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経 管 栄 養 患 者 と 経 口 摂 取 者 の

口 腔 ・ 咽 頭 細 菌 叢 の 検 索

-次 世 代 シ ー ク エ ン ス に よ る 解 析 -

秋 枝 俊 江

大 学 院 歯 学 独 立 研 究 科 健 康 増 進 口 腔 科 学 講 座

（ 主 指 導 教 員 ： 小 笠 原 正 ）

松 本 歯 科 大 学 大 学 院 歯 学 独 立 研 究 科 博 士 （ 歯 学 ） 学 位 申 請 論 文

The bacterial flora analysis of palate, tongue and

pharyngeal in patients with tube feeding by Next

Generation Sequencing

Toshi e Ak ie d a

D ep ar t m ent of O ra l Hea lt h Pr om ot io n , G r ad ua t e S ch o o l o f O r al M ed i ci ne

( Chi ef Aca d em i c A dv is o r： Pr o fes s o r Ta da sh i O ga sa w ar a)

Th e t hes is s ubm i t t ed t o t h e G r ad ua t e S c h o ol o f O r al Me d ic in e , M at s um ot o D e nt al Un i vers i t y, for t he d e gre e Ph . D . in D ent i s t ry

2 要 介 護 高 齢 者 は ， 病 院 や 介 護 療 養 病 床 で 嚥 下 障 害 ， 意 識 障 害 等 を 有 し ， 必 要 な 水 分 ・ 栄 養 を 経 口 で 摂 取 さ せ る た め に 経 管 栄 養 が 用 い ら れ る ． 口 腔 は ， 飲 食 物 を 通 過 す る 器 官 で あ り ， 摂 食 が 口 腔 や 咽 頭 へ の 細 菌 叢 の 構 成 に 影 響 を 与 え て い る と 考 え ら れ る ． 経 管 栄 養 者 と 経 口 摂 取 者 に お け る 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 の 類 似 性 や 違 い が 明 ら か に な れ ば ， 口 腔 内 状 態 や 呼 吸 器 感 染 へ の 影 響 を 知 る た め の 情 報 に と な り 得 る と 思 わ れ る ． さ ら に 細 菌 叢 に 与 え て い る 要 因 を 明 ら か に す る こ と に よ り 今 後 の 口 腔 や 咽 頭 の 細 菌 叢 と 各 種 疾 患 と の 関 連 に 示 唆 を 与 え る 基 礎 的 デ ー タ に な り 得 る と 考 え る ． そ こ で, 経 口 摂 取 者 と 経 管 栄 養 者 の口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 に お ける細 菌 叢 を 網 羅 的 に 検 出 で き る 次 世 代 シ ー ケ ン ス ・ メ タ ゲ ノ ム 解 析 に よ り 比 較 検 討 し ， 細 菌 叢 に 影 響 を 与 え て い る 要 因 を 主 成 分 分 析 と 相 関 比 を 用 い て 検 索 し た ． 対 象 者 は ， 山 梨 県 内 のA 病 院 と沖 縄 県 内 の B 病 院 に 入 院 中 の 経 管 栄 養 の 要 介 護 高 齢 者 20 名 （ 男 性 14 名 ，女 性 6 名 ，平 均 年 齢 80 . 2± 7. 3 歳 ） と沖 縄 県 内 の 特 別 養 護 老 人 ホ ー ム C と 長 野 県 内 の 特 別 養 護 老 人 ホ ー ム D に 入 所 中 の 経 口 摂 取 の 要 介 護 高 齢 者 19 名 （ 男 性 5 名 ，女 性 14 名 ，平 均 年 齢 86 . 2±11 . 5 歳 ）であ っ た． 調 査 手 順 は， 患 者 情 報 を 転 記 （ 栄 養 摂 食 状 況 ， 年 齢 ， 性 別 ， 疾 患 ） し た ． ま た 寝 た き り 度 ， 意 識 レ ベ ル, 意 思 疎 通 の 有 無 の 状 況 ， 残 存 歯 の 有 無 ， う 蝕 の 有 無 ，C PI の 検 査 を 行 っ た．サ ンプル 採 取 は ，スワブ に て 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 を2 0 回 擦 過 し ，D N A 保 存 液 に浸 し て 保 存 し た ．各 種 サ ンプ ル か ら 細 菌 D N A を 抽 出 ，1s t P CR， 次 世 代 シー ク エ ンス・ メタ ゲノ ム解 析 を 行 い 細 菌 の 種 類 と 構 成 率 を 評 価 し た ． 細 菌 叢 の 多 様 性 を 示 す S hannon 指 数 ， 細 菌 構 成 率 につ い て 口 蓋 、舌 、 咽 頭 に お け る 経 管 群 と 経 口 群 の 比 較 を M ann-W h it n e y U 検 定 で行 っ た． 経 管 群 と 経 口 群 の そ れ ぞ れ に つ い て 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 の 3 群 間 の 比 較 を Fr ied m an 検 定 にて 行 っ た． サンプ ルご と の それ ぞれ の 細 菌 叢 の類 似 性 は ，主 成 分 分 析 を 行 っ た ． 要 因 検 索 は ， 年 齢 ， 性 別 ， 寝 た き り 度 ， 意 識 レ ベ ル ， 意 思 疎 通 ，9 つの疾 患 ， C PI， 残 存 歯 の 有 無 ， 齲 蝕 ，摂 食 状 況 （ 経 管 と 経 口 ） の 18 項 目 と 細 菌 叢 と の 関 連 性 の 検 討 は ， 第 １ 主 成 分 分 析 の 得 点 結 果 か ら 相 関 比 を 求 め た ． 要 因 検 索 は ， 項 目 間 の 関 連 性 を χ ² 検 定 に て 検 討 し ，18 項 目 間 の

3 相 関 行 列 を 作 成 し ， 独 立 し た 項 目 か つ 有 意 な 相 関 比 を 要 因 と し て 抽 出 し た ． 経 管 群 と 経 口 群 に お け る 口 蓋 の S ha n non 指 数 は ，経 管 群 3. 3 ±0. 8，経 口 群 3. 9±1. 1 で あり，咽 頭 も 経 管 群 が有 意 に低 か っ た．舌 は ，有 意 差 を 認 めな か っ た ． 経 管 群 と 経 口 群 に お け る 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 の S h a n n o n 指 数 の平 均 は ， 経 管 と 経 口 で ３ 群 間 に 有 意 な 差 を 認 め な か っ た ． 経 管 群 と 経 口 群 に お け る 細 菌 構 成 率 は ， 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 に お い て ，N eis ser ia 属 ，Str ept oc occ us 属 ， Rothia 属 が 全 体 の 6 0 ～70 % 以 上 を 占 めて い た．口 蓋 で は、Neis ser ia 属 （29 . 8％）と Roth ia 属 （16 . 6％） が ，経 管 群 で有 意 に多 く ，舌 で ， Neis ser ia 属 （28 . 9％），Str epto c occ us 属 （22 . 5% ） ，Rothia 属 （21 . 3％ ） が 経 管 群 で 有 意 に 多 く ， 咽 頭 で ，Neis ser ia 属（34 . 0 ％ ）,Str eptoc occ us 属

（24 . 3% ）,Roth ia 属（14 . 7％ ）が有 意 に 多 く 検 出 され た． 主 成 分 分 析 で は ， 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 に お い て 細 菌 叢 は 明 確 な 違 い が 認 め ら れ ， 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 に お け る 細 菌 叢 と 各 項 目 と の 関 連 性 は ， 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 と も に 相 関 比 が 最 も 高 く ， 相 関 行 列 か ら 独 立 性 が 認 め ら れ た も の は ， 経 管 と 経 口 の み で あ っ た ． そ れ ぞ れ ， 口 蓋 に お け る 経 管 と 経 口 の 相 関 比 は 0. 4 23 （P＜ 0. 01） ， 舌 の 相 関 比 は 経 管 と 経 口 が 0. 51 7 （P＜0. 01），咽 頭 の 相 関 比 は経 管 と 経 口 が （0. 518 ：P＜0. 0 1） と なっ た． 細 菌 の 酸 素 要 求 性 の 比 較 は ， 口 蓋 で 好 気 性 菌 の 割 合 が 経 管 群 に 有 意 に 多 く ， 舌 で 好 気 性 菌 と 通 性 嫌 気 性 菌 の 割 合 が 経 管 群 に 有 意 に 多 か っ た ． 咽 頭 は ， 好 気 性 菌 と 通 性 嫌 気 性 菌 の 割 合 が ， 経 管 群 で 有 意 に 多 か っ た ． 本 研 究 の 結 果 か ら ， 経 管 栄 養 者 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 は 共 通 し て お り ， 好 気 性 菌 の 構 成 比 率 が 有 意 に 高 く ，Ne is ser ia 属 ，Str eptoc oc c us 属 ， Rothia属 が 優 占 菌 種 で あ り ， 経 管 ・ 経 口 が 細 菌 叢 を 規 定 す る 独 立 し た 要 因 と し て 認 め ら れ た ．

