Cymbidiumm o s a i c  v i r u s  (CyMV) ( 3 ，  12 ，  1 3 ，  15 ，  1 7 )  andω . o n t o g l o s s u m  r i n g s 戸 tv i r u s  (ORSV) ( 1 0 ，  16 ，  1 8 ) .   CyMV ，  r e p o r t e d   f i r s t  by J e n s e n  ( 1 1 ，  1 2 ) ，  h a s  a l r e a d y  b e

BY  CYMBIDIUM MOSAIC VIRUS 

Na 出lO bu l N oUYE 

I n   v i r u s  d i s e a s e s  r e p o r t e d  from many g e n e r a  i n   t h e   O r c h i d a c e a e ，  t h e  two  most commonly known v i r u s e s  a

目

Cymbidiumm o s a i c  v i r u s  (CyMV) ( 3 ，  12 ，  1 3 ，  15 ，  1 7 )  andω . o n t o g l o s s u m  r i n g s 戸 tv i r u s  (ORSV) ( 1 0 ，  16 ，  1 8 ) .   CyMV ，  r e p o r t e d   f i r s t  by J e n s e n  ( 1 1 ，  1 2 ) ，  h a s  a l r e a d y  b e e n  f o u n d  t o  be i n f e c t i o u s  t o  many p l a n t  

S

戸 c i e si n   11 g e n e r a  o f   o r c h i d s  ( 2 ，  15 ，  18 ，  20 ，  2 1 ) .   I n   t h e  p r e v i o u s  p a p e r ，  t h e   a u t h o r  showed t h a t  a  d i s e a s e  o f   Cymbidium  c a u s e d  by ORSV was e n c o u n t e r e d   v e r y  commonly i n  many n u r s e r i e s  i n  J a p a n  ( 8 ，  1 0 ) .   I n   t h e  p r

白^l

e n tp a p e r  t h e  a u ‑ t h o r  i d e n t i f i e d  t h e  v i r u s  c a u s i n g  c h l o r o t i c  a r e a s  and n e c r o t i c  s t r e a k s  i n  t h e  l e a v

白

o f

Cymbidium  a s  CyMV ，  on t h e  b a s i s  o f  t h e  i n v e s t i g a t i o n s  o f  symptoms ，  h o s t  r a n g e ，  p h y s i c a l  p r o p e r t i e s ，  t r a n s m i s s i o n ，  s e r o l o g y  and e l e c t r o n  m i c r 佃 ∞ p y .CyMV was  a l

回

i s o l a t e dfrom  C a t t / e y a   e x h i b i t i n g  l e a f  n e c r o s i s .  

MATERIALS AND METHODS 

The v i r u s  u s e d  i n  t h e  s t u d i

田

wasi s o l a t e d  from t h e  p l a n t s  o f   Cymbidium  and  Ca t t / e y a ∞ l l e c t e d  from many c o m m e r c i a l  o r c h i d  n u s e r i e s  i n  t h e  westem p a r t  o f   J a p a n ，  d u r i n g  t h e  p e r i o d  o f  1960 t o  1 9 6 3 .   D i s e a s e d  p l a n t s  c o l l e c t e d  were m a i n ‑ t a i n e d  i n  a  g r e e n h o u s e  f o r  t h e  i n o c u l u m  s o u r c e .  

Datura stramonium  was u s e d  a s  an i n d i c a t o r  p l a n t  f o r  many o f  t h e  e x p e r ‑ i m e n t s .   To  c o n f i r m  t h e  v i r u s  i n f e c t i o n ，  back i n o c u l a t i o n  was made on t h e  i n d i c a ‑ t o r  p l a n t s ，  and e l

配

t r o nm i c r o s c o p i c  o b s e l v a t i o n  was a l s o   made t o  d e t

配

tv i r u s   p a r t i c l e s  i n  t h e  i n o c u l a t e d  p l a n t s .   P r e p a r a t i o n  f o r  e l e c t r o n  m i c r o s c o p y  was made  by means o f  d i p  method a c c o r d i n g  t o  Brand

回

( 1 ) .Unl

白

so t h e r w i

記

s t a 凶， m e c h ‑ a n i c a l  i n o c u l a t i o n  w

酪

c o n d u c t e di n   t h e  u s u a l  manner i n   t h e  e x p e r i m e n t s  o f  h

四

t r a n g e ，  p h y s i c a l  p r o p e r t l

白

ando t h e r s .  

RESULTS 

1 .   Sym ρ t o m s  i n  n a t u r a / / y  i n f e c t e d  p / a n t s  

( a )   Cymbidium  Sympt . o ms i n  y . o ung l e a v

倍

a r ec h a r a c t e r i z e d  by c h l . o r o t i c  

p a t c h e s  and c . o n s p i c u . o u s ，  e l . o n g a t e d  c h l o r . o t i c  a r e a s ，  a b o u t  1  t . o   10  mm  i n  l e n g t h  

( F i g .   1 .   F ，  G ) .   So me  a d d i t i . o n a l  n e c r o s i s  a r e  s e e n . o n  t h e  young m o t t l e d  l e a v e s  o f  

some  . o f  t h e  d i s e a s e d  p l a n t s .  Sympt . o ms i n  . o l d e r  l e a v e s  a r e  c h a r a c t e r i z e d  by e l o n ‑

g a t e d  y e l l . o wish g r e e n  a r e a s ，  and sunken n e c r o t i c  s p o t s  and i r r e g u l a r l y   s h a p e d  

s t r e a k s  ( F i g .  

 ，1

A‑E).  The n e c r o s i s  i s

田

v e r e . o n  t h e  l o w e r  s u r f a c e   . o f  l e a v e s  ( F i g .  

