液腺

大 唾液腺原 発 腫瘍^に関^{す る}免疫組織 化学^的研究

金 沢 大 学 医 学 部 耳 鼻 咽 喉 科 学 講 座 は 任^こ古 川 佃 教 授う

西 村 俊 郎

く平 成

3

年

1

月

5 日

受 付

I

大 唾 液腺 原発 腫 瘍

1 0 7

例 く多型 腺 腫

6 0

例， 腺

リ

^{ン パ}腫

2 0

臥 基 底 細 胞 腺 腰

5

例， 粘 表 皮腫 瘍

3

例．

腺 房 細 胞 腰 瘍

3

例， 腺 様 薙 胸痛

^{1 0}

t札 腺 病

3

ヰ札 未 分 化 癌

3

イ那

と 正

常 腺 組 織

2 0

例

を

対 象

と し て

免 疫 組 織 化 学 的 検 討

を ケ ラ チ

^ン，

ビ メ

ン

チ

^ン，

デ

ス ミ ン

お よ び

g

li a l fib r ill a r

y

a c id i c

p

^{r o}

t

e i n

く

G F A P

l

の

中 間 径

フ ィ

ラ メ

^ン

ト と ア ク チ

^ン，

S

^．

1 0 0

蛋 白， 分 泌 成 分 く

^{s e c r e}

^t

^{o r}

y

c o m

p

o n e n

tl ^{に つ い}

て

お こ

な っ た

．

正

常 腺 組 織^に

お ^い て は ケ ラ チ

^ン， 分泌 成 分

が

導 管 系

上

皮 細 胞^に陽 性

で

，

ア ク チ

^ン

は

腺 房周 囲

か ら

遠位 線 条 郡 導 管 周囲^に存 在

す る

筋 上 皮細 胞^に陽性

で あ っ た

^． 多 型 腺 腰

で は

，

正

常 腺 組 織^に類 似

し た

免 疫 反 応 性

を 示 す

腺 管 横 棒 造

が

存 在

す る が

， 他^に

G F A P

陽性 細 胞

が

存 在

す る

点

で 正

常 腺 組 織

や

他

の

腫 瘍

と は

異

な る

免 疫 反応 性

を

有

す る も の で

あ

^っ た

^．

ビ

メ ン

ナ

^ン，

S

⁻

1 0 0

蛋 白

お よ び G F A P

^の免疫

反

応性

は

形 態 学 的に軟 骨 様 部

と

関連

が あ り

， 成 熟

し た

軟 骨 横 紙 胞

で は G F A P

^の反 応 性^{の み}

が

有 意^に低 下

し た

^． 多

型

腺 腫^に存 在

す る

腺管 内 層細 胞

と

属 平

上

皮 様 細 胞

を

除

く

上 皮 様 細 胞^の多

く が ビ

^{メ ン}

チ

ン_，

S

^．

1 0 0

蛋 白

と G F A P

陽 性

で あ る

こ

と か ら

形 態 学 的

な

間 葉 系 成 分， 特^に軟 骨 細 胞

^へ

^の分化 傾 向

を

有

し て

^い

る と

考

え ら れ た

^．

ア

^ク

チ

ン陽 性 細 胞

が

腺 管 様 構 造

と

関 連

し て

存 在

し て

^い

る

点

で

多

型

腺 凰 基 底 細 胞 腺 腫

お よ び

腺 横 顔 胸 痛^に類 似 性

が み ら れ

， こ

れ ら

腫 瘍^に

^{お け る}

筋

上

皮細 胞

^へ の

分 化傾 向

を 示 す も の と

考

え ら れ た

^一 腺

リ

ン パ腫， 粘 表 皮腰 凰 腺 房細 胞 腫 瘍， 腺 病

と

未 分 化 癌

は

筋

上

皮細 胞

^へ の

分 化傾 向

が み ら れ

ず筋

上

皮細 胞^へ

の

分 化傾 向^の

な

い腫 瘍

^と

考

え ら れ た

^． 腰 癌 細 胞

の

筋 上 皮 細胞

^へ の

分 化 傾 向

を S

^．

1 0 0

蛋 白の み

で

評 価

す る

の

は

不 適

切 で

形 態 学 的 所 見 特^{に腺 管様 構 造}

^と

^{の関 係}

^{と ア ク チ}

^ン

^{な ど}

^{収 縮 性 蛋 白の}免 疫 組 織 化 学 的 所 見

と

併

せ て

評 価

す

る ^べ き と

考

え ら れ た

^．

K e

y

^{w o r}ds m aj^{o r s aliv a r}

y g

la nd

t

u m o r_， im m u n oh is

t

o ch e mis

t

r

y

^{， m}

y

^O− e

p

i

t

helial c ell

，S⁻1 00

_p