経 管 栄 養 と経 口 摂 取 の要 介 護 高 齢 者 における

口 蓋 ・舌 ・咽 頭 の細 菌 叢 の検 索

-次 世 代 シークエンスによる解 析 -

秋 枝 俊 江

大 学 院 歯 学 独 立 研 究 科 健 康 増 進 口 腔 科 学 講 座

（ 主 指 導 教 員 ： 小 笠 原 正 ）

松 本 歯 科 大 学 大 学 院 歯 学 独 立 研 究 科 博 士 （ 歯 学 ） 学 位 申 請 論 文

The bacterial flora analysis of palate, tongue and

pharyngeal in patients with tube feeding by Next

Generation Sequencing

Toshi e Ak ie d a

D ep ar t m ent of O ra l Hea lt h Pr om ot io n , G r ad ua t e S ch o o l o f O r al M ed i ci ne

( Chi ef Aca d em i c A dv is or：Pr o fe s s or Ta da sh i O ga sa w ar a)

Th e t hes is s ubm i t t ed t o t h e G r ad ua t e S c h o ol o f O r al Me d ic in e , M at s um ot o D e nt al Un i vers i t y, for t he d e gre e Ph . D . in D ent i s t ry

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要 旨

経 管 栄 養 者 の 細 菌 叢 と 細 菌 叢 に 与 え て い る 要 因 を 明 ら か に す る た め に 経 管 栄 養 患 者 と 経 口 摂 取 者 の 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 に お け る 細 菌 叢 を 次 世 代 シ ー ク エ ン ス 解 析 （NG S）によ り比 較 検 討 し 、 細 菌 叢 に 影 響 を 与 え てい る要 因 を 主 成 分 分 析 と 相 関 比 を 用 い て 検 索 し た ． 対 象 は 、 経 管 栄 養 者 20 名 と 経 口 摂 取 者 19 名 の 要 介 護 高 齢 者 と し た． 入 院 記 録 より 年 齢 ， 性 別 ， 疾 患 ， 寝 た き り 度 を 確 認 し ，Ja pa n Co m a S ca le , 意 識 レベ ル , 意 思 疎 通 の 有 無 を 記 録 し ， 残 存 歯 と う 蝕 の 有 無 ，CP I 測 定 を 行 った ．検 体 採 取 は， 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 を ス ワ ブ 法 に て 実 施 し ， 通 法 に 従 い 次 世 代 シ ー ク エ ン ス ・ メ タ ゲ ノ ム 解 析 を 行 い ， 細 菌 の 種 類 と 構 成 率 を 評 価 し た ． S hann o n 指 数 は 、経 管 群 が口 蓋 と 咽 頭 に お い て経 口 群 より も 有 意 に低 か っ た ． 経 管 群 は ， 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 で 好 気 性 菌 が 経 管 群 よ り 有 意 に 多 か っ た ． 通 性 嫌 気 性 菌 は ， 舌 と 咽 頭 で 経 管 群 に 有 意 に 多 く 認 め た ． 経 管 群 に お け る 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 構 成 比 率 は 共 通 し ，Neis ser ia 属 ，

Str eptoc occ us属 ，R othia 属 が 上 位 を 占 め た ． 各 部 位 に お け る2 群 間 で の 主 成 分 分 析 は ， 口 蓋 の 第 1 主 成 分 にお け る寄 与 率 は， 21 . 3％ ，舌 で 32 . 7％，咽 頭 で 30 . 1 ％であっ た． 相 関 比 は ，い ずれ の部 位 で も 「 経 管 と経 口 」 の 要 因 が 最 も 高 く ， 口 蓋 で0. 423 （P＜0 . 01） ，舌 で 0. 51 7 （P ＜0. 01） ， 咽 頭 で 0. 518 （P＜ 0. 01） と なっ た．細 菌 叢 と最 も 関 連 の ある要 因 は ，「 経 管 と 経 口 」 で あ り ， 経 管 栄 養 者 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 は ， 好 気 性 菌 が 多 く ， 多 様 性 が 低 く 偏 っ て い る こ と が 共 通 し て い た ．

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緒 言

要 介 護 高 齢 者 に お け る 経 管 栄 養 の 実 施 割 合 は ， 介 護 療 養 病 床 で 62 . 2% １ ）_{， 病 院 で 63 . 3％}１ ）_{と さ れ て い る ． 経 管 栄 養 の 適 応 は ， 嚥 下 障 害 ， 意 識 障 害} 等 を 有 し ， 必 要 な 水 分 ・ 栄 養 を 摂 取 さ せ る た め に 経 管 栄 養 が 用 い ら れ る２ ）_{． 要} 介 護 高 齢 者 に お け る 経 口 摂 取 者 と 経 管 栄 養 者 の 舌 は ， 緑 膿 菌 （ 検 出 者 率 25 ％）の検 出 が 多 く， 次 い で肺 炎 桿 菌 （検 出 者 率 11％ ） ，セ ラチ ア（ 検 出 者 率 14 ％），M RS A（検 出 者 率 4％ ）が検 出 され たと 報 告 され ている３ ）_{． 経 口 摂 取 の} 要 介 護 高 齢 者 の 咽 頭 は ， レ ン サ 球 菌 と Neis ser ia が 経 管 栄 養 者 よ り 有 意 に 高 い 検 出 率４ ）_{で あ っ た と 報 告 さ れ て い る ． 口 腔 は ， 飲 食 物 を 通 過 す る 器 官 で あ} り ， 摂 食 が 口 腔 や 咽 頭 へ の 細 菌 叢 の 構 成 に 影 響 を 与 え て い る 結 果 と 思 わ れ る ． し か し な が ら ， こ れ ら の 結 果 は 培 養 検 査 法 に て 10 種 類 の細 菌 に つ いて 検 査 さ れ た も の で ， そ れ 以 外 の 細 菌 に つ い て は 不 明 で あ る ． 近 年 ， 遺 伝 子 解 析 技 術 が 発 達 し ， こ れ ま で 検 出 で き な か っ た 細 菌 を 次 世 代 シ ー ク エ ン ス ・ メ タ ゲ ノ ム 解 析 に て 検 出 可 能 と な っ て い る ． 次 世 代 シ ー ク エ ン ス ・ メ タ ゲ ノ ム 解 析 は ， サ ン プ ル よ り 得 ら れ た 細 菌 の 遺 伝 子 情 報 に よ っ て 網 羅 的 に 細 菌 の 菌 種 と 構 成 比 を 知 る こ と が で き る も の で あ る ． 経 管 栄 養 者 と 経 口 摂 取 者 に お け る 舌５ ）_{や 健 常 成 人 者 の 口 腔 と 咽 頭 の 細 菌 叢}６ ）_{は ， 次 世 代 シ ー ク エ ン ス ・ メ} タ ゲ ノ ム 解 析 を 用 い て 報 告 さ れ て い る ． し か し ， 経 管 栄 養 者 と 経 口 摂 取 者 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 を 比 較 検 討 し た 報 告 は 見 当 た ら な い ． 経 管 栄 養 者 と 経 口 摂 取 者 に お け る 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 の 類 似 性 や 違 い が 明 ら か に な る こ と に よ り ， 口 腔 内 状 態 や 呼 吸 器 感 染 へ の 影 響 を 知 る た め の 情 報 に と な り 得 る と 思 わ れ る ． さ ら に 細 菌 叢 に 与 え て い る 要 因 を 明 ら か に す る こ と に よ り 今 後 の 口 腔 や 咽 頭 の 細 菌 叢 と 各 種 疾 患 と の 関 連 に 示 唆 を 与 え る 基 礎 的 デ ー タ に な り 得 る と 考 え る ． そ こ で , 経 管 栄 養 者 の 細 菌 叢 と 細 菌 叢 に 与 え て い る 要 因 を 明 ら か に す る た め に 経 口 摂 取 者 と 経 管 栄 養 者 の 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 に お け る 細 菌 叢 を 次 世 代 シ ー ケ ン ス 解 析 （ N G S ） に よ り 比 較 検 討 す る と と も に ， 細 菌 叢 に 影 響 を 与 え て い る 要 因 を 主 成 分 分 析 と 相 関 比 を 用 い て 検 索 し た ．

