillus sp．（PoLLOCIく1961b，LAMPEN1967）一 Tryl）Sin（img／ ml）rapidly   liljerated alarge pl・Ol〕0】■tio王10r pe11ici11illaSe eVeIli11tlle preSellCe Of O，05M Mきざ望 

（KusHがE尺鉦1d PoLLOCiく ユ96り．  

H（）WeVer，deoxycholic acid（0．i％），EDTA・2Na（0．03M）and trypsin（lmg／′ml）did not   sllOW relⅥarlくal）ユe effect on tIle release oflytic enzy】Ⅵe from straiIlVう7ceIIs，Wllile  

tl・itolュX−100（0．1％）was effective for tlle ellZyme elution（Fig．8）．7■11e decreaseiII   celldcnsity，thatis ceu damagc，WaS S将nificant Llnder some conditiotlS uSe（1for the   release expcriments．工n this study，the measurernent ofα・glしICOSidaselcaまくWaS nOt   carried out as 1Ⅵarlくer of celまdalTlage Or CelllysIS． Furtllel■Studies o】1tlle PrOl）1elll  

of cellda】1〕age WO山dl〕e 王1eCeSSaryi110r（1er to（1e】ⅥO11Strate tile effect ofillO棺anic   salts an（lot王1er Clle111icals on t盲Ie release ofIytic e11ZyIlle frolⅥSt】 ai11V37cells．  

RefereIICeS   

CoI．1三S，N．Ⅵr．aよ1（！軋GROSS，ユタ67ヱ】．L主beま●zl臼0王10f suI・fニ】Ce−】ocaとed！〕enic汀け耶1Se f】・OJll別項わ血Ⅲ 那  

〝Jげだ才（∫．βざ〃C／昭7g．ノり102：742−747．  

脚肝 −一皿 

an（l・仙川′、一肌，1967！）．influence of organk alliollS On thelibel・atioIlOfl）eniciiii王1aSefl・Om  

封画布両肌肌肋＝裾略路」射む102：748−7う2．  

‡くUSIiN】㍑，D．J．a11dⅣL R∴靴l。Ⅰ一0（Ⅷ，1961，T‡1e】ocation ofcell−bol用di）enicillinasei11瓜打汀抽ざ錮油汗砧．  

J．β・β札苅グ∫cプr〟ム〆0／．，26：2うう−26う．  

LAか11｝ユ；N，J．0り1967．1ミelease ofl）enici川】1aSe byβαr才〃〟∫／∫cカピタ‡げ〃〃？〜／ぶ．Jわ摘．，48：26ト268．  

MAljVl三AuX，F，］．and C．L．SAN CIjt持㌃EmlE，1967．EItltion oflooseiy bound acid L）hosI油atase from   野郎わ血帥m… 刷独㍉初肋．Aイブど7′0わ才の／．，15：738−743．  

Pol．！JO（コ‡（，M．1ミ．，1961a．Tlle】11eaStll◆eIⅥenとOf tile‖）eration ofl）eIlicilii11aSe fl■0董11此紆沼椚∴㍑鋸汀転ノ  

那孔鳶ノ批●′・〟∂／〟／。26：239−2うぅ．  

，1961b．TlleIlleC‡1anis】110flibeI◆ation ofl）enici11inase froIll蝕雨肋持 ㌫血路煩い臥砿 26：  

267−276．  

…八・山川…血脚  −，1962．Exoe11ズymeS．Tile fうacteまuia（Ⅰ．C．GuNSノl】JUS aIld R．Y．Sl、j測】Ⅲeds．），Aca（まeIllic   press，VoLlV，12トユ78．  

SAllGEドーr，M．G．∴軋K．G110削1andJ．0．LAMl）EN，1969．C璽Ial・acteユ・istics of 壬）enic川inase sec王・eとio11b〉r  

growing cells andl）1・otoI）lasts ofβαr7〟〃S／′rカピ？‡げ0〃Jオブざ．ノ．βαCわ〃イ〃′．，97：820−826．   

Mal◆ine Bacteria Pl●OdLICing L）7LicE11ZyllleS−ⅤⅠ  

an（】J．0．LAさil｝】三N，1970．A mechanisI11fo】・Ⅰ：enicilli11aSe SeCl・etioniIl助c′〟〟ぶ／ブどカピー  

け／〃J∫．什（リ∴．＼王〃．．lく■．・∴ノ．．V∴65：？ムニー9b？．  

SuoA】IAlもJl，ⅠりK．Hメ1yJISl11，T．Ⅰ（川UlもA，M．Mノl−i，Stさ0ⅠくA aIld K．FuJ】・rA，1976．Sl、udies on marinebactel・ia  

l〕rOdLICinglytic enzymes−Ⅰ．Lytic activity of cultul・e f＝trate．This Bullり3：ト16．  

，ハ叫山  肌油，け¶¶W叩叫山仙′仰山 

and K∴軋椚一札：博78．Sttl〔lies on marinel）aCteri王1Ⅰ）rO（lしICingiytic  

ellZynleS−‡Ⅰ．Co呵〕OSi仁ioI10f ctllturelⅥe（1ium for tllel）rOducむiollOflytic eIIZylⅥeS．Jム紘，5：25−46．   

，〝−一皿一仲山…肌…州血仙′，∨山一肌一州 

；1n（lN．王1AZU51Ⅰ，l卵9．Stu（lies onlnarinel〕aCteriaJ）l・0〔ltlCing  

さrtic enヱyIlleS・iII．】ミffects ofinorganic salts and enzynleinllil）itors on t‡1elytic acぐivit〉′．Jわ紘，  

6：49−56．  

㌦八八八∧八∧∧八∧W  ，血  ，  

，Y、StjZUlくⅠ，をi．て10YO】）A aユ1（1A．かfA′l・S【ブ0‡くA，i980．S仁し1（】ies on  

111al・ille bacteI■ial）rO（iLICmg】yとic enzyIⅥeS−ⅠⅤ．E持ect ofinorganic salは（mモllel）1・OdしICtion oflytic   enzyme．Jわ√〟．，7：9−27．  

，′山 

州   山  ，A．Mノl，llsUOKA，C．JINNO aIl（t S．YAMÅNAIくA，ま981．Sとudies on   nl；lrine bacteltiaI）1●OdtlCinglytic enzylTleS−Ⅴ．Cし11ttll■econdition fortheI）rOdし1Ction oflyticenzさ′ⅠⅥe．  

才力r（／．，8：49−60．