r o

t

ein，

g

lial fibrilla r

y

^{a c}id ic

p

^{r o}

t

ein

近

年， 免疫 組 織 化 学 的 手 法^に

よ る

大 唾 液 腺 原 発 腫 瘍

の

各組 織 型^に

お け る

腫 瘍 細 胞

^の

免^疫

^反

^{応 性}

^が

^{検 討}

^さ

れ

^{I j 2I}， 形 態 学 的 観 察^{の み}

で は

得

ら れ な か

^っ

た

知 見

が

報 告

さ れ て

い

る

． 腫 瘍

の

生 物 学 的 態 度

と

^の 関 連^に

お

^い

て

． 新

た な

情 報

を

提 供

し

有

用 で あ る と

考

え ら れ る が ^い く ^つ か の

問 題 点

も

指摘

さ れ て

^い

る

^{3 I4 I．}

そ れ

に

は

報 告 者

に

よ る

染 色 法の相 違， 特^に組 織^の固 定 法

と 用

い

ら れ る

抗 体の特 異 性の相 違^の

た め

結 果^の比 較

が

困 難

な

場 合

が あ る

^こ

と

^， 単^一 の切 片

上

^で形 態 学 的^に同^一

と

考

え ら れ る

部 位^で

も

染 色 性

が

著

し く

異

な る

場 合^{3 1}

が あ る

こ

と が

あ

げ

ら れ る

． 同

じ

条 件 下で

の

各 組 織

型

相

互

^の

反

応性^の 異 同^に

^つ

^い

て

検 討

し た

報 告

も

少

な く

^，

そ

の結 果^{に つ}

^い て は

若 干の混 乱^{1I 2 −}

も

^み

ら れ る

^．

ま た

腫 瘍の性 状

を 理

解

す る 上 で

重 要

^{な 発 生}

母 地に

つ

い

て は

現 在^{二 つ の}仮 説

が

支 持

さ れ て

^い

る

^． ひ

と ^つ は B a

t

s a k i s ら

^{5 ト 7 Iに}

よ る も

^の

で

，

正

常

唾

液 腺の介 在 部 導 管に存 在

す る

幹 細 胞

が

様^々

な

分 化 度に腫 瘍 化

し

^，

そ

^の 分 化 傾 向

が

遠 位 腺 房 導 管 系

で

筋

上

皮 細 胞の関 与

が 大 き

い

も の

，

ま た は

近 位

小

葉 内

な ^い し

小 葉 間 導 管 細 胞^で筋

上

皮 細 胞

の

関 与^の

な

い

も

の の い

ず れ か

に優 位^に

な る

^こ A b br e via

t

io n s ニ A B C， a Vid in b io

t

in

p

^{e r o}

^x

ida s e c o m

p

le x

三

C K ， C

y t

^Ok e r a

t

in

ニ

D A B ，

dia min obe n zidin e

ニ

G F A P，

g

lial fibrilla r

y

^{a c}id ic

p

^{r o}

t

ein

3

H ． E ．， he m a

t

o x

y

lin a nd e o sin

i

N S E， n e u r O n S

p

^{e C}ific e n ola s e

ニ

P B S ，

p

ho s

p

ha

t

e buffe r ed s alin e

ニ

S■ C．， S e C r e

t

O r

y

c o m

p

^{o n e n}

t 三

電 頗， 電 子 顕 微 鏡

大 唾 液 腺 腫 瘍^の免 疫 組 織 化 学

と で

組 織 型

が

決 定

さ れ る と

^い

う も

の

で あ る

^． こ

の

説

は

唾 液 腺 腫 瘍

の

多様 性

を

説 明

す る

の に明 快

で は あ る が

，

こ の

よ う な

幹 細 胞の存 在

は

直 接 証 明

さ れ て

い

な

い． 一

方

D a r d i c k ら

^柚

は

こ の

よ う な

幹細 胞^の存 在

は

認

め な

い

と し て 正

常 唾 液 腺の

あ ら ゆ る

細 胞

が

腰 癌 化

す る

可 能 性

を 示

唆

し

腫 瘍 化 膿 管腺 房 単 位

の

概 念

で

組 織 発 生

を

説

明 し て

い

る が

， 完 全^に分化

し た

細 胞

が

脱 分化

し さ ら

に

