H29- - -007 30
A.
3 16
B.
B-1.
β- β-
3 16
β-
2 3 β- 2 4
5 9
Table
B-2.
Cat No. 17353-25 Cat No. 35434-05
Cat No. I2512-25G
Cat No. A6141-500G Sigma-Aldrich -N,N,N',N'- Cat No. 343-
01861 HPLC ACN Cat
No. 015-08633 Cat No.
208-02746 Cat No. 063-05895
DTT Cat No. 20291 Thermo Scientific
Trypsin Cat No. V5280 rLys-C Cat No. V1671 Promega
B-3.
Mascot search
3 16
Mascot search
1 g/L TEG 0.5 M Tris-HCl 5 mM EDTA
7M pH 8.0
100 μL 0.5 M DTT 1 μL
37℃ 90 1M 1.2
μL 37℃ 30
400
μL PD
Mini Trap G-25 Cat No. 28918007 GE
Healthcare 502.2 μL
1 mL
50 mM 40 μL
0.5 mL 20μL
1μg/μL Trypsin 0.5μL 0.2μg/μL rLys-C 1μL 37℃ 16
1%TFA 2%ACN
20 μL 60 μL
LC/MS/MS
B-4.
/
LC/TOF-MS Waters ACQUITY UPLC H-CLASS/Xevo G2 QTof
LC ACQUITY UPLC Peptide
BEH300 C18 (2.1 mm × 100 mm 1.7 µm 300Å) 0.2 mL/min
40℃ 0.1% /0.1% ACN =
99 1 0 min →65 35 60 min →50 50 70 min →10 90 70 75 min →99 1
75 90 min 2 μL
MS/MS ESI+
3.0kV 30V
MSE
20-40V 120℃
450℃ 50L/h
800L/h B-5.
BiopharmaLynx
5 70 min 300
Mascot Server
MS/MS Ions Search Swiss-
Prot Trypsin rLys-C
Carboxymethyl C 1 PKL
B-6. SDS-PAGE Bladford
1 5 μg
Precision Plus Protein Standard-Unstained Cat No. 1610363 Bio-Rad
Bullet Page One Precast Gel Cat No. 13077-04
Bullet CBB Stain One Cat No. 13542- 81
400V 10 min C.
Promega Trypsin rLys-C
TOF-MS Mascot Server
Swiss-Prot
Trypsin Mascot search
rLys-C
Entry name EC No
Table Table
SDS-PAGE
Fig. 1 Mascot search
C-1. β- EC 3.2.1.2
1, 2 G. max β- [AMYB_SOYBN]
G. max β-
G. max
3 H. vulgare β-
[AMYB_HORVU] [AMYB_HORVS] 2 H.
vulgare β-
H. vulgare 3/3
C-2. β- EC 3.2.1.23
4 6 A. oryzae β- [BGALA_ASPOR]
A. oryzae A.
flavus β- [BGALA_ASPFN]
100%
7 Swiss-Prot B.
circulans β-
TrEMBL
“galactosidase” 80,323
B. circulans β- [E5RWQ2_BACCI]
4/4
C-3. EC 3.2.1.4 EC 3.2.1.91 8 10
A. oryzae
EC 3.2.1.8
11 Swiss-Prot P.
coccineus
TrEMBL “cellulase”
79,571 P.
coccineus 30
12, 13, 16
3
Swiss-Prot
14, 15
5/9
D.
β- β-
3 16
Mascot search
16 12 Mascot search
4 3
1 Mascot search
Mascot Search
E.
1)
24 2018 4
2)
20
24 2018 4
3) G.
Fig. 1 SDS-PAGE 150
100 75 50 37
4 5 6 7
75 50 37 25 20
8 9 10 11 12 13 14 15 16
75 50 37 25 20
KDa 1 2 3
KDa KDa
Table 1 β- Mascot search
Table 2 β- Mascot search
EC
1 Glycine max 54, 30, 1 G. max LEC_SOYBN - Lectin 31 kDa 43%
16 kDa 2 G. max AMYB_SOYBN EC 3.2.1.2 Beta-amylase 56 kDa 13%
3 G. max ITRA_SOYBN - Trypsin inhibitor A 24 kDa 35%
4 G. max KTI1_SOYBN - Kunitz-type trypsin inhibitor KTI1 23 kDa 31%
5 G. max IBB1_SOYBN - Bowman-Birk type proteinase inhibitor 13 kDa 39%
6 G. max IBBD2_SOYBN - Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II 10 kDa 44%
8 G. max 2SS_SOYBN - 2S albumin 19 kDa 12%
2 Glycine max 54, 30, 1 G. max LEC_SOYBN - Lectin 31 kDa 43%
16 kDa 2 G. max ITRA_SOYBN - Trypsin inhibitor A 24 kDa 40%
3 G. max AMYB_SOYBN EC 3.2.1.2 Beta-amylase 56 kDa 18%
4 G. max IBB1_SOYBN - Bowman-Birk type proteinase inhibitor 13 kDa 39%
5 G. max KTI1_SOYBN - Kunitz-type trypsin inhibitor KTI1 23 kDa 26%
6 G. max IBBD2_SOYBN - Bowman-Birk type proteinase inhibitor D-II 10 kDa 44%
3 Hordeum vulgare 54, 42, 1 H. vulgare AMYB_HORVU EC 3.2.1.2 Beta-amylase 60 kDa 30%