対 象 と方 法

3 １ ． 対 象 者 山 梨 県 内 の A 病 院 と 沖 縄 県 内 の B 病 院 に 入 院 中 の 経 管 栄 養 の 要 介 護 高 齢 者 と 沖 縄 県 内 の 特 別 養 護 老 人 ホ ー ム C と 長 野 県 内 の 特 別 養 護 老 人 ホ ー ム D に 入 所 中 の 経 口 摂 取 の要 介 護 高 齢 者 を 対 象 と し た． 経 管 栄 養 の 調 査 対 象 者 は ，46 名 に調 査 を 依 頼 し ，同 意 の 得 られ た 21 名 と し たが， 1 名 調 査 期 間 中 に 死 亡 し た た め ， 最 終 調 査 対 象 者 は 20 名 （男 性 14 名 ，女 性 6 名 ，平 均 年 齢 80 . 2± 7. 3 歳 ）であ っ た． 経 口 摂 取 の 調 査 対 象 者 は ， 同 意 の 得 られ た 19 名 （ 男 性 5 名 ，女 性 14 名 ，平 均 年 齢 86 . 2± 1 1 . 5 歳 ） であっ た． 本 研 究 は ， 松 本 歯 科 大 学 倫 理 委 員 会 の 承 認 （ 承 認 番 号 ：25 7） を 得 たう え で 実 施 し た . 2 ． 調 査 手 順 入 院 ・ 入 所 記 録 か ら 患 者 情 報 と し て 栄 養 摂 食 状 況 ， 年 齢 ， 性 別 ， 疾 患 に つ い て 調 査 用 紙 に 転 記 し た ． ま た 寝 た き り 度 （ 障 害 老 人 の 日 常 生 活 自 立 度 （ 寝 た き り 度 判 定 基 準 ， 平 成 ３ 年 厚 生 省 ） ， 意 識 レ ベ ル （Ja pa n C o m a S c al e） ,意 思 疎 通 の 有 無 の 状 況 は ， ベ ッ ド サ イ ド に て 直 接 確 認 し た ． ミ ラ ー と 懐 中 電 灯 を 用 い て 口 腔 内 診 査 を 実 施 し ， 残 存 歯 の 有 無 ， う 蝕 の 有 無 ， プ ロ ー ブ を 使 用 し て CPI 検 査 を 施 行 し た． 3 ． サ ン プ ル 採 取 生 理 食 塩 液 （NO RM AL S AL I N E S Y RI NG E O TS U K A 2 0m l®_{） で 湿 ら} せ た ス ワ ブ （For ensi c Sw ab®_{） を 用 い て ス ワ ブ 法 に て 行 っ た ． 対 象 部 位 で あ る} 口 蓋 と 舌 は 中 央 部 を ス ワ ブ に て 20 回 擦 過 し た． 咽 頭 で は ，舌 圧 子 で圧 排 し な が ら 直 視 に て 咬 合 平 面 に 垂 直 に 咽 頭 後 壁 を ス ワ ブ に て 20 回 擦 過 し た． サ ン プ ル 採 取 時 間 は ， 経 管 摂 取 者 で 食 事 の 影 響 が な い た め 9 時 か ら 17 時 の 間 に 行 い ， 経 口 栄 養 者 は ， 食 後 1 時 間 か ら 2 時 間 で 実 施 し た ． その 後 ， 擦 過 し た ス ワ ブ を D N A 保 存 液 （ D N A/ RN A S h i e ld ZY R 5 0 m l®_{） の 入} っ た 遠 沈 管 （ ビ オ ラ モ 遠 沈 管 1 5 m l 1 - 3 500 - 2 1 AS O NE®_{） に 入 れ て ， 撹} 拌 機 に て 約 1 分 間 撹 拌 し ，懸 濁 液 を 冷 蔵 保 存 し た． 4 ． 細 菌 D N A の 抽 出 ・次 世 代 シー ク エ ンス ・ メ タゲノ ム 解 析 各 種 サ ン プ ル か ら D N A 抽 出 キ ッ ト（ M O R A- EXT RA CT ®_{）を 使 用 し , 細}

4 菌 D N A を 抽 出 し た．次 に PCR 法 にて D N A 増 幅 し た後 に 口 腔 常 在 微 生 物 叢 解 析 セ ン タ ー へ 冷 蔵 に て 送 付 し ， 通 法 5 ， 6 ， 7 ）_{に 従 い 次 世 代 シ ー ク エ ン ス ・ メ タ} ゲ ノ ム 解 析 （16 S r D N A の V3- V4 領 域 ，リ ー ド 長 20 0 b p～ 5 0 0 b p） を 行 い， 各 種 サ ン プ ル の 塩 基 配 列 を 解 読 し ， 細 菌 の 種 類 と 構 成 率 を 評 価 し た ． 5 ． 分 析 方 法 細 菌 叢 の 多 様 性 を 示 す S hannon 指 数 、 細 菌 構 成 率 につ い て 経 管 群 と 経 口 群 で い ず れ か で 1％以 上 の細 菌 に つ いて 口 蓋 、 舌 、 咽 頭 にお け る 経 管 群 と 経 口 群 の 比 較 を M an n-W h it ne y U 検 定 で行 っ た． 経 管 群 と 経 口 群 のそ れ ぞ れ に つ い て 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 の 3 群 間 の比 較 を Fr ie d m an 検 定 にて 行 っ た． サ ン プ ル ご と の そ れ ぞ れ の 細 菌 叢 の 類 似 性 を 明 ら か に す る た め に 主 成 分 分 析 を 行 っ た ． 要 因 検 索 は ， 年 齢 ， 性 別 ， 寝 た き り 度 ， 意 識 レ ベ ル ， 意 思 疎 通 ， 疾 患 （ 脳 血 管 疾 患 ・ 循 環 器 疾 患 ・ 糖 尿 病 ・ 呼 吸 器 疾 患 ・ 消 化 器 疾 患 ・ 泌 尿 器 疾 患 ・ 整 形 外 科 疾 患 ・ 眼 疾 患 ・ そ の 他 疾 患 ） ，CP I，残 存 歯 の 有 無 ，齲 蝕 ，摂 食 状 況 （ 経 管 と 経 口 ） の 18 項 目 と細 菌 叢 と の 関 連 性 の 検 討 は， 主 成 分 分 析 に よ り 得 ら れ た 第 1 主 成 分 の サ ン プ ル 得 点 を 用 い て 各 項 目 と の 相 関 比 を 求 め た ． 各 項 目 の 独 立 性 の 検 討 は ， 項 目 間 の 関 連 性 を χ ²検 定 にて 検 討 し ，18 項 目 間 の 相 関 行 列 を 作 成 し 、 有 意 差 が 認 め ら れ た 2 項 目 のう ち相 関 比 の 高 いも の を 残 し 、 細 菌 叢 の 独 立 要 因 と し た ． な お M ann-Wh it n e y U 検 定 と χ2_{検 定 は S PS S Ve r. 23. 0}®_{を 使 用 し ， 有} 意 水 準 を α＝0. 05 と し た．主 成 分 分 析 は 株 式 会 社 ア イ スタッ ト マ ル チ 多 変 量 解 析 ソ フ ト Ver ．1. 1®_{， 相 関 比 は E x c e l 統 計 解 析 ソ フ ト Ve r. 8 . 4 を 使 用 し た．}