膿 瘍 化

す る

可能 性^に

^つ

^い

て は

疑 問^5I

も あ る と さ れ て

^い

る

．

こ の

よ う

に唾 液 腺 腫 瘍^に

は

未 解 決^の問題

が

多

く

残

さ れ

^{て い}

る が

， 比 較 的頻 度

^の

低^い腫 瘍^であ

る た め

に通 常

の

形態 学 的観 察 以 外^の検 索

を

行

う

こ

と が

困 難

で あ ^っ た

^川．

し

^か

し

パ ラ フ ィ ン切 片^に対

し て

良 好

な

感 度

を も

つ免 疫 組 織 化学 的手 法

が

開発

さ れ

^{1 1 −}各 施 設

に

保 存

さ れ て

い

る

標 本

が

利

用

可 能

と な

っ

た

． 本 研 究

^{で は}

， パ

ラ

フ ィ ン包増

さ れ た

標 本

を

利 用

す る

^こ

と で

比 較 的 多数^の 症 例^に

^つ

^い

て

各組 織 型^に

お け る

各種 抗体の免疫 反応 性

と

各

腫

瘍

型

相

互

の反 応 性

の

異 同^に

つ

い

て

検 討

し た

^． 検 索

を

行

^っ た の は

， 中 間 径フ ィ ラ

メ

ン

ト で は ケ ラ チ

^ン，

ビ

メ ン

チ

ン，

デ

ス

ミ

ン お

よ び

g

li a l fib r ill a r

y

a c id i c

p

r o

t

e i n

く

G F A P

l， 筋 上 皮細 胞

^へ の

分 化

の

指標

と し て は ア

^ク

チ

^{ン1 2 1}， 外 分 泌 性 腺 管 細 胞

の

指 標

と し て は

分 泌 成 分

く S e C r e

t

O r

y

C O m

p

O n e n

tl

で

あ

る

^． 大唾 液腺 腫 瘍^に免 疫

反

応 陽 性細 胞

が

^み

ら れ

．

そ

の意義

が

問 題

と な っ て

い

る S

⁻1

0 0

蛋 白

も

検 索 項 目に含

め た

^{1 8 −．}

中 間 径フ ィ

ラ

メ ン

ト の

発

現

状 態

は

腰癌 細胞の起 源．

分

化傾 向^の評 価^に有

用 で

あ

る と さ れ て

^い

る

^{1 現1 5，．}

す な わ ち

， ケ

ラ チ

ン

は 上

皮 性の性 格

を も ^つ

細 胞に_．

ビ

メ ン

ナ

ン

は

間 英 系 細 胞^に

発

現

し

，

デ

ス ミ ン

は

筋 原性 細 胞

に，

G F A P は

神 経 膠 細 胞^に発

現 す る と さ れ

^て

き た

^． 現 在で

は

多

く

の例 外

が

知

ら れ て

お

り

こ の

よ う な

単 純

な

分 類

は 不

適

切

で

あ る が

形 態 学 的 所 見

と あ わ せ て

評 価

す る

T a b l e l

^．

D e m o g ^{r a} p hi ^c d a

t

a o f e a c h h i s

t

o l o

gi

^c

t y p

^e

2 7

こ

と

に

よ っ て

多

く

の情 報

が

得

ら れ る と さ れ て

^い

る

^封巾． 現在 大 唾 液 腺 腰 瘍

の

中^に

G F A P を

発 現

す る も の が

報 告

さ れ て

^お

り そ の

意義に つ い

て は

腫 瘍 細 胞

^の

神 経 系 細 胞

へ の

分化

を 示

唆

す る も の も

あ

る が

^一定

の

見 解

を

得

て

い

な

^い川

ま た

大唾 液 腺 腫 瘍

の

組 織 発 生^に

お

^い

て

常^に問 題

と な る

筋

上

皮細 胞

は 正

常唾 液 線

で は

腺 房 周 臥 介 在 部 導 管

と

^一 部^の腺 管

の

基 底 側^に存 在

す る と

考

え ら れ て

^い

る

^{1 8 ，． こ}

の

細 胞

は

収 縮 性 蛋 白

で あ る ア ク チ

^ン，

ミ オ

^シ ン

を も

^つ

が

細 胞 骨格

は

ケ

ラ チ

ン

で あ り

他

の

筋 原 性 細 胞

で は デ

ス ミ ン

で あ る

点^{1 射}

で

異

な

^っ

て

い

る

^．

し

か

し

こ

の

細胞に特 異 的