1 .   C ，  E) c . o mpared w i t h  t h a t   . o n  t h e  u p p e r  s u r f a c e  ( F i g .   1 .   B ，  D ) .   l n  some i n ‑

s t a n c

偽

n

田

r . o t i csymptoms ap 戸 a r e dt . o   be n

配

r . o t i cr i n g  p a t t e m s ，  ab . o u t   2  mm  i n  

A 

1 6 2   ^{N .   I n o u y e}  

F i g .  

1. 

S y m p t o m s  o f  C y m b i d i u m  m ω a i c

^討

r u si n  

Cymbidium 

l e a v e s .  

(B

， 

D

，  F ，  G )  u p p e r  s u r f a c e ， 

(A

，  C ， 

E) 

l o w e r  s u r f a c e ， 

(H) 

C h l o r o t i c  m o t t l e  a n d  n e c r o t i c  s t r e a k s   o n  y o u n g e r  l e a f  o f  a r t i f i c i a l l y  i n f e c t e d  p l a n t .  

B 

F i g .  

2. 

S y m p t o r n s  o f  C y m b i d i u r n  r n ω a i c  v i r u s  i n  

Cattleya 

l e a v e s .  

(A

，  C )  u p p e r  s u r f a c e ， 

(B

， 

D) 

l o w e r  s u r f a

ce

. 

width and 5 t o   50  mm  i n   l e n g t h  ( F i g .   1 .   C ) .   The n e c r o s i s  a p p e a r e d  more f r e ‑ q u e n t l y  on t h e  b a s a l  p o r t i o n s  o f  t h e  l e a v e s  t h a n  t h e  upper p a r t s .   Do u b l e  i n f e c t i o n   o f  CyMV  and 

ORSV 

was a l s o  n o t i c e d  i n   Cymbidium  p l a n t  showing c h l o r o t i c  

町 田

s ， n e c r o s i s  and n e c r o t i c  r i n g s  ( F i g .   3 .   B ，  C ) .  

( b )   C a t t l e y a   α1  younger l e a v e s ，  l i g h t  brown n e c r o t i c  s p o 飴 ands t r e a k s  

a r e  formed i n  i n t e r n a l  t i s s u e ，  and sunken ，  r e d d i s h  brown n e c r o t i c  s t r e a k s  a r e  a l s o  

produced on t h e  lower s u r f a c e  o f  t h e  l e a v e s  ( F i g .  2 .   C ，  D ) .   o n   o l d e r  l e a v e s ，  s u n k ‑

en d a r k ‑ r e d  o r  brownish p u r p l e  p a t c h e s  a r e  formed on t h e  t o p  p a r t  o f  t h e  upper 

l e a f  ( F i g .   2 .   A) and d i s t i n c t  c o n c e n t r i c  n

配

r o t i cr i n g  pa 仕 e r n sa r e  produced on t h e  

l o w e r  s u r f a c

怠

o ft h e  l e a v e s .  Th

白

ep a t t e m s  a r e  c h a r a c t e r i z e d  by c o n c e n t r i c  n e c r o t i c   r i n g s  e n c l o s i n g  normal t i s s u e  o r  n e c r o t i c  s p o 岱 ， and becoming l a r g e r  compound  p a t t e m s  o v e r l a p p i n g  w i t h  e a c h  o t h e r  ( F i g .  2 .  B ) .   Ma ny f l o w e r s  o f  d i s e a s e d   C a t t ‑ l e y a   p l a n t s  a r e  o b s e r v e d  s y m p t o m l e s s .   However ，  l i g h t  c o l o r  removing b r e a k  o f   f l o w e r s  was o b s e r v e d  i n   a  v a r i e t y ，  L c .   Co r i

組

nde( F i g .   4 .   A) ，  and l i g h t   c o l o r   a d d i n g  b r e a k  i n   B c .   C l i f t o n v i l l e  and  L c .   A p h r o d i t e  ( F i g .  4 .   B ) .   The p r '

脱

n c eo f   v i r u s  i n   t h e s e  f l o w e r s  was d e m o n s t r a t e d  by b i o a s

田

yand e l e c t r o n   m i c r c

渇

c o p y . Do u b l e  i n f e c t i o n  o f  GyMV  and ORSV  was a l s o  n o t i c e d  i n   C a t t l e y a   p l a n t s  showing  l i g h t  

田

d d i s h ‑ p u r p l ep a t c h e s  and sunken n e c r o t i c  s t r e a k s  ( F i g .   3 .  A ) .  

Fi

g . 3 .  S y m p t o m s  i n  

Cattleya 

a n d  

Cymbidium 

c a u s e d  b y  b o t h  o f  C y m b i d i u m  m

曲

a i cv i r u s   a n d  

Od

o n t o g l

団

sumr i n g s p o t  v i r u s .  

(A) Cattleya

， 

(B) Cymbidium j Upper 

s u r f a c e ，  ( C )  l o w e [ "  s u r t a c e  o f  l e a f  

B'. 

2 .   T r a n s m i s s i o n  

F i g .  

4. 

L i g h t   ， ∞ I o r  b r e a k i n g  i n   t h e  f l o w e r s   o f  

Ca

t t l e y a . 

( A )  

Lc.  Co

r i

釦

l d e ，

(B) Lc. 

A p h r o d i t e .  

Ca u s a l  v i r u s  i s

伺

s i l yt r a n s m i t t e d  t o  h e a l t h y  p l a n t s  o f   Cymbidium ，  C a t t l e y a   and  Dendrobium  w i t h  d i s

白 田

d j u i

四

c o n t a i n i n gcarborandum a s  an a b r a s i v e .   Most o f  t h e   Cymbidium  s e e d l i n g s  become d i s e a s e d  a f t e r  a b o u t  1‑3 months from  t h e  i n

田

u l a t i o n ， b u t  a f t e r  19 days i n  one

回

s e . I n   C a t t l e y a   mωt o f  i n c u b a t i o n  

戸

r i o d sa r e  o b s e r v e d  t o  be a p p r o x i m a t e l y  1‑2 months ，  b u t  12 days i n   s h o r t e r   c a s e .   Th

白

eo r c h i d  p l a n t s  above m e n t i o n e d  a r e  f o u n d  t o   be h i g h l y  s u s c e p t i b l e   when i n ∞ u l a t i o n  i s   a p p l i e d  on t h e i r  younger l e a v e s  and r ∞ t s .   The v i r u s  i s   e a s i l y   t r a n s m i t t e d  by a l t e m a t e  c u t t m g s  o f  t h e  l e a v

白

o fh e a l t h y  and d i

田

a s e dp l a n t s  w i t h   a  r a z o r  b l a d e .   A l l  t h e  a t t e m p t s  t o  t r a n s m i t  t h e   v i r u s  by means o f   g r e e n  p e a c h   a p h i d  t o   Cymbidium  f a i l e d .  