35, 25, 2 H. vulgare AMYB_HORVS EC 3.2.1.2 Beta-amylase 60 kDa 30%
19 kDa 3 H. vulgare NLTP1_HORVU - Non-specific lipid-transfer protein 1 13 kDa 58%
5 H. vulgare IAAB_HORVU - Alpha-amylase/trypsin inhibitor CMb 17 kDa 18%
7 H. vulgare SPZ4_HORVU - Serpin-Z4 43 kDa 13%
8 H. vulgare BSZ7_HORVU - Serpin-Z7 43 kDa 8%
12 H. vulgare IAAA_HORVU - Alpha-amylase/trypsin inhibitor Cma 16 kDa 16%
Mascot search
EC
4 Aspergillus oryzae 111, 55 1 A. flavus BGALA_ASPFN EC 3.2.1.23 Probable beta-galactosidase A 110 kDa 42%
kDa 1 A. oryzae BGALA_ASPOR EC 3.2.1.23 Probable beta-galactosidase A 110 kDa 42%
5 Aspergillus oryzae 105, 55 1 A. flavus BGALA_ASPFN EC 3.2.1.23 Probable beta-galactosidase A 110 kDa 36%
kDa 1 A. oryzae BGALA_ASPOR EC 3.2.1.23 Probable beta-galactosidase A 110 kDa 36%
6 Aspergillus oryzae 67, 51, 1 A. flavus BGALA_ASPFN EC 3.2.1.23 Probable beta-galactosidase A 110 kDa 40%
31 kDa 1 A. oryzae BGALA_ASPOR EC 3.2.1.23 Probable beta-galactosidase A 110 kDa 40%
7 Bacillus circulans 225, 146, 1 B. circulans E5RWQ2_BACCI - Beta galactosidase 192 kDa 35%
127 kDa
Mascot search
Table 3 Mascot search
EC
8 Aspergillus niger 1 A. niger CBHA_ASPNC EC 3.2.1.91 Probable 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase A
49 kDa 32%
1 A. niger CBHA_ASPNG EC 3.2.1.91 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase A
49 kDa 32%
2 A. niger MANA_ASPNC EC 3.2.1.78 Probable mannan endo-1,4-beta-
mannosidase A
42 kDa 37%
3 A. niger CBHB_ASPNC EC 3.2.1.91 Probable 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase B
58 kDa 22%
3 A. niger CBHB_ASPNG EC 3.2.1.91 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase B
58 kDa 22%
4 A. niger PEPA_ASPNC EC 3.4.23.18 Aspergillopepsin-1 41 kDa 21%
5 A. phoenicis PEPA_ASPPH EC 3.4.23.18 Aspergillopepsin-1 41 kDa 21%
6 A. niger CBHC_ASPNC EC 3.2.1.91 Probable 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase C
49 kDa 14%
7 A. niger XYNC_ASPNC EC 3.2.1.8 Probable endo-1,4-beta-xylanase
C
36 kDa 10%
9 Aspergillus niger 1 A. niger CBHA_ASPNC EC 3.2.1.91 Probable 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase A
49 kDa 32%
1 A. niger CBHA_ASPNG EC 3.2.1.91 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase A
49 kDa 32%
2 A. niger MANA_ASPNC EC 3.2.1.78 Probable mannan endo-1,4-beta-
mannosidase A
42 kDa 30%
3 A. niger CBHB_ASPNC EC 3.2.1.91 Probable 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase B
58 kDa 22%
3 A. niger CBHB_ASPNG EC 3.2.1.91 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase B
58 kDa 22%
4 A. niger CBHC_ASPNC EC 3.2.1.91 Probable 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase C
49 kDa 16%
5 A. niger PEPA_ASPNC EC 3.4.23.18 Aspergillopepsin-1 41 kDa 14%
5 A. phoenicis PEPA_ASPPH EC 3.4.23.18 Aspergillopepsin-1 41 kDa 14%
6 A. kawachii GUNA_ASPKW EC 3.2.1.4 Endoglucanase A 26 kDa 4%
10 Aspergillus niger 1 A. niger PEPA_ASPNG EC 3.4.23.18 Aspergillopepsin-1 41 kDa 23%
1 A. phoenicis PEPA_ASPPH EC 3.4.23.18 Aspergillopepsin-1 41 kDa 23%