結 果

1 ． 患 者 背 景 経 管 栄 養 患 者 は 男 性 14 名 ，女 性 6 名 ， 平 均 年 齢 は 8 0 . 2± 7. 3 歳 で、 経 口 摂 取 者 は 男 性 5 名 ，女 性 14 名 ， 平 均 年 齢 は 86 . 2± 11. 5 歳 で あった ．障 害 老 人 の 日 常 生 活 自 立 度 は C１ が 2 名 ， C2 が 18 名 ， A1 が 4 名 ， A2 が 3 名 ， B1 が １名 ， B2 が 11 名 で 12 名 が JCS Ⅱ （ 刺 激 で覚 醒 するレ ベル ） であっ た． 主 な 疾 患 は ， 脳 血 管 疾 患 が 20 名 ， 呼 吸 器 疾 患 が 14 名 ，循 環 器 疾 患 が 2 1 名 で あ っ た （ 表 1）．い ずれ の施 設 も 両 群 と も に 1 日 2 回 の口 腔 ケ アが 行 われ ，

5 経 管 群 の 無 歯 顎 者 は 粘 膜 ケ ア の み ， 有 歯 顎 者 は 歯 ブ ラ シ に よ る 歯 面 清 掃 と 粘 膜 ケ ア ， 経 口 群 は 歯 ブ ラ シ に よ る 歯 面 清 掃 が 実 施 さ れ て い た ． 2 ． 多 様 性 １ ） 経 管 群 と 経 口 群 の 多 様 性 口 蓋 の S ha nnon 指 数 は ，経 管 群 3. 3± 0 . 8，経 口 群 3. 9± 1 . 1 で あり ，経 管 群 が 有 意 に 低 か っ た ． 咽 頭 に お い て は ， 経 管 群 3. 2± 0 . 8，経 口 群 4. 1± 0 . 7 で あ り ， 口 蓋 と 同 様 に 咽 頭 に お い て も 経 管 群 が 有 意 に 低 か っ た ． 舌 は ， 経 管 群 3. 4± 0 . 7，経 口 群 3. 9 ± 0 . 8 で あり，平 均 値 で 経 管 群 が 低 か っ たが， 有 意 差 を認 め な か っ た ． ２ ） 経 管 群 お よ び 経 口 群 に お け る 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 の 多 様 性 S hannon 指 数 の 平 均 は ， 経 管 群 で 口 蓋 3. 3± 0 . 8， 舌 3. 4± 0 . 7， 咽 頭 3. 2± 0 . 8 で あ り ， 3 群 間 で 有 意 差 は 認 め ら れ な か っ た ． 経 口 群 は 口 蓋 3. 9± 1 . 1， 舌 3. 9± 0 . 8， 咽 頭 4. 1± 0 . 7 で 3 群 間 に 有 意 な 差 を 認 め な か っ た （ 表 2）． （1）口 蓋 検 出 さ れ た 細 菌 の 数 は 経 管 群 で 115 細 菌 属 ，経 口 群 で 97 細 菌 属 ，その う ち 経 管 群 と 経 口 群 に お い て ， ど ち ら か が 1％以 上 であっ た細 菌 は 2 1 属 が検 出 さ れ た ． 経 管 群 の 各 種 細 菌 の 構 成 比 率 の 平 均 は Neis ser ia 属 が 29 . 8％ ， Str eptoc occ us 属 は 18 . 4% ，Rot hia 属 1 6 . 6％の順 に 多 く， 全 体 の 60 ％以 上 を 占 め ， い ず れ も 検 出 者 率 は 10 0％であっ た．Neis ser ia 属 と Rothia 属 は ， 経 管 群 で 有 意 に 多 く 検 出 さ れ た ． 経 口 群 は Str eptoc occ us 属 25 . 5% ，

Rothia 属 1 2 . 0％，A ctinomyces 属 11. 8 ％ で全 体 の 40 % 以 上 を 占 めた． Str eptoc occ us 属 と Actinom yces 属 は ， 経 管 群 に 比 べ 有 意 に 多 か っ た ． 経 管 群 と 経 口 群 の 上 位 3 細 菌 属 の検 出 率 は ，い ずれ も 10 0％であっ た（ 表 3- a）．

（2）舌

経 管 群 と 経 口 群 は ， そ れ ぞ れ 10 7 の 細 菌 属 と 87 の 細 菌 属 が 検 出 された ． 経 管 群 は ，Ne is ser ia 属 が 28 . 9％，Str eptoc occ us 属 22 . 5% ，Rothia 属 21 . 3％で， 全 体 の 7 0 ％以 上 を 占 め た． これ らの 属 は ， 経 口 群 と比 較 し て 経 管

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群 で 有 意 に 多 く 検 出 さ れ た ． 経 口 群 は Pr e votella 属 が 20 . 4％ ，Neis ser ia 属 12 . 3％，Str eptoc occ us 属 11. 6％ ，Ac tinomyces 属 11. 6％ で 全 体 の 50 ％以 上 を 占 め た ．Pr evotella 属 と Actin omyces 属 は ， 経 管 群 よ り 有 意 に 多 か っ た （ 表 3- b）．

（3）咽 頭

経 管 群 と 経 口 群 は ， そ れ ぞ れ 110 の 細 菌 属 と 10 7 の 細 菌 属 が 検 出 され た． 経 管 群 は ，Ne is ser ia 属 34 . 0％,Str epto c occ us 属 24 . 3%,Ro thia 属 14 . 7％で全 体 の 70 ％ 以 上 を 占 める結 果 で あっ た．これ らの 細 菌 は，経 口 群 に 比 べ て 有 意 に 多 か っ た ． 経 口 群 は ，Pr e vo tella 属 18 . 0％，Ne is ser ia 属 15 . 4％，Str eptoc occ us 属 15 . 1％で， 全 体 の 45 % 以 上 を 占 めた ． Pr evote lla 属 は ， 経 管 群 に 比 べ 有 意 に 多 か っ た （ 表 3- c ） ． 3．主 成 分 分 析 （1）口 蓋 口 蓋 の 第 1 主 成 分 に お け る寄 与 率 は， 21 . 3 ％，第 2 主 成 分 の 寄 与 率 は ， 14 . 0％と なり，累 積 寄 与 率 は 35 . 3％であっ た ．第 1 主 成 分 にお け るサ ンプ ルに 付 与 さ れ た 得 点 は 経 口 群 で 有 意 に 高 く ， 第 2 主 成 分 では 有 意 差 が認 め られ な か っ た ． 経 口 群 は 第 1 象 限 と第 4 象 限 に 位 置 し ，経 管 群 は X 軸 0，Y 軸 - 4. 0 ～2. 0 を 中 心 にク ラス ターとな り，明 確 に 区 分 され た（ 図 １- a） ． （2）舌 舌 に お け る 第 1 主 成 分 の寄 与 率 は ，32 . 7 ％，第 2 主 成 分 の 寄 与 率 は 14 . 5％と なり，累 積 寄 与 率 は 47 . 2％であっ た ．第 1 主 成 分 のサ ン プル 得 点 は ， 経 口 群 が 有 意 に 高 か っ た ． 第 2 主 成 分 で は 両 群 間 に 有 意 差 は 認 められ なか っ た ． 経 口 群 は ， 第 1 象 限 と第 4 象 限 に広 く 位 置 し たク ラ スターと なり ， 経 管 群 は 第 2 象 限 と第 3 象 限 にク ラス ター を 作 っ ていた （ 図 １ - ｂ ） ． （3）咽 頭 咽 頭 の 第 1 主 成 分 の 寄 与 率 は 3 0 . 1％，第 2 主 成 分 が 14 . 6％ ， 累 積 寄 与 率 は 44 . 7％であっ た． 第 1 主 成 分 での サン プ ル 得 点 は 経 管 群 で有 意 に 高 く， 第 2 主 成 分 では 両 群 間 に有 意 差 を 認 めな かっ た．経 口 群 は 第 1 と 第 4 象 限 を 中 心 に 広 く プ ロ ッ ト さ れ ， 経 管 群 は 第 2，3 象 限 に縦 上 に 集 約 さ れ た（ 図