3 .   Hust r a l l g e  and sym ρ t o m s  

Symptoms i n  s u s c e p t i b l e  p l a n t s  a r e  a s  f o l l o w s  : 

( a )   Cymbidium  Symptoms a p p e a r  f i r s t  on t h e  ba

阻

1 po

凶

ono f  t h e  younger 

1 6 4  

^{N.  Inouye} 

m ∞ u l a t e d  1

回

f . C h l o r o t i c  a r e a s  a p p e a r  s y s t e m i c a l l y  f i r s t   on t h e  l e a f  o f  t h e  new  g r o w t h .  A f t e r  a  few day ，  t h e  a r e a s  become more s h a r p l y  marked and d e v e l o p   i n t o  e l o n g a t e d ，  broad c h l o r o t i c  s t r e a k  ( F i g .   1 .   H ) .   I n   2  weeks t o  2  months a f t e r   t h e  f i r s t  a p p e a r a n c e  o f  t h e  symptoms ，  n e c r o t i c   s p o t s   and s t r e a k s   a p p e a r ∞ t h e   d i s e a e s d  l e a v e s .   The n e c r o s i s  a p p e a r s  f i r s t  on t h e  lower s u r f a c e  o f  t h e  l e a v e s ，  and  l a t e r  e x t e n d s  t o  t h e  upper s u r f a c e .   The growth o f  t h e  a H e c t e d  p l a n t s   i s   e x t r e m e l y   r e t a r d e d .  

( b )   C a t t l e y a   Brown p a t c h e s  app

^白

rf i r s t   i n   i n t e r n a l  t i s s u e  o f  t h e  young  m ∞ u l a t e d  l e a v e s  ( F i g .   5 .   C ) .   The d i s c o l o r a t i o n  i s   o b s e r v a b l e  t h r o u g h  t h e  c u t i c l e   o f  t h e  l e a v e s .   These p a t c h e s  become i n  c o a l e s c e n c e  with one a n o t h e r ，  d a r k e n i n g   t h e  e n t i r e  l e a f ，  and e x t e n d i n g  i n t o  t h e  p s e u d o b u l b .   Le a v e s  d e v e l o p i n g

配

v e r e l y n e c r o t i c  i n  whole s u r f a c e  drop p r e m a t u r e l y .  Sunken n e c r o t i c  s t r e a k s  a r e  a l s o  formed  ( F i g .   5 .   A ，  B ) .   o n   matured i n ∞ u l a t e d  l e a v e s ，  sunken brown n e c r o t i c  s t r e a k s  a r e   formed s l o w l y  expanding a l o n g  t h e  v e i n s .   I n   some o f  t h e  i n ∞ u l a t e d  p l a n t s ，  o n l y   brown p a t c h e s  app

^田

ron t h e  i n ∞ u l a t e d  l e a f ，  and a l l   t i s s u e s  o f  newly d e v e l o p e d   s h ∞ t  become n e c r o t i c  and d i e s  (F i g .  5 .   D ) .   P l a n t s  were

^田

v e r e l ya H e c t e d  when  t h e  s e e d l i n g s  and l e a v e s  were i n o c u l a t e d  a t  t h e i r  younger s 旬 geo f  g r o w t h s .  

Fig.  5.  Symptoms of Cymbidium m団aicvirus in artificially  infected  Catt/eya hybrids. 

( c )   Dendrobium  C h l o r o t i c  p a t c h e s  and f a i n t  m o t t l i n g  a p p e a r  on t h e  i n ‑

∞ 叫 a t e dl e a v e s .   C h l o r o t i c  a r e a s  r a n g i n g  from s m a l l  s p o t s  t o  l a r g e  m o t t l e d  p a t c h e s   app

回

ra s  t h e  s y s t e m i c  symptoms.  So me n e c r o s i s  a r e  a l s o  formed i n   t h e  m o t t l e d   l e a v e s .  

( d )   E ρ idendrum  L i g h t  b r o w n i s h ‑ r e d  d i s c o l o r a t i o n  d e v e l o p e d  on t h e  l e a v e s .   On  t h e  l o w e r  s u r f a c e  o f  t h e  l e a v e s ，  sunken n e c r o t i c  s p o t s  were f o r m e d .  

( e )   M i l t o n i a   Brown p a t c h e s  i n  t h e  forms o f  s p i n d l e  o r  r i n g  a p p e a r  f i r s t  on 

t h e  i n o c u l a t e d  l e a v e s  ( F i g .   6 .   A ) .   These n a t c h e s  s o o n  e x t e n d  t o  t h e  e n t i r e  l e a v e s  

A 

， 

B 

Fig.  6.  (A) Symptoms in the inoculated leaves of MiJto"ia infected  with Cymbidium  m団aicvirus.  (B) M団aicin De"drobium caused by Cymbidium mωaic virus. 

Fig.  7.  Symptoms of Cymbidium mωaic virus in several host plants. Lxコallesions on  (A) Datura stramo"ium

， 

(B) Che"otodium amara"ticolor

， 

(C) Tetrago"ia  ezρa"sa. 

and p s e u d o b u l b .   La t e r ，  a l l   t i s s u e s  o f  t h e  p l a n t  became brown and d i e d .   M i l ‑ t o n i a   p l a n t s  a r e  f o u n d  t o  be h i g h l y  s e n s i t i v e  t o  t h e  i n f e c t i o n  o f  t h e  v i r u s .  