と

考

え ら れ る

物 質

は

現 在

ま で

報 告

さ れ て お ら

ず， 文 献 的に

は 上

記

の

収 縮 性 蛋 白

や

最 近

で は S

⁻

1 0 0

重臣自

が

代

用 さ れ る

^{1 3I} こ

と が

多^い．

S

^．

1 00

蛋 白

は 元

来 神経 組 織^に

お

い

て

見^い

だ さ れ た カ

ル シ

ウ

^ム結 合 蛋白^川

で あ る が

神 経 組 織

以

外^に軟 骨 細 胞， 脂肪 細 胞， 皮膚の ラ ン

ゲ

^{ル ハ} ン ス細 胞

な ど

多

く

^の存 在 部位

が

知

ら れ て

^い

る

^{1 8I．}

そ

の結 果^の解 釈^に

は

問 題

が あ り

論 談^の対 象

と な

っ

て

^い

る

． 本 研 究

で は

こ

れ ら の

陽 性細 胞

の

意 義^に

つ

い

て も

検 討

し た

^．

対 象

お よ び

方 法

対 象

は1 9 8 1

年

4

月

か ら1 9 9 0

年

7

月

ま で

． 金沢 大学 医 学 部 附 属 病 院 耳 鼻

咽

喉 科

と

富 山 県 立 中 央病 院耳 鄭

困

喉 科

で

大 唾 液 腺 腫 瘍

と

診 断

さ れ

外 科的^{に切 除}

^を

^受

^{け た}

1 2 0

例 中， 術 後^の病

理

学 的検 索

で

原 発 性 大

唾

液 腺

腫

瘍

と

判 明

し た1 0 7

例^の腫 瘍

で あ る

^． こ

れ ら

に

つ い て

組 織 学 的

な ら び

に免 疫 組 織 学 的検 索

を

行^っ

た

． 対 照

と し

て

炎

症 や

萎 縮 所 見^の

明 ら

か

で な

^い腫 瘍 周 囲^の

正

常 腺組 織

2 0

例

を 用 ^い た

． 腫 瘍^の発 生 部 位

^は

耳 下 腺

8 5

例，

顎 F

腺

2 2

例

で

数 例の舌

下

腺 原 発

と

考

え ら れ た 症

例

は

悪 性

腫

瘍 進 行 例

で

他の 口腔 内 小 唾 液 腺

原 発 も 否

定

で き な ^い た

^め

H i s

t

o l o

gi

c 丘 n di n g ^s N o

．

o f p ^a

^t

i e n

t

s M e a n a g ^e A g ^{e r a n} g ^e G e n d e r r a

t

i o

Pl e o m o r p hi ^{c a} d e n o m a

A d e n o l ym p h ^{o m a} B a s a l c e 11 a d e n o m a

M u c o e p i d ^{e r m o} id

t

u m o r

A c i n i c c e ll t u m o r

A d e n o i d c

y

s

t

i c c a r c i n o m a

A d e n o c a r C i n o m a

U n di 騰 r e n

t

i a

t

e d c a r C i n o m a

6 0

，

くp

^ニこ

4 8

，

S

^ニ

1 2I 2 0

，く

_p

^こ

2 0う

5

，

くp

^ニ

3

，

S

^{ニ こ}

21 3

，

くp

^ニ

3

1

3

，

くp

^ニ

3 1 1 0

，

くp

^ニ

4

，

S

^ニ

即

3

，

くp

^こ

2

，

S

^ここ

11 3

，

く

p^ニ

2

，

S

^ご

11

1 9 4 0 7 6 7 0 4 0 6

八

U

5

q

U

O

八

U

4 6 6 5 4 4 7 7

6 1 6 9 1 4

A一

6 7 7 7 5 7 6 7 7

−

．

−

−

−

．

．

．

5 3 3 6 7 6 6 6 1 4 4 3 2 3 6 6

1 こ 4 くM こ F う 1 9 ニ 1 1

．

5 こ 1 2 ニ 1 0 こ 3 1 こ 1 1 ニ 2 2 二 1

P

，

n u m b e r o f c a s e s a r i s i n g i ⁿ p ^{a r o}

^t

id

gl

^{a n d}

i

S

．

n u m b e r o f c a s e s a r i s i n g i ^{n s u} b m a n di b u l a r gl ^{a n} d