１-7 ｃ ） ． ４ ． 口 蓋 ・ 舌 ・ 咽 頭 に お け る 細 菌 叢 と 各 項 目 と の 関 連 性 （ １ ） 口 蓋 細 菌 叢 と の 関 連 性 と し て 相 関 比 が 有 意 で あ っ た の は ，18 項 目 中 3 項 目 であ っ た ． 経 管 と 経 口 の 相 関 比 は 0. 423 （ P＜0. 01），意 識 レ ベ ルが 0. 231 （ P＜ 0. 01），意 思 疎 通 が 0 . 249 （P＜ 0. 01）であっ た ．さ らに， 相 関 行 列 か ら独 立 性 が 認 め ら れ た も の は ， 経 管 と 経 口 の み で あ っ た （ 表 4- a） ． （2）舌 舌 で 有 意 な 相 関 比 が 認 め ら れ た の は ，1 8 項 目 中 6 項 目 であっ た ． 相 関 比 は 経 管 と 経 口 が 0. 5 17 （ P＜0. 01） ， 意 識 レ ベ ル 0. 223 （P＜ 0. 01） ， 意 思 疎 通 0. 249 （ P＜0. 01） ，呼 吸 器 疾 患 0. 19 1 （P＜ 0. 01），循 環 器 疾 患 0 . 149 （P＜ 0. 01），泌 尿 器 疾 患 0 . 167 （P＜ 0. 01）であっ た ．相 関 行 列 より 細 菌 叢 に関 連 し た 独 立 要 因 と し て 抽 出 さ れ た の は ， 経 口 と 経 管 の み で あ っ た （ 表 4- b） ． （3）咽 頭 咽 頭 に お け る 有 意 な 相 関 比 は ， 経 管 と 経 口 （0. 518 ：P＜0. 0 1） ，意 識 レ ベル （0. 245 ： P＜0. 01 ） ， 意 思 疎 通 （ 0. 260 ：P ＜0. 01） ，呼 吸 器 疾 患 （0. 172 ：P＜ 0. 01），泌 尿 器 疾 患 （ 0. 169 ： P＜0. 01）の 5 項 目 Ⅱ 認 め られた ．独 立 し た要 因 と し て 抽 出 さ れ た の は ， 経 管 と 経 口 の み で あ っ た （ 表 4- c ） ． 5．細 菌 の 酸 素 要 求 性 の 比 較 （1）口 蓋 経 管 群 に お け る 好 気 性 菌 の 割 合 の 中 央 値 は ，36 ．0％ ，経 口 群 の 中 央 値 は ，7. 4％で経 管 群 に 有 意 に多 か った ．通 性 嫌 気 性 菌 の中 央 値 は ，経 管 群 で 36 ．0％， 経 口 群 で 2 8 . 3％であっ た． 嫌 気 性 菌 は ，経 管 群 で 5. 7％，経 口 群 で 16 . 5％と なっ た．通 性 嫌 気 性 菌 と嫌 気 性 菌 は ，いずれ も 有 意 差 を 認 めな かっ た （ 図 2- a）． （2）舌 好 気 性 菌 の 中 央 値 は ， 経 管 群 で 23 . 9％， 経 口 群 で 7. 7％ と なり ，通 性 嫌 気 性 菌 は ， 経 口 群 で 12 . 2％，経 管 群 で 42 . 6 ％と いず れ も 経 管 群 が有 意 に 多 か

8 っ た ． 一 方 ， 嫌 気 性 菌 は ， 経 管 群 3. 2％， 経 口 群 51 . 9％ と 、経 口 群 が有 意 に 多 い こ と が 認 め ら れ た （ 図 2- b）． （3）咽 頭 経 管 群 の 好 気 性 菌 の 中 央 値 は33 . 7％ ，経 口 群 で 8. 3％ ，通 性 嫌 気 性 菌 に お け る 経 管 群 は 45 . 9 ％，経 口 群 で 21 . 8％ で あり，好 気 性 菌 と通 性 嫌 気 性 菌 は ， 経 管 群 が 有 意 に 多 か っ た ． 経 管 群 の 嫌 気 性 菌 は6. 7％ ， 経 口 群 で 37 . 5％ で あ り ， 嫌 気 性 菌 は 経 口 群 で 有 意 に 多 か っ た （ 図 2- c ） ．

考 察

健 常 成 人 の 口 腔 や 咽 頭 の 細 菌 叢 は ， 歯 ， 舌 ， 口 蓋 ， 頬 粘 膜 ， 咽 頭 な ど に お い て 部 位 特 異 性 が あ る こ と が 報 告 さ れ て い る 7－_{1 0 )． 本 研 究 に お い て も 経 口 摂} 取 者 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 は 異 な り ， さ ら に 各 部 位 で の 細 菌 叢 は 経 口 群 と 経 管 群 で 明 ら か に 異 な る こ と が 認 め ら れ た ． 細 菌 の 種 類 の 豊 富 さ と 均 等 度 を 示 す 多 様 性 （S han no n 指 数 ）は， 経 管 群 で 低 く，経 口 群 で 高 かっ た．検 出 さ れ た 細 菌 属 の 種 類 は3 部 位 とも に 経 管 群 の 方 が 多 かっ たの で， 経 管 群 の 細 菌 叢 は 偏 り が あ る こ と が 示 さ れ た ． ま た 3 部 位 に共 通 し て 経 口 群 に 比 較 し て経 管 群 に 好 気 性 菌 が 有 意 に 多 か っ た ． 経 管 群 と 経 口 群 の 細 菌 叢 の 違 い に つ い て の 独 立 し た 要 因 は ， 経 管 ・ 経 口 で あ り ， 年 齢 や 歯 の 存 在 ， 疾 患 ， 歯 周 疾 患 と の 関 連 性 は 明 ら か で な か っ た ． 経 管 ・ 経 口 と い う 環 境 が 口 蓋 、 舌 、 咽 頭 の 細 菌 叢 に 関 与 し て い た ． そ し て 舌 と 咽 頭 で は ， 通 性 嫌 気 性 菌 が 経 口 群 よ り 有 意 に 多 い こ と が 認 め ら れ た ． つ ま り 経 管 群 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 に は 酸 素 の 影 響 下 に あ る 細 菌 が 多 い こ と に な る ． 経 管 群 は ， 開 口 や 口 腔 乾 燥 が 多 く1 1－_{1 3 )， 経 管 群 の 口} 腔 内 は 、 酸 素 の 曝 露 を 受 け た 環 境 で あ り , 細 菌 叢 は そ の 影 響 を 受 け て い る ． 一 方 ， 経 口 群 は 好 気 性 菌 と 通 性 嫌 気 性 菌 の 割 合 が 低 く ， 嫌 気 性 菌 が 有 意 に 多 い こ と が 舌 と 咽 頭 で 認 め ら れ た ． 口 蓋 で 経 口 群 の 嫌 気 性 菌 が 中 央 値 と 平 均 値 で 経 管 群 よ り 高 い も の の 有 意 で な か っ た の は ， 外 気 と 近 接 し て い る こ と と サ ン プ ル 数 の 影 響 が あ る と 考 え ら れ た ． 口 蓋 細 菌 叢 の 第 1 優 占 菌 種 は ， 経 口 群 で 通 性 嫌 気 性 菌 で あ る

Str eptoc occ us 属 で あ っ た ． こ の 結 果 は ，N ic ola ら 6 ）_{の 報 告 と 同 様 で あ っ た ．}

9

Str eptoc occ us 属 の 構 成 率 は 約 4 0 ％と さ れて いる ．これ は本 研 究 の 数 字 が 細 菌 構 成 率 の 平 均 値 で あ り ， 対 象 者 が 日 本 人 で 平 均 年 齢 が 86 歳 で あった が， Ni col a6）_{は 総 細 菌 数 に お け る Str eptoc occ us 属 の 割 合 で あ り ，1 8 ～40 歳 ま}