( f )   Datura stramonium  N e c r o t i c   1 ∞ a l l e s i o n s  a r e  formed on t h e  i n ∞ u l a t e d   l e a v e s .   b u t  no s y s t e m i c  i n f e c t i o n  i s   n o t e d  ( F i g .   7 .   A).  The l e s i o n s  ap

戸

a ra f t e r   t h e  i n c u b a t i o n 戸 r i o do f  a b o u t  10 d a y s  i n  o l d e r  l e a v

偽

anda b o u t  20 t o  25 d a y s  o r   more i n  younger o n e s .  The l e s i o n s  i n  t h i s  p l a n t  i n d u c e d  by t h e  v i r u s  r e s e m b l e d   somewhat w i t h  t h o s e  c a u s e d  by TMV ，  a l t h o u g h  t h e r e  a r e  d i f f e r e n c e s  o f  i n c u b a ‑ t i o n  p e r i o d .  

( g )   C a s s i a  o c c i d e n t a l i s  and  C .   t o r a   S m a l l  b l a c k  n e c r o t i c  s p o t s  a r e  formed 

on t h e  i n o c u l a t e d  l e a v e s .   4‑6 days a f t e r  i n

侃

u l a t i o n .b u t  no s y s t e m i c  i n f e c t i o n  i s  

166  N .  

Ino

u y e  

n o t e d .  

(h) 

Cheno ρ odium a m a r a n t i c o l o r  and T e t r a g o n i a  e x ρ ansa  I n  C h e n o ρ0

・

dium a m r a n t i c o l o r ， 

1α~al

g r e e n  r i n g  s p o t s  a r e  fonned when t h e  i n o c u l a t e d  l e a v e s   b e g i n  t o 旬 m y e l l o w  ( F i g .   7 .   B ) .   1 n   T e t r a g o n i a  e

ゆ

ansa ， f a i n t  sma l 1   c h l o r o t i c   s p o t s  a r e  fonned 

1α~ly

on t h e   i n o c u l a t e d   l e a v e s ，  15‑30 days a f t e r  i n

ぽ

u l a t i o n ( F i g .   7 .  

C). 

The f o l l o w i n g   p l a n t   明 記 i e s were f o u n d   t o   be i n s u s c e p t i b l e   t o   Cy 加 1 V . N i c o t i a n a  tabacum  L . ，  v a r i e t y   B l i g h t   Ye l 1 ow ，  Sam sun ，  N.  r u s t i c a  L . ，  

N. 

g l u t i n o s a   L . ，  P e t u n i a  h y b r i d a   V i l m . ，  Lyco ρ e r s i c o n  e s c u l e n t u m   M i l 1 . ，   Solanum  Melongena  L . ，  B e t a  v u l g a r i s   v a r .   c i c l a   L . ，  Gom ρ hrena g l o b o s a   L

吋

Z i n n i a e l e g a n s   J a c q . ，  Cucumis s a t i v u s   L . ，  C u c u r b i t a  m o s c h a t a   Du c h . ，  Pisum s a t i v u m   L . ，  V i c i a  f a b a   L . ，  P h a s e o l u s  v u l g a r i s   L . ，   P .   aureus  Roxb. ，  Vigna c a t i a n g   Walp. ，  v a r i e t y   Daruma ，  T r i f o l i u m   i n c a r n a t u m   L . ，  Sesamum i n d i c u m  L . ，  

P h y t o l a c c a  americana  L . ，  Zea mays  L . ，  L i l i u m  formosanum  S t a p f ，  B r a s s i c a   r a ρ a  L .   v a r .   Komatsuna Ha r a ，  Ra ρ h a n u s  s a t i v u s   L . ，  v a r .   a c a n t h i f l o r m i s   M a i k i n o .  

4 .   P h y s i c a l   ρ r o p e r t i e s  

The p h y s i c a l  pro 戸 r t i e so f  t h e  v i r u s  i

^田，

l a t e di n  Japan were examined t o  com‑

pa

^問

witht h o s e  r e p o r t e d  i n  t h e  l i t e r a t u r e  f o r  CyMV. The v i r u s  i s  i n f e c t i v e  a t  t h e   d i l u t i ∞ o f  5x10

ーへ

b u t  n o t  10-

⁶•

However ， 

^田

mei s o l a t e  i s  s t i l 1   i n f

配

t i v ea t  d i l u ‑ t i o n  o f  

10-⁶•

The v i r u s  i s  i n f e c t i v e  a t  65 oC f o r  10 m i n u t e s  e x p o s u r e ，  b u t  i s  i n a c ‑ t i v a t e d  a t  70 o C .  The r e s u l t s  agr

，田

witht h o s e  r e p o r t e d  by J e n s e n  ( 1 2 ) ，  M u r a k i s h i   ( 2 1 ) ，  Co r b e t t  ( 3 )  and w h i t e  e t  a l  ( 2 4 ) .   I n   a g i n g  t

田

t s ， t h e  v i r u s  r e m a i n s  i n f e c t i v e   i n  e x p r e s s e d  j u i

民

a f t e rt h e  s t o r a g e  o f  o v e r  one month a t  18 o C .   Dr i e d  r

^白

i d u eo f   d i

^記

a s e dl e a f  j u i c e  i s  i n f e c t i v e  a f t e r  t h e  s t o r a g e  o f  8  days ，  b u t  n o t  a f t e r  10 days a t   20o C .  T o l e r a n c e  t o  a g i n g  o f  t h e  v i r u s  i n  t h i s  p a p e r  i s  somewhat h i g h e r  t h

組

t h

情

e r e p o r t e d  by Jen 田 n( 1 2 ) ，  M u r a k i s h i  ( 2 1 )

佃

d Co r b e t t  ( 3 ) .  

