Identification of a protein involved in the specific interaction between spermatogenic and Sertoli cells of the rat
著者 前田 智司
著者別名 Maeda, T.
journal or
publication title
博士学位論文要旨 論文内容の要旨および論文審査 結果の要旨／金沢大学大学院自然科学研究科
volume 平成11年6月
page range 1‑4
year 1999‑06‑01
URL http://hdl.handle.net/2297/16169
前田智司 氏名
生年月日 本籍 学位の種類 学位記番号 学位授与の日付 学位授与の要件
東京都 博士（薬学）
博甲第260号 平成10年３月31日
課程博士（学位規則第4条第１項）
Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆａｐｒｏｔｅｉｎｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉc interactionbetweenspermatogeniｃａｎｄＳｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓｏｆｔｈｅ ｒａｔ（精子形成細胞とセルトリ細胞の特異的な接着を規定するタン パク質の同定）
（主査）中西義信
（副査）大場義樹，正宗行人，松永司，山口正晃 学位授与の題目
論文審査委員
学位論文要旨
ThemammalianspermatogenicpathwayisacomplexprocessthatinvO1vestheproliferationof
thetesticularstemcellscalledspermatogonia，ｔｈｅｍeioticdivisionofspermatogoniagivingriseto
haploidspermatids$andthemorphogenicdifferentiationofspermatidsintospermatozoaThｉｓｗｈｏｌｅ ｐｒｏｃｅｓｓｃｏｎｔｉｎｕｅｓｆｏｒｍｏｒｅｔｈａｎｆｏｕｒｗｅｅｋｓｉｎｔｈｅｓｅｍｉｎｉｆｅｒｏｕｓｔｕｂｕＩｅｓｏｆｔｈｅｍａｍｍａｌｉａｎｔｅｓｔｉｓ・ThroughoutthespermatogenlcpathwayjspermatogeniccellskeepaclosecontactwithSertolicells1
testicularsomaticcells・SertoIiceⅡｓｈａｖｅｔｈｕｓｂｅｅｎｐｒｅｓｕｍｅｄｔｏｐＩａｙａｎｉｍｐｏｒｔａｎｔｒｏｌｅｉｎｔｈｅ ｓｐｅrmatogenicdifferentiation，transferringmanymateriaIsandsiｇｎａｌｓｔｏｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅｌＩｓＡｌｔｈｏｕｇｈａｎｕｍｂｅｒｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｗｉｔｈｃｅｌｌａｄhesionactivityexistinbothspermatogenicandSertolicelIs，
ｉｔｉｓｎｏｔｃｅｒｔａｉｎｗｈｅｔｈｅｒａｎｙｏｆｔｈｅｍaretrulyinvolvedinthespecificasｓｏｃｉａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｔｗｏｃell typeslnthisstudy，lattemptedtoidentifyaproteinresponsibleforthisassociationusingan expressioncloningmethod
１）ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔｏｆｃｅＩＩａｄｈｅｓｉｏｎａｓｓａｙ
Ｗｈｅｎｒａｔｔｅｓｔｉｃｕｌａｒｃｅｌｌｓｗｅｒｅｐ｢ｉｍａｒｙｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｄ，ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅｌｌｓ
ｗｅｒｅｍａｉｎｔａｉｎｅｄｉｎａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｗｉｔｈＳｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓｔｈａｔｇｒｅｗａｓａｍｏｎｏｌａｙｅｒ、ｌｎｏｒｄｅｒｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙｔｈｅｍｏＩｅｃｕｌｅ(s）ｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏ「ｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅｔｗｏｃｅｌｌｔｙｐｅｓ１ＩｅｓｔａｂＩｉｓｈｅｄａｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎａｓｓａｙｕｓｉｎｇ ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃａｎｄＳｅｒｔｏｌｉｃｅＩ１ｓｉｓｏｌａｔｅｄｆｒｏｍａｐｒｉｍａｒｙｃｕｌｔｕｒｅ・
Ｉｎｅａｃｈｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎａｓｓａｙ，ｔｈｅｎｕｍｂｅｒｏｆｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅｌｌｓｂｏｕｎｄｔｏ
Ｓｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄａｎｄｓｈｏｗｎｒｅｌａｔｉｖｅｔｏｔｈｅｉｎｐｕｔｃｅｌｌｓ，ｔａｋｅｎａｓｌＯＯｉｉｅ.，ｔｈｅｃｅｌｌａｄｈｅｓｌｏｎｉｎｄｅｘ・ＵｎｄｅｒｔｈｅｅｓｔａｂＩｉｓｈｅｄｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ，ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃ ｃｅｌＩｓｐｒｅｐａｒｅｄｆｒｏｍａ３－ｄａｙｃｏ－ｃｕｌｔｕｒｅｒｏｕｔｉｎｅｌｙｇａｖｅｉｎｄｅｘｅｓｏｆｌ３～３０．
１
２）ＭｏｌｅｃｕＩａｒｃＩｏｎＩｎｇｏｆｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｌｃｃｅｌＩｐｒｏｔｅｉｎｒｅｓｐｏｎｓｉｂＩｅｆｏｒ ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃ‐ＳｅｒｔｏＩｉＩｎｔｅｒａｃｔＩｏｎ
ｌｄｅｃｉｄｅｄｔｏｉｄｅｎｔｉｆｙａｃｅｌｌａｄｈｅｓＩｏｎｍｏｌｅｃｕＩｅ(s）ｉｎｓｐｅｒｍａｔｏ９ｅｎｉｃｃｅｌｌｓ
ｅｍｐｌｏｙｉｎ９ａｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｃｌｏｎｉｎｇｍｅｔｈｏｄｌｆｉｒｓｔｓｏｕｇｈｔａｃｕｌｔｕｒｅｃｅｌｌｌｉｎｅｓｕｉｔａｂｌｅ
ｆｏｒｔｈｅｈｏｓｔｆｏｒｃｌｏｎｉｎｇ、Ｔｈｅｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓｆｏｒｈｏｓｔｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｓｆｏｌｌｏｗｓｉｔｈｅｃｅｌｌｓｇｒｏｗｉｎｓｕｓｐｅｎｓｉｏｎ，ｄｏｎｏｔｂｉｎｄｔｏＳｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓ，ａｎｄｅｘｐｒｅｓｓｔｈｅＳＶ４０１ａｒｇｅＴ‐
ａｎｔｉｇｅｎｔｈａｔａｌｌｏｗｓａｐＩａｓｍｉｄｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅＳＶ４０ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｒｉｇｉｎｔｏｒｅｐＩｉｃａｔｅ
ｅｘｔｒａｃｈｒｏｍｏｓｏｍａＩＩｙ・ＡｈｕｍａｎＴ－ｃｅｌｌ－ｄｅｒｉｖｅｄｃｅｌｌＩｉｎｅＪｕｒｋａｔＴａｇｍｅｔａｌｌｔｈｅ ｒｅｑｕｉｒｅｍｅｎｔｓ，ｓｈｏｗｉｎｇａｎａｄｈｅｓｉｏｎｉｎｄｅｘｏｆａｂｏｕｔｌ／５ｏｆｔｈａｔｗｉｔｈｃｏｎｔｒｏｌ
ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅｌｌｓＡｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｗｉｔｈａｃｏｍｐｌｅｘｉｔｙｏｆ２ｘｌＯ６ｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄｆｒｏｍｔｈｅｍＲＮＡｏｆ
ｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅｌｌｓｕｓｉｎｇａｍａｍｍａｌｉａｎｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｖｅｃｔｏｒｐｃＤＮＡｌ/Ａｍｐｔｈａｔ ｃｏｎｔａｉｎｓｔｈｅＳＶ４０ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｒｉｇｉｎ・ＴｈｅｌｉｂｒａｒｙｗａｓｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｏＪｕｒｋａｔＴａｇ ｃｅｌｌｓｂｙｅｌｅｃｔｒｏｐｏｒａｔｉｏｎ，ａｎｄｔｈｅｃｅｌｌｓｔｈａｔａｃｑｕｉｒｅｄｔｈｅａｂｉＩｉｔｙｔｏｂｉｎｄｔｏＳｅｒｔｏｌｉ
ｃｅｌｌｓｗｅｒｅｓｅｌｅｃｔｅｄｉｎｔｈｅｃｅｌｌａｄｈｅｓｉｏｎａｓｓａｙ．Ａｆｔｅｒｍｕｌｔｉ－ｒｏｕｎｄｏｆｓｕｃｈ ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｓｃｒｅｅｎｌｎｇ１ｆｏｕｒｃＤＮＡｃｌｏｎｅｓｗｅｒｅｅｖｅｎｔｕａｌＩｙｉｓｏｌａｔｅｄＴｗｏｏｆｔｈｅｆｏｕｒｃＤＮＡｃｌｏｎｅｓ（＃７８ａｎｄ＃９７）ｗｅｒｅｂｒｏｕｇｈｔｔｏｔｈｅｆｉｎａｌ
ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｆｏｒｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｔｏＳｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓ、Ｔｏｄｏｓｏ，ｔｈｅｉｒｉｎｓｅｒｔｓｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ ａｎｄｒｅｃＩｏｎｅｄｗｉｔｈｔｈｅｐＨｏｏｋ－２ｖｅｃｔｏｒ，ｗｈｉｃｈｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｓｉｎｇｌｅ－ｃｈａｉｎａｎｔｉｂｏｄｙ ａｇａｉｎｓｔｔｈｅｐｈＯｘｈａｐｔｅｎａｎｄａｌｌｏｗｅｄｓｅＩｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｒａｎｓｆｅｃｔａｎtｓｔｈａｔｅｘｐｒｅｓｓ ａｎｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄＤＮＡｕｓｉｎｇｌａｔｅｘｂｅａｄｓｃｏｎｔａｉｎｉｎｇｔｈｅｈａｐｔｅｎ・ＴｈｅｉｎｓｅｒｔｓｏｆＷ８ ａｎｄ＃ｇ７ｃＩｏｎｅｓｗｅｒｅｌｉｇａｔｅｄｗｉｔｈｔｈｅｖｅｃｔｏｒａｎｄｔｈｅｒｅｓｕｌｔｉｎｇＤＮＡｗｅｒｅ ｉｎｔｒｏｄｕｃｅｄｉｎｔｏＪｕｒｋａｔＴａｇｃｅｌｌｓ，ａｎｄｃｅⅡｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇｔｈｅｃＤＮＡｗｅｒｅｐｕｒｉｆｉｅｄ、
ＴｈｅｓｅｃｅｌｌｓｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄｆｏｒｔｈｅｂｉｎｄｉｎｇｔｏＳｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓ，ｔｏｇｅｔｈｅｒｗｉｔｈＪｕｒｋａｔ Ｔａｇｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓiｎｇｔｈｅｅｍｐｔｙｖｅｃｔｏｒ（ｎｅｇａｔｉｖｅcontrol）ａｎｄｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅｌｌｓ (ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｏｎｔｒｏｌ)．ＴｈｅｃＩｏｎｅ＃ｇ７ｓｈｏｗｅｄａｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ ｃｏＴ１ｐａｒａｂｌｅｔｏｔｈａｔｏｆｃｏｎｔｒｏｌｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅｌＩｓｗｈｉｌｅｔｈｅｃｅｌｌｓｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ
ｃｌｃｎｅ＃７８ｄｉｄｎｏｔｂｉｎｄｔｏＳｅｒｔｏｌｉｃｅｌｌｓ、Ｔｈｅｓｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｃｌｏｎｅ＃ｇ７ｗａｓｔｈｅｏｎｅｗｈｉｃｈｃｏｄｅｄｆｏｒｔｈｅｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｐｒｏｔｅｍｒｅｓｐｏｎｓｉｂｌｅｆｏｒｔｈｅ ｂｉｒｄｉｎｇｏｆｓｐｅｒｍａｔｏｇｅｎｉｃｃｅＩｌｓｔｏＳｅｒｔｏＩｉｃｅｌｌｓ、Ｔｈｅｒｅａｓｏｎｆｏｒａｆａｉｌｕｒｅｏｆ ｄｅｔｅｃｔｉｎｇｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｗｉｔｈｔｈｅｃｌｏｎｅ＃７８ｉｓｎｏｔｃｌｅａｒａｔｐｒｅｓｅｎｔ，ｂｕｔｉｔｍａｙｂｅ ｐｏｓｓｉｂＩｅｔｈａｔｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｅｎｃｏｄｅｄｂｙｔｈｅｃｌｏｎｅｗａｓｎｏｔｐｒｏｐｅｒｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｕｎｄｅｒ ｔｈｉｓｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎ，ｌｗｅｎｔｆｕｒｔｈｅｒｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｐｒｏｐｅｒｔｙｏｆｔｈｅ＃ｇ７
ｃｌｏｎｅ－ｅｎｃｏｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎ．
3）ＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔＩｏｎｏｆｃｅＩＩａｄｈｅｓｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎ
Ｔｈｅ＃９７ｃＤＮＡｃｌｏｎｅｃｏｖｅｒｅｄａＤＮＡｒｅｇｉｏｎｏｆａｂｏｕｔｌ３ｋｂｐｉｎｌｅｎｇｔｈ
ｉｎＣｌｕｄｉｎｇａｎｏｐｅｎｒｅａｄｉｎｇｆｒａｍｅｆｏｒ２４３ａｍｉｎｏａｃｉｄｒｅｓｉｄｕｅｓＡｐｒｅｄｉｃｔｅｄ
ｍｏｌｅｃｕｌａｒｍａｓｓｏｆｔｈｅｅｎｃｏｄｅｄｐｒｏｔｅｉｎｗａｓ２７ｋＤａ－２－