で の 米 国 で の 対 象 者 で あ る の で ， 一 概 に 比 率 を 比 較 で き な い ． し か し ， 本 研 究 に お け る 経 口 群 の 優 占 菌 種 は ，Str ept oc o cc us 属 以 外 で 通 性 嫌 気 性 菌 の Rothia 属 （ 平 均 1 2 ． 0％ ），嫌 気 性 菌 の Ac tinomyces（ 平 均 11. 8％） であり ， 優 占 菌 種 は Ni co l a6）_{と 同 様 で あ っ た ． こ れ ら の 3 菌 種 とも 検 出 者 率 が 10 0%} 口 腔 常 在 菌 で あ る ． 経 管 群 の 口 蓋 細 菌 叢 の 第 1 優 占 菌 種 は ， 好 気 性 菌 の Neis se r ia 属 で あ り ， 細 菌 構 成 率 の 平 均 が 29 . 8％ で経 口 群 よ り も 有 意 に 高 かっ た こ と は ，前 述 の酸 素 曝 露 を 受 け た 影 響 と 考 え ら れ た ． 口 蓋 細 菌 叢 の 優 占 菌 種 と し て は ， 通 性 嫌 気 性 菌 の Str eptoc o cc us 属 （18 . 4％）と R othia 属 （16 . 6％ ） が 挙 げ られ た． 3 種 の 優 占 菌 種 の 細 菌 構 成 率 は 全 体 の60 % 以 上 を 占 め，検 出 者 率 は いず れ も 10 0% で あり，嫌 気 性 菌 の比 率 は 低 かっ た． 舌 に お け る 経 口 群 の 細 菌 叢 の 第 1 優 占 菌 種 は嫌 気 性 菌 の Pr e votella 属 20 . 4％であっ た． 他 の 優 占 菌 種 は 口 蓋 と類 似 し た傾 向 を 示 し ，Ne is ser ia 属 12 . 3％，Str eptoc occ us 属 11. 2％ ，Roth ia 属 11. 0％ ，嫌 気 性 菌 の

Actinom yces 属 11. 6％と Veillo nella 属 9. 0％ で， 全 体 の 75 ％ 以 上 であり 、 嫌 気 性 菌 が 4 1 ％を 占 めた ．舌 では ，好 気 性 菌 の占 め る比 率 が 低 く ，嫌 気 性 菌 の 占 め る 割 合 の 多 い こ と が 舌 の 細 菌 叢 の 特 徴 で あ り ， 本 研 究 結 果 の 優 占 菌 種 は ，Tak es hi t a ら 1 4）_{や Ni co l a ら 6}）_{の 報 告 と 同 様 で あ っ た ．Ta k e s hi t a ら} 1 4）_{は ， 経 口 摂 取 の 高 齢 者 （ 平 均 年 齢 8 5 . 1 歳 ） であり， Ni co l a ら 6}）_{は 健 常 成} 人 が 対 象 者 な の で ， 年 齢 の 影 響 が 少 な く ， 経 口 摂 取 者 と い う 要 因 が 舌 の 細 菌 叢 を 規 定 し て い る と 考 え ら れ た ． 経 管 群 に お け る 舌 の 細 菌 叢 は 比 率 が 異 な る も の の 経 管 群 の 口 蓋 と 同 様 に 第 1 優 占 菌 種 は 好 気 性 菌 の Neis ser ia 属 （2 8 . 9％ ） であり ，Str ept oc occ us 属 （22 . 5％），Rothia 属 （21 . 3％ ）が 多 く ，3 菌 種 で 72 . 7％を 占 め， 他 の 細 菌 は ， 4％未 満 であり ， 偏 っ た 細 菌 叢 で あっ た ．3 つの優 占 菌 種 の 検 出 者 率 はい ず れ も 10 0％であっ た． 経 口 群 で細 菌 構 成 比 率 が高 か った 嫌 気 性 菌 の

10

以 下 で あ り ， 細 菌 構 成 比 率 が 有 意 に 低 か っ た ． 舌 に お い て 経 口 群 で は 嫌 気 性 菌 が 多 く 占 め て い た が ， 経 管 群 で は 嫌 気 性 菌 が 有 意 に 低 く ， 偏 っ て い た こ と が 特 徴 で あ っ た ．Tak e s hi t a ら 1 4）_{は 経 管 群 の 舌 か ら Str eptoc occ u s 属 や}

Rothia 属 が 多 く 検 出 さ れ が ， 経 口 群 よ り 少 な く 他 の 細 菌 種 が 5 0 ％以 上 を 占 め た と 報 告 で あ る ． 本 研 究 結 果 の Str epto c occ us 属 と Rothia 属 が 経 管 群 で 有 意 に 多 く ， 優 占 菌 種 以 外 は 30 ％ 未 満 と する結 果 と異 なっ てい た．調 査 対 象 者 の 背 景 は 大 き く 変 わ ら な い と 思 わ れ る が ，Tak e s hi t a ら 1 5）_{の 検 体 採 取 は ， プ}

ラ ス チ ッ ク ス パ チ ュ ラ に て 舌 背 部 を 擦 過 し た も の で あ っ た ． 本 研 究 は 滅 菌 綿 棒 の ス ワ ブ で 擦 過 し た も の で あ り ，Tak e s hi t a ら の 研 究 1 4）_{で は よ り 深 い 部 分 の 検 体}

採 取 を 行 っ て い る と 考 え ら れ た ． し か し な が ら ， 嫌 気 性 菌 の Pr e vot ella 属 ， Veillone lla属 ，Acti nomyces属 が 経 管 群 で 減 少 し た と す る 結 果 1 4）_{は ， 本 研}

究 と 類 似 し た 傾 向 で あ っ た ．

咽 頭 に お け る 経 口 群 の 細 菌 叢 の 第 1 優 占 菌 種 は嫌 気 性 菌 の Pr evote lla 属 18 . 0％で舌 と 同 じ で あった ．他 の優 占 菌 種 も 口 蓋 や 舌 と類 似 し た細 菌 叢 を 呈 し て お り ，Neis ser ia 属 15 . 4％，Str ept oc occ us 属 15 . 1％ ，Rothia 属 7. 0％，Acti nomyces 属 9. 6％ で， 65 ％を 占 めて いた． 咽 頭 に お い ても 優 占 菌 種 は Ni col a ら 6 )_{の 結 果 と 類 似 し て い た ．}

経 管 群 の 咽 頭 の 細 菌 叢 は ， 口 蓋 と 舌 の 細 菌 叢 と 同 様 に 優 占 菌 種 の 構 成 率 順 位 は 同 じ で あ り ，Ne is ser ia 属 （34 . 0％），Str eptoc occ us 属 （2 4 . 3％ ） ， Rothia 属 （1 4 . 7％） で あり，検 出 者 率 は い ずれ も 10 0％ であっ た． これ は，経 管 群 は 酸 素 の 影 響 が 口 腔 内 だ け で な く ， 咽 頭 ま で 影 響 し ， 細 菌 叢 を 規 定 し て い た と 言 え る ． 本 研 究 結 果 に お け る 経 管 群 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 優 占 菌 種 の 3 菌 種 は 一 定 の 割 合 を 占 め て い た ． 培 養 法 で は 誤 嚥 性 肺 炎 の 原 因 菌 と し て 嫌 気 性 菌 が 73 . 9～10 0％1 5－_{1 7 )と 高 い 検 出 率 で あ っ た も の の ， 次 世 代 シ ー ケ ン ス の 細 菌 叢} 解 析 に よ り Str eptoc o cc us 属 が 要 介 護 者 の 院 内 肺 炎 と 医 療 介 護 関 連 肺 炎 の 誤 嚥 性 肺 炎 に お け る 第 1 優 占 菌 種 とし て最 も 検 出 率 （ 4 2 . 9％ ） が 高 く ， 嫌 気 性 菌 は 少 な か っ た （4. 8％）1 8 )_{と 報 告 さ れ て い る ． ま た そ れ ぞ れ の 肺 炎 で 解 析 さ} れ た 結 果 と し て 医 療 介 護 関 連 肺 炎 に お け る 誤 嚥 性 肺 炎 の 第 1 優 占 菌 種 とし てStr eptoc occ us属 が23 . 2％1 4）_{， 院 内 肺 炎 で は16 . 2％2 0 )と す る 報 告 が あ り ，}