5 .   S e r o l o g y  

P a r t i a l l y  p u r i f i e d  v i r u s  f o r  immunity was o b t a i n e d  a c c o r d i n g  t o  t h e  f o l l o w i n g   produ

^田

s : Le a v e s  ( 7 0  g )  o f  a r t i f i c i a l l y  d i

^記

a s e d C a t t l e y a   were ground i n  a  g r i n d ‑ bowl with 2.5 v/w o f  0.1 M ph

^四

p h a t eb u f f e r ，  pH  7.0 ，  and t h e  j u i c e  was e x ‑

TABLE 1 

The r e a c t i o n s  i n  m i c r o a g g l u t i n a t i o n  t e s t s  o f  Cymbidium  m o s a i c  v i r u s  a n t i s e r u m  w i t h  CyMV 

(×1A0nttuiEuen

d

 

o n )   ^An t i ‑ C y M V  

serum 

d i l u t i o n   8  1 6   3 2   6 4   1 2 8   2 5 6  

州 州 州

tIt¥ 

州 _判+

C y ‑ 1 6  

tIt¥  tIt¥  tIt¥  tIt¥  tIt¥ 

* 

H e a l t h y  o r c h i d  

H + ! ‑ + … … s i g n s  i

ndicate

^戸函

itiver^飽ctions

，

…

"indicates n

o  r

悶.

c t i o n

.

5 1 2   1 0 2 4   2 0 4 8   4 0 9 6   8 1 9 2  

鈍 且 国

*  ^{+  +} 

tト十

*  ⁺ 

p r e s s e d  t h r o u g h  c h e e s c l o t h .   The e x p r e s s e d

田

pwas c e n t r i f u g a t e d  f o r  10 m i n .   a t   1 ， 500 

g. 

The supema

旬

n twas s h a k e n  w i t h  1/5 volume o f  c h l o r o f o r m  f o r  3  min ，  and c l a r i f i e d  by a  l o w ‑ s 戸 edc e n t r i f u g a t i o n .   The supematant f l u i d  was f u r t h e r   c e n t r i f u g a t e d  f o r  15 m i n .   a t  9 ， 000 

g. 

Mter t h r e e  c y c l e s  o f  h i g h ‑and l o w ‑ s p e e d  

白

n t r i f u g a t i o n s( 7 0 ，  000  g  f o r  1  h r .

組

d1 ， 500  g f o r  10 min ふ p a r t i a l l yp u r i f i e d   v i r u s  s u s p e n s i o n  was o b t a i n e d .  

An t i s e r u m  t o  CyMV was p r e p a r e d  by g i v i n g  a  r a b i t  4  i n t r a m u s c u l a r  i n j e c ‑ t i o n s  by t h e  u

田

o fF r e u n d ' s  a d j u v a n t  and 5  i n t r a v e n o u s  i n j e c t i o n s ，  w i t h  p a r t i a l l y  

140  120 

ぉ

100 

<J 

官民 80

、 . . .  

J 

0  ⁶⁰ 

g 

Z  40  20 

100  300  400  500  600  ^{700  800}  Length of particles in mμ 

Fig.  8. Distribution of particle length of Cymbidium mωaic vinぉi田，latedfrom  di蜘 sedCymbidium. 

Fig.  9.  Electron micrograph of Cymbid.ium mωaic virus from a leaf‑dip preparation  of Cattleya. (X 30

， α 氾)

168  N .  I n o u y e  

p u r i f i e d  v i r u s  s u s p e n s i o n .   p r e c i p i t i n  t

田

twas p e r f o r m e d  by m i c r o a g g l u t i n a t i o n   t e と h n i q u e .P l a n t  j u i c e  f o r  a n t i g e n  i n  t

田

twas d i l u t e d  t o  1/10 w i t h  0.85

労 組

l i n e . The r

田

u l t so f  t h e  p r e c i p i t i n  t

，田

t sa r e  shown i n  t a b l e  

1. 

The s p

配

i f i ct i t e r  o f   也 e

釦

t i s e r u mwas f o u n d  t o  b e  1: 2 0 4 8 .   The a n t i s e r u m  d i d  n o t  r

伺

c tw i t h  t h e   j u i

田

o fh e a l t h y  p l a n t s .  

6 .   E l e c t r o n  m i c r o s c o ρy 

A d r o p  o f  v i r u s  p r e p a r a t i o n  was p l a c e d  on t h e  c o l o d i u m ‑ c

佃

t e dg r i d  and a i r ‑ d r i e d  s 戸 cimenwas s h a d o w c a s t e d  w i t h  c r o m i u m .  The g r i d s  were examined u n d e r   t h e  e l e c t r o n  m i c r o s c o 戸・ F i g .8  shows t h e  d i s t r i b u t i o n  o f  p a r t i c l e  l e n g t h s .  

P r e p a r a t i o n s  from d i

記

a s e do r c h i d  p l a n t s  and a r t i f i c i a l l y  i n f

，配

t e dp l a n t s  c o n ‑ t a i n e d  s i n u o u s  p a r t i c l e s  s i m i l a r  i n  s h a p e

叩

ds i

民

t ot h o s e  d e s c r i b e d  f o r  CyMV  by  Gold and J e n s e n  ( 6 ，  7 ) .   The p a r t i c l e s  l e n g t h s  r a n g e d  from a b o u t  125 t o  700 m μ ， 

and t h e  m

四

tcommon l e n g t h  ap 戸 a r e dt o  be 475 mμ(Fig. 8 ，  9 ) .   The w i d t h  o f  t h e   v i r u s  p a r t i c l e s  i n  d i p ‑ p r e p a r a t i o n  s t a i n e d  w i t h  p h o s p h o t u n g s t i c  a c i d  f o r  e l e c t r o n  m i ‑ c r 佃 ∞ pya p p e a r e d  t o  be 13 mμ.  No r o d ‑ s h a p e d  p a r t i c l e s  were o b s e r v e d  i n  t h e   s 1

舵

i m e n sfrom h e a l t h y  p l a n t s .  