3 A. niger CBHA_ASPNC EC 3.2.1.91 Probable 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase A
49 kDa 4%
3 A. niger CBHA_ASPNG EC 3.2.1.91 1,4-beta-D-glucan
cellobiohydrolase A
49 kDa 4%
11 Pycnoporus coccineus 30, 26 kDa
12 Trichoderma 53, 16 kDa 1 T. viride GUX1_HYPRU EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 29%
longibrachiatum 3 T. reesei GUX2_HYPJE EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 18%
3 T. reesei GUX2_HYPJR EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 18%
4 T. harzianum XYN_TRIHA EC 3.2.1.8 Endo-1,4-beta-xylanase 21 kDa 20%
13 Trichoderma 54 kDa 1 T. reesei GUX1_HYPJE EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 33%
longibrachiatum 1 T. reesei GUX1_HYPJR EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 33%
1 T. koningii GUX1_TRIKO EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 33%
2 T. reesei GUX2_HYPJE EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 20%
2 T. reesei GUX2_HYPJR EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 20%
4 T. reesei GUN1_HYPJE EC 3.2.1.4 Endoglucanase EG-1 49 kDa 3%
4 T. reesei GUN1_HYPJR EC 3.2.1.4 Endoglucanase EG-1 49 kDa 3%
5 T. reesei GUN4_HYPJE EC 3.2.1.4 Endoglucanase-4 36 kDa 3%
14 Trichoderma reesei 55 kDa 1 T. reesei GUX1_HYPJE EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 34%
1 T. reesei GUX1_HYPJR EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 34%
1 T. koningii GUX1_TRIKO EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 34%
2 T. reesei GUX2_HYPJE EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 15%
2 T. reesei GUX2_HYPJR EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 15%
5 T. reesei GUN1_HYPJE EC 3.2.1.4 Endoglucanase EG-1 49 kDa 3%
5 T. reesei GUN1_HYPJR EC 3.2.1.4 Endoglucanase EG-1 49 kDa 3%
15 Trichoderma viride 1 T. viride GUX1_HYPRU EC 3.2.1.91 Exoglucanase 1 55 kDa 29%
2 T. reesei GUX2_HYPJE EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 18%
16 Trichoderma viride 1 T. reesei GUX2_HYPJE EC 3.2.1.91 Exoglucanase 2 50 kDa 18%
2 T. harzianum XYN_TRIHA EC 3.2.1.8 Endo-1,4-beta-xylanase 21 kDa 23%
2 T. reesei XYN2_HYPJQ EC 3.2.1.8 Endo-1,4-beta-xylanase 2 24 kDa 20%
2 T. reesei XYN2_HYPJR EC 3.2.1.8 Endo-1,4-beta-xylanase 2 24 kDa 20%
61, 45, 29, 25, 19 kDa
No data
58, 29, 22, 19 kDa 56, 48, 17 kDa 66, 38, 27, 25 kDa
Mascot search
66, 38, 27, 25 kDa
厚生労働科学研究費補助金（食品の安全確保推進研究事業）
既存添加物の品質確保のための評価手法に関する研究
（H29-食品-一般-007）
平成30年度研究分担報告書
既存添加物の基原同定手法に関する研究
〜香辛料抽出物と他規格との基原生物の比較調査〜
研究分担者 増本直子 国立医薬品食品衛生研究所 食品添加物部 研究員
研究協力者
西﨑雄三 国立医薬品食品衛生研究所 食品添加物部 研究員 中島 馨 国立医薬品食品衛生研究所
食品添加物部 研究員 杉本直樹 国立医薬品食品衛生研究所
食品添加物部 室長
A. 研究目的
「香辛料抽出物」は，平成 8 年に作成され た既存添加物名簿に収載されている品目の一 つであり，74種の基原生物を原料とする抽出 物である．これまで多くの既存添加物名簿収 載品目の規格を整備し，食品添加物公定書(以 下，公定書)への収載を行ってきたが，香辛料 抽出物に関しては原料とする基原種が多く，
このため実際に流通している製品の製法や成 分組成が大きく異なることが予想されること から，成分規格の整備が遅れており，公定書に 成分規格が収載されているものはない．しか し，香辛料抽出物は流通量も比較的多いため，
規格整備は大きな課題となっている．
既に流通しており，有効性と安全性が確認さ れているとみなされる既存添加物の規格整備
において，規格の設定根拠となる情報収集は 特に重要であり，由来 (基原の学名・和名) と 成分 (含量) が正しく設定されているかという 情報は規格整備時に不可欠である．このうち，