芸

M こ

R

^m

^a

^{l e こ} 飴 m a l e

．

に除 外

し た

^． 腫 瘍

は W H O

分類^岬に従

っ て

分 類

し

， 和 名^{に つ い}

て は W H O

分 類^に準 拠

し た

頭 頚 部 癌 取 扱^い 規 約 ^{抑 に}

よ っ た

^． 内 訳

は

多 型 腺 腫

6 0

例， 腺

リ

ン パ腫 く^{ワ ル}

チ

^ン腰掛

^{2 0}

例， 基 底細 胞 腺 腫

5

例， 粘^{表 皮 腫 瘍}

3

例， 腺 房細 胞 腫 瘍

3

イ札 腺 様 襲胞 痛

1 0

例， 腺 癌

3

例

お よ

び 未 分 化癌

³

例

で

あ

る

^． 各 組織 型 別

の

性 別， 平 均

T a bl e 2

．

L i 8

t

O f p ^r i m a r y ^{a n} ti s e r a

年 齢， 存 在 部 位

は

表

1

^に

示 し た

^{． こ}

れ ら

症 例^の切 除 標 本

は1 0

％ 中 性 緩 衝^{ホ ル}

^マ リ

^{ン に}

て

固 定 後， 金

沢

大 学 医 学 部 付 属 病 院 病

理

部，

な ら び に

富 山 県 立 中 央 病 院 臨 床 病

理

科

で

^パ

ラ

フ ィ ン包 埋

さ れ

所 蔵

さ れ て

^い

た も の で

あ

る

^． 各

々 の

標 本

の

^パ

ラ

フ ィ ン

ブ ^ロ

ッ

ク は

腫 瘍

の

最 大 径

を

含

む

割 面

と

他

に

複 数

が

作 成

さ れ て

^い

た

^． 各^{々 か}

ら

厚

A

n tib ^o d y ^a g a i n s t S p e c i R c i

t

y D il u ti o n S o u r c e

K e r a ti ⁿ

E し 1

く

m

o

n o e l o n a l

I

C A M 5

．

2

く

m o n o c l o n 山

1

u m e n

t

i n く ^{m o n o c} l o n a l 1 D e s m i n

く

_p o l

y

^c l o n 山

I

S

⁻

1 0 0

く

匹1 y ^c l

o

n

a

l

ン

G li a l 且b r ill a r y

a c i di c p ^{r o} t e i n

く

G F A P

l く

_{匹1 y} c l o n a l

l

S e c r e t o r y ^{c o m} p ^{o n e n} t

く

S

．

C

．Iく

_p o ly ^c l o n a l

l

A c

t

i n く ^m o n o c l o n a l 1

b r o a d k e r a ti n l こ 2 0 0

く

5 6 K D

ン

8

c

y

t o k e r a

t

i n 8

，

1 こ 5 0 1 8

v

i

m e n

t

i n l こ 5 0

d e 8 m i n l こ 5 0 0

S

⁻

1 0 0 p ^{r o} t e i n l ニ 1 0 0 0

G F A P l こ 5 0 0

S

^．

C

^．

1 ^ニ 5 0 0

m n s c l e a c ti n l ニ 1 0 0 0

く

_{山p b} ^{a a n} d

g ^{a m m a a c} 七山

1

l m m u n o 血 h

，

F r

a

n c e

B e c

t

o n D i c k i n 8 0 n

，

C A

，

U S A

D a k o p ^a tt 8

，

D e n 皿 訂 k B i o 8 C i e n c e

，

S w i

t

ヱe r l a n d

D a k

o

p 如 t

^s，

D e n 皿 訂 k D a k o p ^a tt 8

，

D e n m a r k

D a k o p

^a

tt s

，

D e n 皿

訂

k

E N Z O D i a g ^{n o s} 仏 c 8

，

N

Y

U S A

M o n o c l o n a l

，

M o n o c l o n a l a n ti b o d

_y

i s d e r i v e d f r o m m o u s e

i

P o l

_y

c l o n a l

，

P o l

y

c l o n a l a n ti b o d

_y

i 8

d e d v e d 魚

^．

^{o m r a} b bi

t．

＋

A c c o r di m i g t ^o M o ll

⁻

s c l a s s i 鼠 c a ti o n

T a bl e 3

^．

Li s

t

o f p ^{o s} i

t

i v e c o n

t

r o l A

n

t

ib o d y C o n t ^{r o} I P o 8 i ti v e 8 i

t

c

E

e

r a 也 n

E L

⁻

1 8 ki n

C A M 5

．

2 8 ki n

V i m e n ti ^{n 8} 虹 n

D e 8 m i 皿 8 t d a 也d m n 8 C l e

8 p i ^{n a} l c o r d 叩 血

^a

l e o r d

8 m 山1 i n t e

8

ti n e

s

m a u j血t e s t 血 e

B u P ^{r a} b a s a l l a

y

^{e r o} f e p i d ^{e r m} i s

，

B i m p l ^{e e} p it h ^e u a o f s w e a

t

gl ^{a n} d

s i m p l ^{e e} pi 也 ^e li a o r 8 W e a t gl ^{a n} d 丘b r o b l a s t 良 品 e n d o t h e li a l c e 11 s s t r i a t e d m u s c l e c e u 8