DISCUSSION 

The r e s u l t s  show t h a t 出 ec a u

回

1v i r u s  o f  t h e  f o l i a r  n

配

r o s i sd i

記

a s eo f   C y m b i ‑ dium  and  C a t t l e y a   p l a n t s  i s  Cymbidium mo

回

i cv i r u s .   The d i s e a s e  o f  t h

四

ep l a n t s   i s  c h a r a c t e r i z e d  by e l o n g a t e d  c h l o r o t i c  a r e a s  and n e c r o t i c  s t r e a k s  on t h e  l e a v e s  o f   Cymbidium ，  and r e d d i s h ‑ b r o w n  n e c r o t i c  s t r e a k s  and n e c r o t i c  r i n g  p a t t e m s  on 出 e l e a v e s  o f   C a t t l e y a .   These symptoms ap 戸 a r e dv e r y  s i m i l a r  t o  t h e  f i g u r e s  o f   CyMV  i n f e c t e d  p l a n t s  p r e s e n t e d  by o t h e r  w o r k e r s  ( 1 1 ，  12 ，  13 ，  14 ，  1 5 ，  17 ，  18 ，  1 9 ) .   Many f l o w e r s  o f   Cymbidium  and  C a t t l e y a   i n f e c t e d  wi 出 CyMVa r e  f o u n d   ωbe s y m p t o m l e s s  a s  shown by J e n s e n  ( 1 5 )  and Kado ( 1 8 ) .   However ，  on

回

me C a t t l e y a   h y b r i d s ，  v e r y  f a i n t   也氏。 l o r a t i o no f  f l o w e r s  i s  n o t i a d .   As  t h e  s 戸 nptoms a r e  f a i n t   ∞ l o r  b r e a k i n g ，  which many g r o w e r s  may have u s u a l l y  f a i l e d  t o  n o t i

田・

The v i r u s  p r o d u c 田 l o c a ll e s i o n s  on i n ∞ u l a t e d  l e a v e s  o f   Datura s t r a m o n i u m ，  Ca s s i a   o c c i d e n t a l i s   and  C h e n o ρ odium  a m a r a n t i c o l o r   a f t e r   t h e   i n c u b a t i o n  

戸 r i o d so f  10‑25 ，  4‑6 and 15‑25 d a y s ，  r e s p : ヨ c t i v e l y . The l e s i o n s  i n  t h e

記

p l a n t s were s i m i l a r  t o  t h o s e  r e p o r t e d  f o r  CyMV ( 1 7 ，  18 ，  19 ，  2 4 ) .   TMV  a l s o  p r o d u c

回

1 ∞ a l l e s i o n s  i n   D a t u r a  s t r a m o n i u m   and  C h .  a m a r a n t i c o l o r .   However ，  CyMV  i s  

e a s i l y  d i s t i n g u i s h e d  from TMV  by i t s  l o n g  i n c u b a t i o n  p e r i o d  f o r  t h e  d e v e l o p m e n t  o f  

l o c a l l e s i o n s .   Namely ，  t h o

民

l e s i o n son  Datura  c a u s e d  w i t h  TMV  can b e  d e t e c t e d  

w i t h i n  2‑3 d a y s  a f t e r  i n

ぽ

u l a t i o n ， w h i l e  thωe f o r  CyMV r e q u i r e d  10‑25 d a y s  

f o r  d e v e l o m e n t  and a p p e a r  f i r s t  i n  t h e  o l d e r  l e a v e s .   1 t  h a s  a l r e a d y  b e e n  d e s c r i b e d  

t h a t  t h e  l o c a l  l e s i o n  r e a c t i o n s  o f   D .  stramonium ，  C h .   a m a r a n t i c o l o r   and  C .  

o c c i d e n t a l i s   h a v e  been a  r e l i a b l e  m

回

n sf o r  i d e n t i f i c a t i o n  o f  CyMV ( 5 ，  18 ，  2 4 ) .  

P a r t i c l e s  o f  CyMV  r e p o r t e d  i n  l i t e r a t u r e s  a s  s i n u o u s  r o d s  a r e  f o u n d  t o  be 475‑480 

mμin l e n g t h  and t h e  d i a m e t e r   was  u s u a l l y  18 mμ(3 ，  6 ，  7 ，  20 ，  22 ，  2 3 ) .   However ， 

F r a n k i  ( 5 )  r e p o r t e d  t h a t  t h e  s i z e  o f  CyMV was 475  x  13 m μ ，  i n  p h o s p h o t u n g s t i c  

a c i d ‑ s t a i n e d  p r e p a r a t i o n s .   He d e s c r i b e d  t h a t  t h e  d i s c r e p a n c y  o f  t h i s  w i d t h  was  p r o b a b l y  due t o  t h e  f a c t  t h a t  p r e v i o u s  measurments had a l l   b e e n  made on m e t a l ‑ shadowed p r e p a r a t i o n s .   P a r t i c l e s  o f  c a u s a l  v i r u s  i n  t h e  p r e s e n t  p a p e r  a r e  s i n u o u s   r o d s  475 mμin l e n g t h  and a b o u t  13 

m.'1. 

i n  d i a m e t e r ，  and t h e  w i d t h  a g r e e s  w i t h   t h

団

er e p o r t e d  by F r a n k i .  

An t i s e r u m  r e a c t e d  s t r o n g l y  a g a i n s t  a l l  o f  t h e  j u i c e  o f  d i

総

a s e dp l a n t s   ∞ n t a i n i n g   t h e  p a r t i c l e s  o f  a b o u t  475 mμin l e n g t h .   The r

，白

u l tshows t h a t  s e r o l 唱 i c a lm e t h ‑ o d s  a r e  u s e f u l  i n  d e t

配

t i n gand d i s t i n 伊 i s h i n gv i r u s e s  i n  o r c h i d  p l a n t s ，  ^{a s  d e s c r i b e d}   by  Za i t l i n  e t  a l  ( 2 5 ) .  