基原の学名の設定は，その添加物に想定外の 原料が使用されることを防ぐ目的がある．和 名のみでは基原生物が一義的に特定されない ことが少なくなく，この曖昧さが悪用されて 原料の不正使用などが起こる恐れがある．ま た，既存添加物は国内で自生も栽培もされて いない植物や海外で生産される微生物に由来 するものも多く，適切な和名が存在しない基 原もある．既存添加物の基原種を正しい学名 で設定するということは，その添加物の品質 と安全性を確保するために必須である．
動植物や微生物の学名・和名は，専門家によ る最新の研究によって見解が変わることも多 く，流動的である．法的な拘束力がある公的な 規格を作成する際には，最新の知見も重要で はあるが，定義中の基原種の学名及び和名は，
最新情報よりも設定根拠のトレーサビリティ を，すなわち，堅牢性を重視して設定すること されている．実際に，第 9 版食品添加物公定 書を作成するにあたっては，一般的に認知さ 研究要旨 昨年度に引き続き，既存添加物名簿収載品目の一つに分類される「香辛料抽出物」
について，今後の規格作成に当たり，定義に関する情報収集を行った．香辛料抽出物の74種 の基原を，同種を用いていると思われる天然香料の基原と比較したほか，海外における規格 の有無を調査した．その結果，天然香料では半数の基原で香辛料抽出物と完全に一致した．
また，日本の香辛料抽出物の基原として記載されているが，海外規格（アメリカ及び中国）
と比較したときその記載がないものが，8基原存在した．「香辛料抽出物」の規格作成時に は，他の規格の基原を考慮しながら，本研究で報告する情報を元に，基原生物について再検 討を行う必要がある．
れたデータベースや書籍を参照し，これらに 示された学名と和名が既存添加物の定義に採 用されており，設定根拠のトレーサビリティ が確保されている．一方，既存添加物名簿作成 時，基原の学名・和名については一定の基準の 元に調査がなされたが，その当時より既に20 年が経過しており，「香辛料抽出物」に含有さ れる74種の基原の学名・和名については，規 格案作成にあたって見直しが必要となってい る．このような背景から，昨年度は「香辛料抽 出物」の74基原の和名及び学名について，一 般的に認知されたデータベース（Ylist 及び Tropicos）をもとに再調査を行った．その結果，
多くの基原について，基原製法本質に記載さ れている学名がシノニムであることが確認さ れ，また，誤記と推測されるものも散見された．
一方，「香辛料抽出物」と似た基原物質を用 いている食品添加物のひとつに天然香料があ る．天然香料は，食品衛生法第四条第 3 項に おいて，「動植物から得られたもの又はその混 合物で，食品の着工の目的で使用される添加 物」と定義されたものである．天然香料の基原 物質名及び別名は，「天然香料基原物質リスト」
1)に記載されており，香辛料抽出物として流通 する食品添加物と基原生物が重なると思われ るものが複数存在しているものの，リストに は基原生物の学名は記載されておらず，どの ような植物種が基原となっているかの詳細な 情報は得ることはできない．しかし，今回，日 本添加物協会の協力により，現在日本国内で 流通していると思われる天然香料の原料につ いて学名等の情報を得られた．これらの情報 を香辛料抽出物の基原生物と比較することも，
基原についての情報を整理する上で不可欠で あると考えられる．
さらに，「香辛料抽出物」の基原の多くは海 外原産であり，海外の流通品を購入して使用 するケースも多いことが予測される．したが って，規格案を検討するための参考資料とし て，海外の規格も考慮に入れる必要があると 考えられる．
そこで本研究では，「香辛料抽出物」の規格 案作成及び見直しに向けて，現在の情報を整
理すべく(1)「香辛料抽出物」記載74基原につ いて天然香料の基原との比較，及び，昨年度に 引き続き (2) 海外規格の調査とその基原生物 との比較を行った．
B. 研究方法
B-1.基原物質の学名及び標準和名調査
以下に示す第 9 版食品添加物公定書作成時 の基原生物の学名と標準和名の調査法に従い，
公定書に未収載の香辛料抽出物について基原 生物の学名と標準和名を調査した．
基原の記載方針
1) 「和名（学名）」のスタイルで示す．
2) 学名は「属名＋種小名」の二名法で記す．
必要なときは変種 (var.) 等を示し，三名法 を用いる．
3) 種が特定できない場合は属名まで示す．そ の場合は「属」を付記する．
4) Synonym（シノニム＝別名）が広く使用さ
れている場合には，synonymをカッコ書き で併記する．
a) 学名の命名者は，各生物群の一般的な表 記法（拠り所とした資料・データベース）
を参考に，植物に関しては，短縮形があ る命名者については短縮形で表し（例 Linné→L.），さらに旧命名者をカッコ内 に示す．
5) 和名は以下のスキームに従って設定する．
・リスト（カッコ書き・基原製法本質）に 和名（カタカナ）はあるか？no→標準和名
↓yes
・和名は正しく基原生物を表している か？
↓yes no└修正して標準和名
・和名は学名のカタカナ読みか？
↓no yes└標準和名があるか？
↓ ↓no yes└標準和名 カッコ書き定義の和名を用いる（標準和 名・別名・慣用名は問わない）
なお，和名と学名が1：1対応でないもの については，表示された学名のみが基原で
あることを明示するために「～に限る．」
を加える．
6) 和名学名の確認には，以下に示した資料及 びデータベースを用いて行う．
○高等植物：東京大学小石川植物園園長の 邑田仁教授のご指導のもと，以下に示す2 つのデータベースを用いた．
a) 学 名 及 び 英 語 慣 用 名 ：Tropicos
（http://www.tropicos.org/）
b) 和名：BG Plants 和名-学名インデックス BGplant が 閉 鎖 の た め 現 在 は YList
（http://ylist.info）
「BG Plants 和名−学名インデックス」は
BG Plants データベースで用いられる植物
名，特に，日本産植物の和名と学名に関す る詳細情報の整備を目的として，米倉浩司
（東北大学）と梶田忠（東京大学〔現・琉 球大学〕）を中心に作成された．
B-2. 海外規格の調査
香辛料抽出物に挙げられている74基原につ いて，以下の海外規格に記載されているかを 前年度に引き続き調査した．香辛料抽出物に 挙げられている74基原と学名が一致している 品目を規格ありとみなした．
a) FCC11：Food Chemicals Codex (米国食品用 公定化学品集)
b) CFR：Code of Federal Regulation Title 21 (米 国 FDAが規制する連邦食品医薬品化粧品 法(FFDCA：Fededal Food, Drug, and Cosmetic Act))
c) GB2760-2014：中国食添使用基準
C. 結果および考察
C-1. 国内で流通する天然香料との比較
日本添加物協会から得られた，国内で流通 する天然香料の原料について，香辛料抽出物 の74基原の基原生物と比較した（表1）．なお、