11 Str eptc occ us 属 は 肺 炎 の 病 態 や 原 因 と し て 重 要 な 役 割 を 果 た し て い る 可 能 性 2 1，_{2 2 )を 指 摘 し て い る ．Str eptc occ us 属 は ， 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 に お い て 経 口} 群 と 経 管 群 の 両 群 に お い て 優 占 菌 種 で あ っ た が ， 気 管 に 近 い 咽 頭 に お い て 経 管 群 の 方 が 高 い 細 菌 構 成 率 で あ り ， 誤 嚥 の リ ス ク が あ る が ゆ え に 経 管 群 は 誤 嚥 性 肺 炎 の リ ス ク が 一 層 高 い こ と が 示 唆 さ れ る ．Neis ser ia 属 は ， 医 療 介 護 関 連 肺 炎 と し て 2. 4％ ， 院 内 肺 炎 では 8. 8％ の 検 出 頻 度 1 9 )_{で あ っ た と さ れ て い る ．} Rothia 属 は 心 内 膜 炎 2 3 )_{や 口 腔 か ら の 血 行 性 感 染 に よ る 肺 放 線 菌 症} 2 4 )_{の 報} 告 は あ る が ， 誤 嚥 性 肺 炎 の 原 因 菌 と し て の 報 告 は 見 当 た ら な い ． 本 研 究 は ， 次 世 代 シ ー ケ ン ス 解 析 に よ り 培 養 で き な い 細 菌 も 含 め て 網 羅 的 に 経 管 群 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 の 全 容 を 解 明 し た ． 経 口 群 と 経 管 群 は 明 ら か に 異 な り ， 経 管 群 で 好 気 性 菌 の 構 成 比 率 が 高 く な れ ば ， 嫌 気 性 菌 が 減 少 す る と い っ た 細 菌 叢 の バ ラ ン ス が あ り ， 経 管 栄 養 と い う 口 腔 内 の 環 境 変 化 に よ る 細 菌 叢 の 違 い を 明 ら か に し た ． し か し な が ら ， 本 研 究 は 横 断 的 で あ り ， 歯 面 清 掃 や 保 湿 を 加 え た 粘 膜 ケ ア に よ る 細 菌 叢 の 変 化 は 明 ら か に な っ て い な い ． ま た 誤 嚥 性 肺 炎 と の 関 連 に つ い て 考 察 し た が ， 誤 嚥 性 肺 炎 発 症 時 の 口 腔 や 咽 頭 の 細 菌 叢 で な く ， 誤 嚥 性 肺 炎 の 原 因 菌 と 口 腔 の 細 菌 叢 と の 関 連 も 明 ら か で な い ． 今 後 は ， 口 腔 と 咽 頭 の 細 菌 叢 と 全 身 の 影 響 を 明 ら か に す る た め に ， さ ら な る 研 究 の 蓄 積 が 必 要 で あ る ． 結 論 経 管 栄 養 者 の 口 蓋 ， 舌 ， 咽 頭 の 細 菌 叢 は 共 通 し て お り ， 好 気 性 菌 の 構 成 比 率 が 有 意 に 高 く ，N eis ser ia 属 ，Str ept oc occ us 属 ，Roth ia 属 が 優 占 菌 種 で あ り ， 経 管 ・ 経 口 が 細 菌 叢 を 規 定 す る 独 立 し た 要 因 と し て 認 め ら れ た ． 謝 辞 稿 を 終 わ る に あ た り ， 御 懇 篤 な る ご 指 導 と 御 校 閲 を 賜 り ま し た 松 本 歯 科 大 学 大 学 院 歯 学 独 立 研 究 科 健 康 増 進 口 腔 科 学 講 座 主 指 導 教 員 小 笠 原 正 教 授 に 深 く 感 謝 申 し 上 げ ま す . ま た 調 査 に ご 協 力 を 賜 り ま し た 方 お よ び ご 家 族, 施 設 関 係 者 に 感 謝 申 し 上 げ ま す . 調 査 施 設 と の 対 応 を 引 き 受 け て く だ さ っ た ち む わ ざ 歯 科 の 島 田 茂 先 生, 調 査 実 施 に

12 協 力 し て く だ さ っ た 松 本 歯 科 大 学 の 朝 比 奈 滉 直 先 生, ま つ む ら デ ン タ ル ク リ ニ ッ ク の 松 村 康 平 先 生 と 荘 司 舞 様, 広 島 大 学 の 宮 原 康 太 先 生 に 御 礼 申 し 上 げ ま す. 本 研 究 は JS P S 科 研 費 18 K 09 89 7 の 助 成 を 受 け た も の で あ る .

参 考 文 献

1) 武 久 洋 三 ，小 山 英 雄 ，高 橋 奏 ， 清 水 紘 ，中 川 翼 ，小 笠 原 俊 夫 ，添 原 彰 ， 安 藤 高 朗 ， 桑 名 斎 ， 熊 谷 頼 佳 ， 進 藤 晃 ， 池 端 幸 彦 ， 猿 原 孝 行 ， 鉾 之 原 大 助 ． 医 療 が 必 要 な 要 介 護 高 齢 者 の た め の 長 期 療 養 施 設 の 在 り 方 に 関 す る 調 査 研 究 事 業 ． 日 本 慢 性 期 医 療 協 会 20 1 6 ；25 - 29 2) 経 管 栄 養 管 理 ガイ ド ライ ン．東 京 医 科 大 学 茨 城 医 療 セ ン ター20 09 ；5 （4）1－3 3) 栂 安 秀 樹 ，弘 中 祥 司 ，村 田 尚 道 ， 向 井 美 惠 ．要 介 護 高 齢 者 にお け る 日 和 見 感 染 菌 と 全 身 状 況 と の 関 連 ． 老 年 歯 学 20 08 ；23 （ 2） ：1 0 6‐ 114 4) 内 藤 浩 美 ，大 橋 一 之 ，神 部 芳 則 ， 草 間 幹 夫 ．長 期 経 管 栄 養 者 にお け る 口 腔 環 境 に 関 す る 検 討 - 唾 液 ｐ H と 歯 周 疾 患 罹 患 状 況 ， 咽 頭 細 菌 叢 に つ い て ‐ ． 口 科 誌 20 03； 52 （4 ）：18 1‐ 18 7 5) 竹 下 徹 ，山 下 喜 久 ．口 腔 常 在 微 生 物 叢 の 構 成 と健 康 と の関 連 ． JS L AB 2 0 1 6；2 7 : 3- 9

6) Ni col a S e gat a ， S us an K i nd er, P ert e r Ma nno n , K at he r in e P Lem on, Le vi Wa l dr on, D i rk G eve rs , Curt i s H ut t en h o w e r, Ja cq ues I za rd . Co m p o si t ion o f t he a du l t di ge s t i v e t ra c t

ba ct er ia l m i cr o bi o m e b as ed on s eve n m ou t h s u rf ac e s, t o n si ls , t hroa t a nd st o o l s am pl es. G ene m e Bi o lo gy 2 0 12；( 1 3 )4 2 R ，1- 18 7) Aas J A, P as t e r BJ, S t ok es LN , O l s en I, D e w h i rs t FE. D ef ini n g t h e norm a l b ac t e ri al fl ora o f t he o ral c avi t y. J Cli n Mi cr o bi o l 20 05 ; 4 3 (11 ): 5 7 2 1- 3 2 .

13

ana l ys i s of t he h u m an ora l m i cr obi o m e . Pr o c Nat l Ac ad S c i U S A 2 014 ; 111( 28 ): E2 87 5- 8 4 .

9) Pr eza D , O ls e n I, Wil lum s e n T, G r in d e B, Pas t e r BJ. D i ve r s i t y and s i t e-s pec if i ci t y of t he o r al m i cr ofl o ra i n t h e e ld e rl y. Eu r J Cli n Mi cr ob i ol I nf e c t D i s 2 00 9; 2 8( 9) : 1 0 33 -4 0.