The d i s e a

詑 伺

s u e dby CyMV i s   o b s e r v e d  t o   be w i d e s p r e a d  i n   C a t t l e y a ， 

Cymbidium  and o t h e r  o r c h i d  p l a n t s  i n  ] a p a n ， 崎 町 i a l l yi n  t h e  o l d e r  c o m m e r c i a l   Cymbidium.  The v i r u s  d i

記

a s ew i l l  p r o b a b l y  s p r e a d  from p l a n t  t o  p l a n t  by me‑

c h a n i c a l  m e a n s .   CyMV  was a l s o  i s o l a t e d  from p l a n t s  o f   C a l a n t h e ，  Dendrobium ，  E ρ idendrum ，  M i l t o n i a ，  Oncidium ，  P e r i s t e r i a ，  P h a l e n o ρ s i s ，  Vanda ，  and  Zygo ρ e t a l u m   i n  ] a p a n .  

SUMMARY 

Adi

蜘

s ec h a r a c t e r i z e d  by c h l o r o t i c  a r

田

sand  su叫~en， n

配

r o t i cs t r e a k s  on t h e   l e a v e s  o f   Cymbidium  p r o v e d  t o  be c a u s e d  by CyMV  from t h e  r e s u l t s o f  e x p e r i m e n t s   on h o s t  r a n g e ，  p h y s i c a l  p r o 戸 r t i e s ， and m o r p h o l o g y  o f  v i r u s  p a r t i c l e s .   The v i r u s   wωalso i

回，

l a t e dfrom  C a t t l e y a   e x h i b i t i n g  s u n k e n ，  r e d d i s h ‑ b r o w n  n e c r o s i s  and  n e c r o t i c  r i n g  p a t 旬 mson t h e  l e a v e s .   Many f l o w e r s  o f   Cymbidium  and  C a t t l e y a   i n f e c t e d  by CyMV  a

回

commonlysympt

佃

l l e s s ， a l t h o u g h  f a i n t  d i s c o l o r a t i o n  i s   o b ‑

記

r v e don

田

mev a r i t i e s  o f   C a t t l e y a .  Ca u

阻

1v i r u s  i s  e a s i l y  t r a n s m i t t e d  by d i

記

a

記

d p l a n t  j u i c e .   I t  i s  a l

回

t r a n s r n i t t e dby a r t i f i c i a l  a l t e m a t e  c u t t i n g s  o f  l e a v e s  o r  r o o t s  o f   d i s

伺

s e dand h e a l t h y  p l a n t s .   The v i r u s  i s   t r a n s m i t t e d  s y s t e m i c a l l y  t o   Cymbidium ， 

C a t t l e y a ，  E ρ idendrum ，  Dendrobium ，  M i l t o n i a ，  and  Zygo ρ e t a l u m .   L ∞ a l   l e s i o n s  a r e  formed on  Datura stramonium ，  C a s s i a  o c c i d e n t a l i s ，  Cheno ρ odium  a m a r a n t i c o l o r   and  T e t r a g o n i a   e.r•ρansa， i n  10‑25 ，  4‑6 ，  15‑25 and 1 5 ‑ 3 0  d a y s   a f t e r  i n o c u l a t i o n ，  r e s 戸 当 c t i v e l y .Among o t h e r  p l a n t s  t e s t e d ，  22 s 戸 d 田 i n1 1  f a m i l i 田 ，

a r e  f o u n d  t o  b e  i n s u s c e p t i b l e  t o  t h e  v i r u s .  

The v i r u s  i n  d i

民

a s e dp l a n t s  j u i c e  i s  i n a c t i v a t e d  a t  t e m p e r a t u r e s  o f  65‑70 oc  f o r  10 m i n u t e s  e x p o s u r e .   I t   w i t h s t α 対 d i l 4 t i o no f  5 

X 

1 0 ‑ '  o r  1 0 ‑

⁵ 

b u t  n o t  1 0 ‑

⁰

，  ^and  a g i n g   i n  v i t r o   f o r  o n e  month a t  18 o C .   D r i e d  r

田

i d u eo f  d i s e a s e d  p l a n t  j u i c e  i s  i n ‑ f e c t i v e  a f t e r  t h e  s t o r a g e  o f  8  d a y s ，  b u t  n o t  a f t e r  10 d a y s  a t  20 o

C; 

P a r t i c l

田

o ft h e  v i r u s   _ap戸~r u n d e r  t h e  e l e c t r o n  m i c r o s c o p e  a s  s i n u o u s  r o d s ，  a 加 u t4 7 5  mμin l e n g t h  and 13 mμin d i a m e t e r .   An t i

田

rumw i t h  t i t e r  o f  1 :   2048  i n  m i c r

伺

g g l u t i n a t i o nt

白

twas o b t a i n e d  from a  r a b b i t  b e i n g  i n j e c t e d  w i t h  p a r t i a l l y   p u r i f i e d  v i r u s  i n t r a m u s c u l a r l y  and i n t r a v e n o u s l y .  

Acknowledgments  The a u t h o r  w i s h e s  t o  e x p r e s s  h i s  s i n c e r e  t h a n k s  t o  D r .  

T.lnouye ，  t h e  Ohara I n s t i t u t e  f o r  A g r i c u l t u r a l  B i o l o g y ，  Okayama U n i v e r s i t y ，  f o r  

h i s  i n v a l u a b l e  a d v i c e  and c o n s t a n t  e n c o u r a g e m e n t s .   The a u t h o r  i s  a l s o  g r a t e f u l  t o  

1 7 0  

^{N.  Inouye} 

Mr. Shin‑ichiro Kohno of Kurashiki and Mr. Koji Kara田waof Nara

， 

both orchid  growers for their donations of many seedling plants of orchids for tests. 