天然香料原料として報告された学名について
もTropicosで確認した上で比較した．
74基原のうち，トウガラシとパプリカにつ いては香辛料抽出物と天然香料とで扱いが異 なっていた．香辛料抽出物ではトウガラシと
パプリカは別の品目として扱われており，ト ウガラシの基原物質は「トウガラシ」と「キダ チトウガラシ」であるのに対し，パプリカの基 原物質は「トウガラシ」のみ（使用部位はトウ ガラシと同じ）と，区別されている．一方，天 然香料では，トウガラシとパプリカは同一の ものとして扱われているようでああった．今 回の調査では，香辛料抽出物のパプリカは天 然香料のトウガラシとの比較することで考察 した．
香辛料抽出物のうち，天然香料の基原と全 く同じ種を用いていると思われるものは，ち ょうど半数の38品目であった．また，両者を 比較して，天然香料の方が幅広い基原を用い ていると思われるものが26品目，香辛料抽出 物のほうがより多くの種を基原としていると 思われるものが 4 品目であった．さらに，香 辛料抽出物と天然香料とで異なる植物種を基 原としていると思われるものが6品目あった．
以下に詳細を示す．
a) 香辛料抽出物のうち，天然香料の基原と全 く同じ種を用いている品目
アサノミ，アニス，ウイキョウ，オールスパ イス，カショウ，カレーリーフ，キャラウェー，
クミン，クレソン，クローブ，ゴマ，コリアン ダー，サッサフラス，サフラン，サルビア，サ ンショウ，シソ，ジュニパーベリー，ショウガ，
スターアニス，セイヨウワサビ，セロリー，タ マネギ，タマリンド，タラゴン，チャイブ，チ ャービル，デイル，ニンジン，パセリ，ハッカ，
ヒソップ，フェネリーグ，ペパーミント，ミョ ウガ，レモングラス，レモンバーム，ローズマ リー
特筆すべきものについて，以下に示す．
○6. ウイキョウ：香辛料抽出物，天然香料とも
にFoeniculum属植物を基原としており，共通
し て 基 原 種 に 挙 げ ら れ て い る の は ，
「Foeniculum vulgare Mill.」である．天然香料 で は 「F. vulgare Miller spp. Piperita (Ucria) Countinho」も基原種とされており，おそらく
「F. vulgare subsp. Piperitum Cont.（Foeniculum vulgare Mill.のシノニム）」のことであると思わ れた．また，天然香料の原料として挙げられて
いる「Foeniculum vulgare var. dulce (Mill.) Batt.
& Trab.」は Tropicos に記載がなかったが，
「Foeniculum vulgare Mill.」のシノニムである と い う 見 解 も あ り 3)， す べ て 「Foeniculum vulgare Mill.」由来である可能性が示唆された．
しかし，天然香料と比較する際にはより詳細 な調査が必要である．
○31. サルビア：香辛料抽出物では「Salvia lacandulaefolia」が基原として挙げられている が，これに該当する学名がTropicos にはない．
しかし，天然香料原料の基原として示されて いる「Salvia lavandulifolia Vahl」の誤記と思わ れる．この推測どおりであれば，本品目につい ては香辛料抽出物も天然香料も同じ基原種を 用いているといえる．
○57. パセリ：Tropicosでは，香辛料抽出物で 基 原 と し て 挙 げ ら れ て い る 「Petroselinum sativum Hoffm.」と天然香料で基原として挙げ られている「Apium petroselinum L.」とはシノ ニムの関係にあるとされている．両者は，香辛 料抽出物と天然香料の基原物質の記載には，
「パセリ（Petroselinum crispum (Mill.) Fuss）」 ともシノニムの関係にあるとされているが，
Tropicos においてはシノニムの関係にあるか
どうか言及されていない．
b) 香辛料抽出物のうち，天然香料の方がより 広い植物種を原料にしている品目
アサフェチダ，ウイキョウ，ウコン，オレガ ノ，カモミール，カラシナ，カルダモン，カン ゾウ，クチナシ，ケシノミ，サボリー，シナモ ン，スペアミント，タイム，トウガラシ，ナツ メグ，ニガヨモギ，ニジェラ，バジル，パプリ カ，ホースミント，マジョラム，リンデン，ロ ーズ，ローレル，ワサビ
以上に挙げたもののうち，アサフェチダ，ウ コン，カンゾウ，シナモン，トウガラシ，ナツ メグ，ニガヨモギ，ラベンダー，ローレルの9 品目では，天然香料の基原として例示されて いる植物種は香辛料抽出物のものと全く同じ だが，天然香料の場合はその近縁植物も含む 旨の記載があり，原料種が広範囲になってい る．この場合の近縁植物がどこまでを指すの かについては不明である．
そのほかの特筆すべきものについて，以下 に示す．
○8. オレガノ：シソ科の「Origanum vulgare L.」
は天然香料でも香辛料抽出物でも基原とされ ている．天然香料はクマツヅラ科の Lippia属
（イワダレソウ属）も基原としており，科の異 なる植物が原料となっている．
○13. カモミール：香辛料抽出物，天然香料と もにキク科植物が基原として挙げられており，
「Anthemis nobilis L.」や「Matricaria chamomilla L.」は両者で共通している基原種である．天然 香料の原料として挙げられている「Ormenis multicaulis」は，Tropicosに該当する種が収載 されていなかったが，「Cladanthus mixtus (L.) Chevall.」のシノニムであるという見解もあっ た4)．本種についての学名には諸説あり，天然 香料において実際に原料となっているものが 何なのか調査する必要があると思われた．
○15. カルダモン：香辛料抽出物，天然香料と もにショウガ科の「Elettaria cardamomum (L.) Maton var. minuscula Burkill」を基原としており，
天然香料の場合は Elettaria属にまで基原を広 げている．なお，天然香料の原料和名として挙 げ ら れ て い る 「 シ ョ ウ ズ ク 」 は 「Elettaria cardamomum (L.) Maton」の果実から得られる 生薬であり，その英名が「Cardamon」である
5)．
○19. クチナシ：天然香料の原料として「コク チナシ」が挙げられているが，YListで確認し たところ「コクチナシ」の学名は「Gardenia jasminoides Ellis var. radicans (Thunb.) Makino ex H.Hara」であり，「Gardenia augusta Merr.」
の標準和名は収載されていなかった．Tropicos に よ る と ，「Gardenia jasminoides Ellis var.
