Use of the dnaJ Gene for the Detection and Identification of All Legionella pneumophila Serogroups and Description of the Primers Used to Detect 16S rDNA Gene Sequences of Major Members of the Genus Legionella

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Title

Use of the dnaJ Gene for the Detection and Identification of All

Legionella pneumophila Serogroups and Description of the

Primers Used to Detect 16S rDNA Gene Sequences of Major

Members of the Genus Legionella( 内容の要旨(Summary) )

Author(s)

, 宏生

Report No.(Doctoral

Degree)

博士（医学）甲第568号

Issue Date

2004-03-25

Type

博士論文

Version

URL

http://hdl.handle.net/20.500.12099/14571

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氏名(本籍) 学位の種類学位授与番号学位授与日付学位授与の要件学位論文題目審査委員別宏生(中国) 博士(医学) 甲第 568 号平成16 年 3 月 25 日学位規則第4条第1項該当

Use _of the dhaJGene for the Detection _{andldentification} of A"

Legibne舶pneumoph舶Serogroupsand DescriptionofthePrimers Used

to Detect16S rDNA Gene Sequences of Major Members _of the Genus ⊥eg血〃e伯 (主査) (副査) 行剛孝崎見江高授授教教論文内容の要旨教授岡野幸雄 (目的) 1976年のレジオネラ症の原因菌であるエ喀血e肋p几e"mqp九￡ぬの発見以来,この属に47菌種が新しく発見されてきた｡しかし生化学性状に基づく従来の識別方法では生化学的活性の低いエ曙わ花egね属の菌種の識別はできなく,遺伝学的方法に頼っている｡その方法にはリボタイピング,16SrDNA,23SrDNA,及びTnわ遺伝子の塩基配列などが利用されてきた｡しかし,これらの方法では種の識別ができるだけの多形は無く･古典的な全染色体遺伝子の類似度を計測する全染色体ハイブリッド形成法しか種を決める手法がなかった0我々は HSP(HeatSh｡CkProtein)の一つであるdnaJに着目しLegionella属内での遺伝子の多形を調べ,種を簡便に識別する方法を確立することを目的に,エ曙加e〃α属の全菌種の血αJ配列の決定を試みた0 (方法) L.pneuTnqPhilaserogroupl∼15,Legionella属4菌種およびその他の6菌種を含む61株がこの研究に用いられた｡レジオネラ属のdnaJ遺伝子を増幅するためにDN13Fをforwardprimer:51-AGCGGGATTATTATGAAC-3･,LG-RをReverseprimer‥5一-GACCGGTGTTT(コTACAAC-3'として設計した0増幅産物は約930bpであるo Legionella属菌種とL･PneumQPhilaserogroupsの系統樹はClustalWによちて作成した0系統発生距離は

Neighbor-joining methodにより算出したo Legionellaの塩基配列から検出primer setを設計した0

配列はW19 foward _{primer:5■-AGGTGGTTTTGGCGGATTTGG-3'およびW19} reverse

primer:5l-TGAATTCTGACTTGCCCCATG-3Tであり,増幅産物は285bpになるようにデザインした｡比較のためにTn≠p 遺伝子と16S _{rDNAを増幅するプライマーも設計した｡} (結果) 決定したdnqj遺伝子の配列は16SrDNAやmip遺伝子と比較すると,L･PneuTnQPhilaserogroupの1から15の血清型を識別できるはど多くの多型があった｡上′喀血e〃α属の各菌種の同定を行うためにも血αJ遺伝子は16S _{rDNAより優れていた｡種特異的プライマーとしてW19(dnaJ)はL.pneumqphilaのserogroupの} 検出に,Legionella属の全体の菌種を対象とした検出には16SrDNAを増幅する9種類のPrimermixtureを

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記載した｡ (結論) エ曙加e〟α属の41種,ムp花eαmqpん王Jαの15血清型株のdnaJ遺伝子配列を決定し,この配列の情報が生化学的性状では識別できない全てのエ曙わ花eJJα属の菌種の識別に有効な情報を提供することを証明した｡論文審査の結果の要旨申請者刈宏生は,エ喀わ几e〃α属の記載されたはぼ全菌種のDnaJ遺伝子配列を決定し,表現形質で識別ができなかったこの属の菌種についてdnaj配列を決定するだけで種の同定ができることを証明し,臨床細菌学に有用な同定検出方法を提案した｡この研究は臨床微生物学の発展に重要な貢献をしたと認める｡ [主論文公表誌]

Use _{of the} dnaJGene for the Detection _{andIdentification} of AllLegionellapneumQPhila Serogroups and Description of the Primers Used to Detect16S rDNA Gene Sequences of Major Members of the Genus Legionella

Microbiology _{andImmunology47,859-896(2003).}

Use of the dnaJ Gene for the Detection and Identification of All Legionella pneumophila Serogroups and Description of the Primers Used to Detect 16S rDNA Gene Sequences of Major Members of the Genus Legionella

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