n e u r o n 山 鹿 g u 山 ^{c e} ll s

g li ^a l e e u s

血 c t 址 n g ^{e e} ll s

8 m

00

t h m 11 S C l e

，

p ^e r i v a s c u l a r m u s c l e c e ll s

大唾 液 腺 腫 瘍^の免 疫 組 織 化 学

さ 4

ノ^ノ

m

の

切

片

を

作 成

し

通 常

の

^へ

^マ ト キ

シ

リ

ン ^．

エ

オ ジ

^ンく

h e m a

t

o x

y

li n a n d e o s i n

，

H

．

E

J 染 色

を

行^い組 織 学 的 観 察^に供

し

， こ

れ

に連 続

す る 切

片

を 以

下の免 疫 組 織 化 学 的 検 討^に

用

^い

た

．

王

^． 免 疫 組 織 化 学 的検 討

免 疫 染 色 方法

は H ^{s u} ら

^−1−の

ア

^ピ

ジ

^ンー

ビ オ チ

^ン

コ

ン プ レ

_ッ

ク ス法 く

a v i d i n b i o

t

i n

p

e r o x id a s e c o m

⁻ p

l e x m e

t

h o d

，

A B C

法 1 ^に準

じ て

行^っ

た

^． 使

用 し た

抗 体

は

市 販^の

も の で

免 疫 動 物， 希 釈 倍 数， 特 異 性，

入

手 先

は

表

2

に

示 し た

^．

ま ず

^パ

ラ

フ ィ ン

切

片

を

型の

ご と く

脱^パ

ラ

フ ィ ン， 親 水 化

し た

後

0

．

3

％ 過 酸 化 水 素 水 加^メ

タ

ノ ^ー ル

く30

分 間

一

^{に て}内 因性^ペ

オ キ

シ

ダ

^ー

ゼ

活 性

を

阻 番

し た

． ホ ル

マ リ

^ン固 定模 本

^は

中 間径フ ィ

ラ

^{メ ン}

ト

の評 価に

お

^い

て

免疫 反 応性

が

低 下

す る

場 合

が あ る

こ

と が

知

ら れ て お り

^{3 I4 ，}，

0

^．

1

％

ト リ プ

シ ン t y p

e Il

く

S i

_g

m a

C h e m i c a l

，

S

t．

L o u i s

，

U

．

S

．

A

．

I

^に

て2 0

分 間^の消 化

処 理 を

2 9

適 宜 追 加

し た

^． 表

2

に

示 し た

希 釈倍 数

で

^一次 抗 体

を 4

D

C

^一 晩 反 応

さ せ た

後 玲

^リ

^ン酸 緩 衝 液 くp

h o s

p

h a

t

e

b u ff e r d s a li n e

，

P B S

，p

H 7

^．射で

1 0

分 間

3 匝1

洗 浄

し た

^． 二次 抗 体

^{と し て は}

^ビ

^{オ ナ}

^ン化

ウ

^サギ 抗

^マ ウ

^ス

王

g

G くX 2 0 0

，

V e c

t

o r L a b o r a

t

o r i e s

，

B u r li n

g

a m e

_，

U

^．

S

^．

A

．1

ま た は

^ビ

オ ナ

^ン化

ヤ ギ

抗

ウ サ

ギ

工

_g

G

二次 抗 体 く

^x 2 0 0

，

V e c

t

o r L a b o r a

t

o r i e s

I

を

室 涯

で 3 0

分 間反 応

さ せ た

^．

そ

の後

P B S で

同 様^に洗 浄

し

，

つ

い で

b i o

t

i n

⁻

S

t

r e

P t^，

a v id i n

p

e r o x id a s e c o m

p

l e x

く

S

t

r e

p t

A B C C o m

p

l e x

，

D a k o c o r

p

o r a

t

i o n

，

S a n

t

a B a r b a r a

，

C A

，

U

^．

S

^．

A

1^．

と 3 0

分 間 反 応

さ せ た

．

P B S で

洗 浄 後

0

．

0 0 0 6

％

H

2

0

z加

0

^．

0 5

％

ジ ア ミ

ノ ベ ン

チ ジ

^ン く

di a m i n o b e n z i di n e

，

D A

即

く

同 仁 化 学 研 究所， 熊 本J 溶 液^に

^{て 5}

分 間 発 色

さ

せ ． へ

マ ト キ

^シ

リ

ン に

て

核 染 色

を

行^い， 型

の ご と く

脱 水， 透 徹， 封

入 し

光 学顕 微 鏡 下の観 察に

用

^い

た

^． 陽性

コ

ン

ト ロ

^ー ル標 本

と し て

各抗 体^に対

し て

表

3

^に

示 し た

．喜．．．．．．−．1^こ う

h

ご− ．

−

い^{− − −} ．

．

二

ふ^{1 ．}

^モ

^．諦

ヰ

ニ

ニ三千^lニー

．I

lこ．

−

−一

t ^p 呼^一二 二^．

．

．

−

．豊

二

言

^二

^{ニ ヰ}

^{． 1}

Fi

g^．

1

^．

N o r r n a l s u b m a n di b u l a r