radicans (Thunb.) Makino ex H.Hara」 と
「Gardenia augusta Merr.」は異なる種であると 思われた．「Gardenia augusta Merr.」は「クチ ナシ（Gardenia jasminoides J. Ellis）」のシノニ ムであった．
○23. ケ シ ノ ミ ： 天 然 香 料 は ，「 ヒ ナ ゲ シ
（Papaver rhoeas L.）」も基原としている．
○39. スペアミント：香辛料抽出物も天然香料 ともに「Mentha spicata L.」を基原としている
が，天然香料は「Mentha cardiaca J. Gerard ex Baker」という種も基原としている．
○64. ホースミント：香辛料抽出物と天然香料 はともに「ケショウヤグルマハッカ Monarda punctata L.」及び「ヤグルマハッカ（標準）
Monarda fistulosa L.」を基原としているが，天 然香料はこれに加えて「ナガバハッカMentha longifolia (L.) Huds.」も基原として挙げられて いる．ナガバハッカはMentha属であり，他の 基原物質と属が異なっている．
c) 香辛料抽出物のうち，香辛料抽出物の方が より広い植物種を基原にしている品目
アンゼリカ，ケーパー，コショウ，ニンニク
○5. アンゼリカ：天然香料の原料植物には含 まれていない Peucedanum 属植物も基原物質 として定義されている．
○24. ケーパー：基原として挙げられている学 名は香辛料抽出物も天然香料も同じ「Capparis spinosa L.」だが，香辛料抽出物の基原種の和 名 で あ る フ ウ チ ョ ウ ボ ク は 「Capparis micracantha var. henryi (Matsum.) Jacobs」とい う別の学名があてられており，別種であると 考えられる．そのため，香辛料抽出物ではどち らの種を基原としているのか（あるいは両方 なのか），精査する必要がある．
○25. コショウ：香辛料抽出物と天然香料とで はほぼ同じ植物種が基原であるが，香辛料抽 出物では「Piper officinarum (Miq.) C. DC.」も 基原として挙げられている．
○55. ニンニク：香辛料抽出物と天然香料とで はほぼ同じ植物種が基原であるが，香辛料抽 出物では「オオニンニク（Allium sativum L. var.
pekinense (Prokh.) F.Maek.）」も基原として挙げ られている．
d) 香辛料抽出物と天然香料とで基原が異なっ ていた品目
アジョワン，オレンジピール，カッシア，シ ャロット，ソーレル，バニラ
○3. アジョワン：香辛料抽出物，天然香料とも
にCarum属植物を基原としているが，異なる
種のものを用いていると思われた．しかし，天 然香料で原料種とされている「Trachyspermum ammi Sprague」のシノニムのひとつに，香辛料
抽出物の基原である「Carum ajowan Benth. &
Hook.f」があるとする見解もあり2)，詳細な検
討の必要がある．
○10. オレンジピール：香辛料抽出物，天然香 料ともにミカン科Citrus属を基原としており，
とくに「Citrus sinensis (L.) Osbeck」は共通の基 原種である．しかし，香辛料抽出物では「C.
japonica Thunb.」「C. reticulata Blanco」が基原 とされているのに対し，天然香料では「C.
aurantium L.」が基原とされている．Citrus属は 種間の関係が複雑であり，実態について調査 する必要があると思われた．
○12. カッシア：香辛料抽出物はクスノキ科の
「Cinnamomum cassia (L.) D.Don」が基原だが，
天然香料はマメ科の「Cassia fistula L.」が基原 であり，全く異なっている．既存添加物品目リ ストには，香辛料抽出物カッシアの別名とし てカッシヤフィスチュラが挙げられており，
これは天然香料の基原である Cassia fistula L.