10 ) S i m on-S or o A, Tom a s I, Cab re r a - Rub io R, M D Cat al an , B Ny vad , A Mi r a . Mi cr obi al g eogr a ph y o f t h e o r al c av it y. J D e n t Res 201 3; 9 2( 7) : 61 6 - 21 . 11) 小 笠 原 正 , 川 瀬 ゆ か , 磯 野 員 達 , 岡 田 芳 幸 , 蓜 島 弘 之 , 沈 發 智, 遠 藤 眞 美 , 落 合 隆 永 , 長 谷 川 博 雅 , 柿 木 保 明 . 要 介 護 高 齢 者 に お け る 剥 離 上 皮 の 形 成 要 因 舌 背 ，歯 ，頬 粘 膜. 老 年 歯 科 医 学 2 0 14 ; 2 9 (1 ): 11- 20. 12 ) K a w as e Y, O ga sa w ar a T, K aw a se S , Wa ki m o t o N , Ma t s uo K , Fa -Ch ih S hen, H as e ga w a H , K ak ino k i Y. F ac t o rs a ff e c t in g t h e f orm a t ion o f m e m b ranous s ubs t a nc e s i n t h e p ala t e s o f e l d e rl y p ers ons r equi ri ng nurs ing c a re . G e ro d ont o lo g y

20 14 ; 3 1 (3 ): 184 -9 3.

13 ) O g as aw a ra T, Ando u N , K aw a se S , K aw as e Y, Ma t su o K , O zak i Y, K ak in ok i Y. Pot e n t ia l f ac t o rs r e s po n s ibl e f o r

d rynes s of t he d ors um of t he t ong ue i n e l de r ly r e q uir in g c ar e . G er odont olo g y 2 0 0 8; 2 5( 4) : 21 7- 21.

14 ) Ta kes h it a T, Ya s ui M , Tom io k a M , N ak ano Y, S h ima z ak i Y, Yam a shi t a Y. Ent e ra l t u b e feed in g al t e rs t h e o r al ind i g en o u s m i cr obiot a i n e ld er l y a dult s . App l Ev i r o n Mi cr o bi o l. 2 0 11 ； 77 (1 9) 67 39- 4 5

15 ) Bar t let t J G , G orb ach S L . Tre a t m e n t o f a s pi rat io n p ne u m o n ia and pr im ar y lu ng abs c es s . Peni ci l l in G vs cl in d am yc in . Jam a 19 75 ; 2 3 4( 9) : 93 5- 7.

16 ) Bar t let t JG , G orb a c h S L, F ine gol d S M. T h e bac t e r io l o g y o f as p ir at i on pn e u m o n ia . Am J M ed 1 97 4; 5 6( 2) : 20 2- 7.

14

17 ) Lor ber B, S w e ns o n RM . Ba ct e r i ol o gy o f a s pi rat io n p ne u m o nia . A p r osp ect i ve s t ud y o f co m m unit y- a n d h o sp it a l- ac qu i re d c as es. Ann Int e rn Me d 19 74; 81( 3) : 3 2 9 -3 1.

18 ) Ak at a K , Yat e r a K , Ya m as ak i K , K a w an a m i T, N ai t o K , Nog uc h i S , Fuk uda K , Ishi m ot o H , Tan i gu c h i H, Mu k ae H . The s ig n if ic anc e o f or al s t rep t ococ ci i n pa t ie n t s w i t h

p neum oni a w i t h r is k fa ct o r s for as p irat i on: t h e ba ct e r ia l f lor al ana l ys is o f 1 6 S r ibos o m al RN A ge ne u s i n g

br onch o al ve o l ar la vag e fl uid . BMC P u lm M e d 201 6; 1 6( 1 ) : 7 9. 19 ) N oguch i S , M uk a e H, K aw an am i T, Ya m as ak i K , F uk u d a K ,

Aka t a K , Is him ot o H, Tanig uc hi H , Yat e r ae t K . Bac t eri o logi c a l a s se s s m ent of he a lt hc ar e -a ss o c iat e d p neum oni a us in g a c lo n e l ib rar y a n al ys is . PL o S O n e 20 15 ; 1 0 (4 ): e0 12 46 97.

20 ) Yat er a K , Nog uc hi S , Yam as ak i K, K aw a na m i T, Fu kud a K , Na it o K , Ak at a K, K i do T, Ishi m ot o H, S ak am ot o N , Ta ni gu c hi H , M uk a e H. D et e rm i n in g t he Pos si bl e Et io l o gy o f

H osp it a l- Acq ui r ed Pneum o nia U si n g a Cl o n e Li bra r y An al y si s in J ap an. Tohoku J Exp Me d 2 017 ; 24 2( 1) : 9- 17 . 21 ) 野 口 真 , 矢 寺 和 . 【 超 高 齢 社 会 にお ける 肺 炎 診 療 を 考 え る - 成 人 肺

炎 診 療 ガ イ ド ラ イ ン 2 0 17 の イ ンパク ト 】 細 菌 叢 解 析 法 か らわ かっ た 原 因 菌 と 検 出 菌 と の 相 違. 医 学 のあゆ み 20 1 8 ; 26 5( 3) : 20 7- 10 .

22 ) 野 口 真 , 矢 寺 和 , 迎 寛 . 呼 吸 器 感 染 症 の細 菌 叢 解 析 によ る新 知 見. M edi ca l Tec hno l ogy 2 01 7; 4 5( 5) : 53 0- 33 .

23 ) Tar u m ot o N, S u jin o K , Yam ag uc hi T, Um e ya m a T, O hn o H , M iya za k i Y, M ae s ak i S . A Fi rs t Repo r t o f Ro t h ia ae ri a

En doc ard it is Com p l ic at e d b y Cere b r a l H e m o rr h age . In t e r na l M ed i ci ne 201 2; 5 1( 23 ): 329 5- 99 .

24 ) 冷 牟 田 浩 人 , 鶴 田 伸 子 , 松 山 友 美 , 佐 竹 真 理 恵 , 大 楠 清 文 , 樋 口 和 行 . R ot h i a a e ri a に よ る 初 の 呼 吸 器 感 染 症 の 1 例 . 日 呼

15 吸 会 誌 2 0 10 ; 4 8 (3 ): 219 -2 3.

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図 表

表 1. 対 象 者 背 景 M a n n - W h i t n e y U t e s t * :P < 0 . 0 5 F i s h e r t e s t * * ：P ＜ 0 . 0 1 Χ ² 検 定 * * * :P < 0 . 0 1

17 表 2. 多 様 性 の 比 較 S han n o n 指 数 経 管 群 と 経 口 群 ：M a n n - W h i t e n e y U 検 定 部 位 で の 比 較 ：F r i e d m a n 検 定 S h a n n o n 指 数 ： 菌 種 の 数 や 菌 種 の 構 成 比 率 の 偏 り 度 、つ ま り 多 様 性 を 示 す 数 値 で あ る . 経 管 群 の 細 菌 叢 は 経 口 群 よ り S h a n n o n 指 数 が 低 い . 検 出 さ れ た 細 菌 は 経 管 群 の 方 が 多 い の で 構 成 比 率 が 一 様 で あ る 傾 向 を 示 し て い る ． 経 口 群 は 多 様 性 が 高 く 、 菌 種 の 構 成 比 率 に 偏 り が あ る こ と を 示 し て い る .

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表 3- a． 口 蓋 に お け る 細 菌 構 成 率 と 検 出 者 率

細 菌 構 成 率 ：M an n- W h it n e y U 検 定 検 出 者 率 ：Χ ²検 定

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表 3- b.舌 に お け る 細 菌 構 成 率 と 検 出 者 率

細 菌 構 成 率 ：M an n - W h it n e y U 検 定 検 出 者 率 ：Χ ²検 定

20

表 3- c .咽 頭 に お け る 細 菌 構 成 率 と 検 出 者 率

細 菌 構 成 率 ：M ann - W hit ne y U 検 定 検 出 者 率 ：Χ ²検 定

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