g

l a n d

く

A

，

H

^．

E

^．

s

t

a i n

，

X 1 7 01

^．

S

t

r i a

t

e d d u c

t

a l c e ll s a r e i n

t

e n s i v e l

y p

o s i

t

i v e f o r k e r a

t

i n

く

K L

⁻

1 J

く

B

，

A B C m e

t

h o d

，

C O u n

t

e r S

t

a i n e d w i

t

h h e m a

t

o x

y

i n

，

X 3

4

0 J

^．

M

_y

o e

p

i

t

h e li a l c e ll s l o c a

t

e d b a s a ll

y

i n a c i n a r a n d di s

t

a l s

t

r i a

t

e d d u c

t

a l

_p

o r

t

i o n s く ^{S m a} ll a r r o 可 ^{a r e}

P

O S i

t

i v e f o r a c

t

i n

く

C

，

A B C m e

t

h o d

，

C O u n

t

e r S

t

a i n e d w i

t

h h e m a

t

o x

y

li n

， X

1 7 0

1^．

P o s i

t

i v e i m m u n o r e a c

⁻ t

i v i

_{t y}

f o r s e c r e

t

o r

y

c o m

p

o n e n

t

i s l o c a

t

e d a

t

d u c

t

a l s u r f a c e m e m b r a n e a n d d u c

t

a l c o n

t

e n

t

s

t

^D

^，

^{A B C}

m e

t

h o d

，

C O u n

t

e r S

t

a i n e d ^w i

t

h h e m a

t

o x

y

li n

， X

1 7 0l

^．

組 織 切 片

を

剛 ¹，

ま た

， 陰性

^コ

^ン

ト ^ロ

^{ー ル}

と し て は

^一 次 抗 体

の

動 物 種

の

非 免 疫

正

常 血 清

を 用

^い

て

反応

が

陰性 化

す る

^こ

と を

確 認

し た

^． 疑 陽 性 反応

が

出 現

し た

場 合

は

陽 性

コ

ン

ト ^ロ

^{ー ル の}染 色状 態

と

同等 あ

る

^い

は そ れ

以 上

の

染 色 性

が

得

ら れ た も の を

免疫 染 色 陽 性

と し

，

そ れ

以 外

の も の は

全

て

免疫 染 色 陰 性

と し た

^一

11

． 各組 織

型

に

お け

^る腫瘍 細 胞 群^の

分

類

各組 織 型^{に つ い}

て W H O

分類

な ら び

に

そ

^の他^の文 献

上 の

記 載

を

参 考

と し

，

そ の

腫 瘍 型

を

特 徴 付

け る と

考

え ら れ る

細 胞 群

を

形 態 学 的^に分 類

し て

免疫 染 色^の結 果

と

対 比

し た

^． 分額

し た

細 胞 群

は

多型 腺 腰

で は

内， 外 側 腺 管

上

皮細 胞 群， 平 滑 筋横 紙 胞 軌 硝

子

様 細 胞 群一 粒 液 腰 横 紙 胞 乳 軟 骨 様 細 胞 群

^{で あ り}

他

の

腫 瘍

で は

表

7

−表

1 3

に

示 し た

如

く で

あ

る

^．

E L

統 計 学 的 処

理

一 つ

の

切 片上^に

お け る

免 疫 染 色 陽性 細 胞^の多 寡

を

，

各組 織 型

の

各細 胞群

の

代 表 的

な

部

を 5 カ

所 任 意^に選

び

光 学 顕 微 鏡

で 2 0 0

倍

^の

視

野

下に全 細 胞 数^に対

す る

陽 性 細 胞 数

の

比

を

求

め 以

下

の よ う な

^ス

^コ ア を

与

え

表 現

し た

．

T a bl e 4

．

工 皿 m u n O r e a e ti v ity ^o f

ス

コ ア 0

^， 全視 野^に陽 性 細 胞^の

^{み ら れ な}

^い

^も

^の■

ス

コ ア 1

， 全 視

野

に数 個^か

ら 3

％

以

下^の陽性 細 胞^{の み}

ら れ る も の

．

ス

コ ア 2

， 陽 性細 胞

が 3

％

よ り

多

く

，

5 0

％ 以 下^であ

る も の

．

ス

コ ア 3

， 陽 性 細 胞

が5 0

％

を

越

え る も の

^一

免 疫 反 応 性^{に つ い}

^{て は}

^{， ス}

^{コ ア 1 以 上}

^の

^も

^の

^を

陽 性

と し

， 各 組 織 型

の そ れ ぞ れ

^の細 胞 群^に

^つ

^い

^て

陽性 率

を

求

め た

． 計 算

は

陽 性 例 数

を

， 各組 織 型 毎^の観 察 対 象

と す る

細 胞 群

が

存 在

し た

例 数^の総 数

で

除

し て

行

^っ た