のカタカナ表記と同じである．香辛料抽出物 のカッシアとして流通しているものの中に，
基原の混同が見られる可能性もあり，詳細な 検討が必要と考えられる．
○35. シャロット：香辛料抽出物，天然香料と
もにAllium属の植物を基原としており，植物
和名としても「シャロット」を挙げているが，
両者が挙げている学名が異なる種のようであ る．
○42. ソーレル：香辛料抽出物では「スイバ (Rumex acetosa L.)」が，天然香料では「ギシギ シ(Rumex japonicus Houtt.)、ナガバギシギシ (Rumex crispus L.)、エゾノギシギシ (Rumex obtusifolius L.)」がそれぞれ基原となっており，
どちらもRumex属ではあるが種の異なる植物
が挙げられている．香辛料抽出物と天然香料 とでは原料として使われている植物のうち重 複しているものはない．
○59. バニラ：香辛料抽出物，天然香料ともに
「バニラ」を基原としているが，これに加えて 香辛料抽出物では「タヒチバニラ」を，天然香 料では「ニシインドバニラ」をそれぞれ基原と している．
C-2. 海外規格の調査
香辛料抽出物に含まれる植物由来の74種に ついて，米国（FCC11及びCFR Title21）及び 中国（GB2760-2014） にて品目の有無を調査し た．品目は，既存添加物名簿に記載の学名のほ か，今回の調査でより一般的と思われるもの として明らかになった学名でも検索を行った．
F調査した結果を表2示す．
既存添加物である香辛料抽出物のうち，今 回調査した規格に収載されていなかった品目 は，アサノミ，アジョワン，カレーリーフ，ク レソン，シャロット，ソーレル，ミョウガ，ワ サビの8品目であった．
また，今回調べたどの規格でもほぼ同じ基 原種が用いられていた品目は，アサフェチダ，
ウイキョウ，ウコン，オールスパイス，カッシ ア，カモミール，カンゾウ，キャラウェー，ク ミン，クローブ，ケシノミ，ケーパー，ゴマ，
コリアンダー，サッサフラス，サフラン，サボ リー，サルビア，シソ，ショウガ，スターアニ ス，セイヨウワサビ，セロリー，タマネギ，タ マリンド，タラゴン，チャイブ，トウガラシ，
ナツメグ，ニガヨモギ，ニジェラ，ニンジン，
バジル，パセリ，パプリカ，ヒソップ，フェネ リーグ，ペパーミント，リンデン，レモングラ ス，レモンバーム，ローズマリー，ローレルの 43品目であり，半数以上であった（表3）．こ のほかに特筆すべきものについて以下に詳細 を示す．
○4. アニス：どの規格も，日本で基原としてい る「アニス（Pimpinella anisum L.）」を基原と して挙げているが，FCC11のみ，「トウシキミ
（Illicium verum Hook.f.）」も基原生物として挙 げられている．香辛料抽出物においては，
Illicium verum Hook.f.はスターアニスの基原種 としているが，FCC11のSpice Oleoresinでは アニスと区別していない．
○8. オレガノ：香辛料抽出物と CFR では
Origanum属が基原とされており，FCC11も同
様であるが，FCC11 はこれに加えて「Thymus capitatus (L.) Hoffmanns. & Link」も基原植物と して挙げられていた。一方，中国ではLippia属 のみが基原として挙げられており，国によっ
て基原種がかなり異なっていた．なお，日本の 天然香料のオレガノの基原には Lippia属が含 まれており，中国の現状も考慮されていると 思われた．
○10. オレンジピール：各国少しずつ基原が異 なっているが，「Citrus sinensis (L.) Osbeck」
「Citrus reticulata Blanco」の2種はどの国も 基原として挙げられていた．
○11. カショウと32. サンショウ：香辛料抽出 物はカショウとサンショウの 2 つの品目に分 けられているが，中国では基原が「Zanthoxylum 属」となっており，特に区別はされていない．
○14. カラシナ：各国「クロガラシ（Brassica nigra (L.) W.D.J. Koch）」を含むBrassica属を基 原としていたが，香辛料抽出物のみ属の異な る「Sinapis alba L.」も基原として挙げている．
○15. カルダモン：日本以外の国は，「Elettaria cardamomum (L.) Maton」を基原としているが，
日本はこの変種（varietas）を基原として挙げ
ている．Tropicosには両者がシノニムであると
いう記述はなく，変種であっても別の種とし て 扱 わ れ て い る 例 （Mentha arvensis var.
piperascensとM. arvensisなど）もあることか ら，精査の必要があると思われる．
○25. コショウ：日本以外の国は，「Piper nigrum L.」のみを基原として挙げているが，日本は
「インドナガコショウ Piper longum L.」など も基原としている．インドナガコショウは天 然香料の原料としても使われている．
○34. シナモン：各国少しずつ基原が異なるが，
「セイロンニッケイCinnamomum verum J.Presl
（Cinnamomum zeylanicum Blumeはシノニム．）」 はどの国も基原として挙げられていた．
○36. ジュニパーベリー：「Juniperus communis L.」を基原として挙げている国が多いが，日本 で は こ の ほ か に 「 セ イ ヨ ウ ネ ズ Juniperus communis L. var. communis」を，FCC11 では
「Juniperus communis var. erecta Pursh」をそれ ぞれ基原に挙げている。どちらも Juniperus communis L.とシノニムであるという記載が
Tropicosになく，精査が必要である．
○39. スペアミント：香辛料抽出物，CFRでは
「Mentha spicata L.」のみが基原として挙げら
れているが，FCCと中国では「Mentha cardiaca L.」も基原として挙げられている．中国では，
使用基準が記載されているGB2760-2014では Mentha cardiaca L.を基原としているが，その 成分規格であるGB1886.36-2015 (食品添加剂 留兰香油)ではMenta spicata L.が基原とされて おり，混乱があると思われる．なお，日本の天 然香料の基原はどちらの種も用いられている ようである．
○55. ニ ン ニ ク ：FCC11 と 中 国 は 「Allium sativum L.」のみが基原としているが，香辛料 抽出物には同属異種も複数基原に含まれてい る．
○65. マジョラム：各国少しずつ基原が異なっ ているが，「Majorana hortensis Moench」はどの 国も基原として挙げられている．香辛料抽出 物 と 中 国 で は こ れ に 加 え て 「Origanum majorana L.」が，FCC11は「Thymus mastichina L.」が基原として挙げられている．いずれもシ ソ科である．
D. 結論
既存添加物名簿収載品目の一つである香辛 料抽出物について，規格案作成に向けた情報 収集を行った．本品目に含有されている74種 の基原を用いていることがその名称から予想 される天然香料について，示された和名及び 学名の妥当性を YList及び Tropicos をもとに 検討したところ，半数程度が全く同じ植物種 を基原としていることが明らかとなった．そ の一方で，同じ名称であっても香辛料抽出物 と天然香料とで異なる基原を用いているもの もあった．さらに，昨年度のFCCやCFRの調 査に加え，中国食添使用基準（GB2760-2014）
とも比較し，学名まで精査したところ，日本独 自の基原のものや，日本では 2 つの基原とし て区別して扱われているものが他国ではひと つの基原として示されているものもあった．
前年度・今年度の調査で，基原によっては規格 案作成の際に詳細な検討が必要と思われるも のが浮き彫りになった．香辛料抽出物の規格 案作成時には，本研究で報告する情報をもと に，基原生物の学名等について検討を行う必
要がある．
E. 参考文献
1) 消費者庁通知「食品衛生法に基づく添加物 の表示等について」消食表第377号，平成22 年10月20日．
2) The Plant List ＜
http://www.theplantlist.org/tpl1.1/record/kew- 2438394＞(accessed 2018-12-21).