LIτ

' E

RATURE CITED 

1. Brandes

， 

J.  1957.  Ein  elektronenmikrωLωpische SchnelImethode  zum Nachweis faden‑und  sta

抽 出 品

rmig町 Viren

，

insbesondere in Ka

r t o f f

e1dunkeleimen.  Nachrbl.  deut.  Pf1anzen‑

舵hutzdienst

，

9:  151‑152. 

2. Corbett

， 

M. K. 1959.  Ch1orotic  ringspot  of  Vanda orchid  caused  by  Cyrnbidium  m倒 ic virus.  Florida State Horticultural Soc.，  72:  398‑403. 

3.

白

'rbett，M. K. 1960.  Purif凶 ion by density‑gradient  centrifugation， electron  micr凶 ∞py， and pro戸rtiesof Cymbidium m岨 icvirus.  Phytopath.

， 

50:  346‑351. 

4.  Corbett

， 

M. K. 1967.  Some distinguishing  char

刷 出

sti^四 of the  orchid  strain  of  tobacco  m倒 ic

由

lS.PhytoJ:嵐山.，57:  164‑172. 

5.  Franki， R. 1. B.  1966.  1ω，lati叩， purification， and some pro戸rtiesof  two viruses  from culti・

vated Cymbidium orchids.  Australian Jour.  Biol. 

s c

丸 19: 555‑564. 

6. Gold

， 

A. H. and Jensen

， 

D. D.  1951.  An electron  micr臨 O戸 studyof  Cymbidium m欄 ic virus.  A m釘 .J'^叩 r.Bot.

， 

38:  577‑578. 

7.  Gold

， 

A. H.  and Jen甜 1

，

D. D.  1952.  Some ap戸rent virus  relationships  in  several  orchid  genera

， 

based on electron micrc淑:opy. Phy^{旬 戸}th.

，

42:  9. 

8.  Inouye

， 

N.  1964.  '65.  Virus di間 間oforchids. 1.  11.  Symptorns of virus  diseases  in Cym‑

bidium.  (in  Japanese) Ja戸nOrcl剖Soc.Bull.， 10 (1):  6‑10， 11 (1):  1‑6. 

9.  Inouye

， 

N.  1966.  Virus  di^{醐 措} of orchids.  III.  Syrnptorns  of  viruses in Cattleya.  (in  Japan白e)Japan Orchid Soc. Bul ，.112 (1):  2‑5. 

10.  Inouye

， 

N.  1966.  A virus  disease  of Cymbidium caωedby剖ontogl^{， 噛}umringspot  virus.  Ber.  Ohara Inst.  landw.  Biol.  Okayam且U

凶

v.

，

13:  149‑159. 

11. Jensen

， 

D.  D.  1950.  Mωaic of Cymbidium orchids.  Phyto^戸th.

，

40:  966‑967. 

12.  Jensen

， 

D.  D.  1951. M醐 icor black 由 回kdi聞 記ofCymbidium orchid.  Phytopath.

， 

41 :  401‑414. 

13.  Jensen， D. D.  19閃.Virus disea踊 ofCymbidiums.  Am釘 .Orchld Soc. Bull.， 22 

: ヲ ∞

‑804. 14.  JI釦 誕n

，

D. D.  1955.  Orchid diω，rders

， 

with s

戸詑

ialreference to virus dis飽ses. Am釘 .Orchid 

Soc. Bull.， 24:  756

ー

766.

15.  Jensen

， 

D. D.  1959.τbe 0民hids.Edited  by Carl L. Withner.

， 

pp.  431

ー 必

8.

16.  Jensen

， 

D. D.  and Gold

， 

A. H.  1951.  A virus  ringspot  of Odontoglossum orchid:  symp‑

ωms， transmission， and electron mi白 鴎 ∞

' p y .

Ph戸opath.，41:

臼

8‑653.

17.  Jensen

， 

D. D.  and Gold

， 

A. H.  1955.  Ha同 transmissionand electron micr^{凶 ∞}

^{' p y}

of  Cyrnbi・ dium m倒 icvirus with special reference to Cattloya 1^伺fnecrωis.  Ph戸opath.

，

45:  327‑

334. 

18. Kado， C. 1.  1964. Viru踊，Villains of orchid disord田 .Amer. Orchid Soc. Bull.， 33:  943‑948. 

19. Kado

， 

C. 1.  1964.  Cyrnbidium mωaic:  syrnptomatology  and properties  of  the  virus.  The  Orchid Digest

， 

April:  164‑168. 

20. Kado

， 

C. I.  and J^，町田町 D.D.  1964.  Cyrnbidium mωaic virus in Phalaenotsis.  Phy^旬path.

，

54:  974‑977. 

21.  Murakishi， H. H.  1958.  Hωt range， symωmatology， physical properties， and crc溺 ・protection studies of orchid virus isolates.  PhytoJ:組出.，48:  132‑137. 

22.  Muraki

副，

H. H.  1958.  S町ological and  morphological  relationshi

戸

among orchid由 』 描 .

Phyto戸th.

，

48:  137‑140. 

23.  Thon北町

ry ，

H. H.  and  Philippe

， 

M. R.  1964.  Orchid di関ase:Cattleya  bl国 間n n舵rotic streak.  Plant Disea田 Report也 ，48:  936‑940. 

24. White

， 

N. H.  and Goodchlld

， 

D.J.  1955.  Mωaic or black streak di鉛a田 ofCymbidium and 

。

therorchid hybrids. ]>四r. Aus回1.Inst.  Agric. Sci.

， 

^March:  36‑37. 

25. Zai出n，M.， Schechtman， A. M.， Bald， J. G. and Wildman， S. G. 1954. Detection of virus in  CatHeya orchids by田rol，唱icalme也ods. Phytopa出.， 44:  314‑318.