^．

ま た

各 細 胞 群 毎^{に ス}

^コ ア の

平 均

と

榛^{準 偏 差}

^を

^求

^{め た}

^{． つ}

ま り

免 疫 反 応 陽 性 率

^は

全 症 例^に対

す る

陽性 症 例^の比

を

示

し

，

ま た

^ス

^コ ア

^の平 均 値

は

各

切

片^に

お け る

平 均 的

な

陽 性 細 胞

の

比

を

，

そ の

標 準偏 差

は

切 片 毎^の差

を

表 現

す る と

考

え た

^． 各 抗 体^に対

す る

細 胞 群^に

お け る

免 疫 反 応 性^の

2

群 間

の

検 定

に は

陽 性 率^{に つ い}

て は F i ^s h e r の

直 接 確 率 計 算 法

を

用^い， ス

コ ア

^{に つ い}

て は S

^t

^u d e n

t の非 対 標 本^{の t}傾 定

を お

こ

な

^っ

た

^t 危 険 率 p く

0

⁻

0 1 を

有 意 差 あ

り と

判 定

し た

^．

n o r m a l s 山i v a r

y

gl ^{a n} d

s it ^e E L

^．

1 C A M 5

^．

2 明 m e n ti n D e s m i n S

⁻

1 0 0 G F A P S

^．

C

．

A c ti ⁿ M

_y

o e p i

^． く

n

^ニ

2 0

つ

0 ％

工 n ね n

s

ity

m e a n s e o r e O

．

O S

．

D

．

0

^．

0

0 ％ 0 ％

0

^．

0 0

^．

0 0

．

0 0

．

0 A c i n

a

l

く

n

^ニ

2 0

1

4 3 ％ 0 ％ 0 ％ 0

．

0 0

^．

0 0

^．

0 0

．

0 工 n

も

e ト

く

n

^ニ

2 01 1 0 0 ％

c a l

a

t e d 鼎

2

^．

9 0

．

3 5 S t r i

a

t ^e d

く

ⁿ

^ニ

2 0

1

1 0 0 ％

甘 2

^．

4 0

．

5 0 b 也 r

⁻ 仁^nニ

2 0

1

1d b 山 a r

8 6 ％ 廿 1

^．

9 1

．

1

8 6 ％ 0 ％

甘

1

^．

4 0

．

0 1

^．

0 0

^．

0

8 6 ％ 0 ％

l

ト

1

．

3 0

^．

0 0

^．

8 8 0

．

0

7 9 ％ 0 ％

十

0

．

3 6 0

^．

0 0

^．

7 2 0

^．

0

0 ％ 0 ％ 0 ％

0

．

0 0

^．

0 0

^．

0 0

^．

0 0

．

0 0

．

0

0 ％ 0 ％ 0 ％

0

^．

0 0

．

0 0

^．

0 0

^．

0 0

^．

0 0

．

0

0 ％ 0 ％ 0 ％

0

^．

0 0

^．

0 0

．

0 0

．

0 0

^．

0 0

^．

0

0 ％ 0 ％ 0 ％

0

．

0 0

^．

0 0

^．

0 0

^．

0 0

^，

0 0

．

0

0 ％ 0 ％ 0 ％

0

^．

0 0

．

0 0

．

0 0

^．

0

0 ％ 1 0 0 ％ 鼎 0

．

0 2

．

9 0

^．

0 0

^．

3 5

0 ％ 0 ％

0

^．

0 0

．

0 0

．

0 0

^．

0 5 7 ％ 1 0 0 ％

^土

井 廿

1

^．

2 1

^．

9

1．

1 0

^．

5 9 5 7 ％ 6 4 ％

^土

井

^＋

1

．

0 0

^．

6 4 0

^．

9 3 0

^．

4 8 7 9 ％ 0 ％

＋

0

^．

3 5 0

．

0 0

．

7 2 0

^．

0

■

b

a

B a l 1y l ^{o c a}

^t

^e d c e 11

．

動 くⁿ 血

b e

川

一 匹

^S

血

e c

a s e s 伽 ね1 n u 血 e r o f c

a

ヲ

^{e S}

^うX

^{l O O}

ⁱ

−

，

n

e

g 如i ^，

^e

i m m

皿

O r 組 頭 Y it y

ⁱ

＋

，

m e a n S

C O

r e l

S

皿 由 ^r l

．

O

i

廿

．

m e

a

n 8 C O

r

e i s r a n g ^e d 餌 ^皿 1

^．

O u n d e r 2

．

0

拙

m e a n S C O r e i s r a n g ^e d f r o m 2

．

O t o 3

^．

0

^．

M y ^o

^e

p i

^，

叩 呵 此 亜 血 ^{c e} u l o 血 e d i n a 血

如

^{0 血 n}

ⁱ

^{A 血}

^札

^{a 血 a l c e ll}

^り

^{五ね r c 血}

^励

^{血 r c a l a b d}

d u c t c e 11

i

S t r i a t e d

，

S t r i a t e d d u c t ^{c e} ll

i

I n t e r l o b u l a r

，

i n t e r l d b u l ^{a r} d u c t c e u

^．