3) The Plant List ＜
http://www.theplantlist.org/tpl1.1/record/kew- 2906377＞(accessed 2018-12-21).
4) The Plant List <
http://www.theplantlist.org/tpl1.1/record/gcc- 91453>(accessed 2019-1-17).
5) 厚生労働省．第十七改正日本薬局方. 2016.
F. 研究発表 1. 論文発表 該当無し 2. 学会発表 該当無し
G. 知的財産権の出願・登録状況 該当無し
H29- - -007 30
RMS single-reference HPLC
λ
A.
HPLC GC
relative molar sensitivity: RMS
HPLC RMS
RMS
single reference 2
RMS
RMS
RMS
NMR HPLC/PDA relative molar sensitivity: RMS RMS
RMS
RMS NMR
1H-qNMR
1H-qNMR
1H-qNMR 1
×
1, 2)
1H-qNMR
1H-qNMR
RMS RMS
3-5)
RMS
6)
Perilla frutescens Britton
JP17 JP17
HPLC
6)
RMS
B.
1 1
HPLC RMS
4 mg
10 mg DSS-d6 2 mg
10mL
DMSO-d6 4 mL NMR
0.6mL 5 mm NMR
3
NMR 1 3 2
1H-qNMR
1H-qNMR Purity Pro
qNMR ANALYSIS Software
1 !"
!"=""$%&
'( =))$%&
'( ×++'(
$%& (1)
PRL, ; DS,
; n, mol ; S,
; H, S
NMR 1 3
1 mL
250 mL HPLC
1 3
4 µg/mL 10
µg/mL 3
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A 2 !,
!,=--$%&
'( (2)
!" !,
3
RMS RMS =112
3 (3)
1)
JP17 7)
0.2 g
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20 mL 50mL
10 mg
100 mL 10 mL
100 mL
2) RMS
1) 3
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47) 4 8516 mg
8516 =--$%&
'( ×99$%&
'( × :7)×<=; ×1>); (4) m, ; WDS,
mg
3) JP17
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DSS-d6
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9.45
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?516=))$%&
'((×++'((
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$%&× ?7)) (5)
S, ; H, S
; M, g/mol ; W, g ; P, wt%
1)
3 HPLC/PDA
4A
4) 6
8516 mg
8516= :516× ?516×;==; ×--B
(×<=; (6) :516,
mg ; ?516, qNMR
C.
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RMS
max
JP17 HPLC
JP17 HPLC chromatograph A
1 A
max 234 nm max
235 nm 1 B
1.01 1.03
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RMS
1H-qNMR
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qNMR
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7 9.45 ppm
7.00 ppm
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3)
JP17
RMS
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NMR 1 3
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max
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RMS
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1H-qNMR HPLC
JP17
RMS
E.
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2) qNMR
52, 622-626 (2014) 3) λ
56, 185-193 (2015).
4) λ ×
× NMR
59, 1-10 (2018).
5) Nishizaki Y., Sato-Masumoto N., Mikawa T., Nakashima K., Yamazaki T., Kuroe M., Numata M., Ihara T., Ito Y., Sugimoto N., Kyoko S.: HPLC/PDA determination of carminic acid and 4-aminocarminic acid using relative molar sensitivities with respect to caffeine. Food Addit. Contam. A, 35, 838-847 (2018).
6)
64(1), 7-14 (2010).
7) 64 (2016) “
” 28 3 7
8) ”
”
19 11 15 1115001
(2007) F.
1.
2.
1)
HPLC 55
(2018.11)( ).
2) λ
× 55
(2018.11)( ).
3) λ
× 55
(2018.11)( ).
4) λ
λ
×
7 NMR
(2018.12)( ).
G. δ
1
l l
Jo K H %
d h h b
q r Cat. No. 161-24161
o t
a)
c ah h i Cat. No. P0231 E659 I
Cat. No. P0231 E659
qNMR 3-(trimetyl-
silyl)-1-propanesulfonic acid-d6
sodium salt DSS-d6
q r JCat. No. 044-31671 certified purity 92.3%J4 G 0 K
Cat. No. 044-31671 certified purity 92.4% 4 G 3 ))K
-d6
DMSO-d6
5.9 3J G % K 97 79 61 G % ) ) K
C A l TR MH28 ) T LN
DSS-d6 0 ppm 7.99 ppm 1H-qNMR OWPW l S
2 1H-qNMR
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MHJY .
m NY 88
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1 HPLC A Chromatograph
A 1
2 B
2 NMR 1H-NMR
4 1H-qNMR PRL DS
H H
.5 340 N
B!"C
.5 340 N
B!"C
A A A A
a b b/(a/4) a b b/(a/4)
M W 214 M W 214 M W 214
