• 検索結果がありません。

遺伝子改変マイクロミニピッグの作出法に関する研究

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2021

シェア "遺伝子改変マイクロミニピッグの作出法に関する研究"

Copied!
73
0
0

読み込み中.... (全文を見る)

全文

(1)

Title 遺伝子改変マイクロミニピッグの作出法に関する研究( 本文(Fulltext) ) Author(s) 前田, 昌美 Report No.(Doctoral Degree) 博士(獣医学) 甲第484号 Issue Date 2017-03-13 Type 博士論文 Version ETD URL http://hdl.handle.net/20.500.12099/56198 ※この資料の著作権は、各資料の著者・学協会・出版社等に帰属します。

(2)

1

㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢసฟἲ࡟㛵ࡍࡿ◊✲

2016 ᖺ

ᒱ㜧኱Ꮫ኱Ꮫ㝔㐃ྜ⋇་Ꮫ◊✲⛉

㸦ᒱ㜧኱Ꮫ㸧

๓ ⏣  ᫀ ⨾

(3)

2

㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢసฟἲ࡟㛵ࡍࡿ◊✲

๓ ⏣  ᫀ ⨾

(4)

3 ┠ ┠ḟ せ᪨ 1 ⫼ᬒ 4 ➨ 1 ❶ MRI ࢆ⏝࠸ࡓ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿ⬇ᅇ཰᫬ᮇࡢ᥎ᐃ ㅖゝ 10 ᮦᩱ࡜᪉ἲ 11 ⤖ᯝ 14 ⪃ᐹ 15 ᅗ⾲ 18 ➨ 2 ❶ ࣈࢱయእཷ⢭⬇࡟࠾ࡅࡿ Tol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢩࢫࢸ࣒ࢆ⏝࠸ࡓ  㑇ఏ Ꮚ⤌᥮࠼ ㅖゝ 22 ᮦᩱ࡜᪉ἲ 26 ⤖ᯝ 35 ⪃ᐹ 36 ᅗ⾲ 38 ➨ 3 ❶ 㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢసฟἲࡢ᳨ウ ㅖゝ 42 ᮦᩱ࡜᪉ἲ 43 ⤖ᯝ 48 ⪃ᐹ 50 ᅗ⾲ 54 ⥲ᣓ 58 ㅰ㎡ 60 ᘬ⏝ᩥ⊩ 61

(5)

4 せ せ᪨ ࣈࢱࡣゎ๗Ꮫⓗ㸪⏕⌮Ꮫⓗ࡟ࣄࢺ࡜ఝ࡚࠾ࡾ㸪ྂࡃ࠿ࡽᐇ㦂ື≀࡜ࡋ࡚⏝࠸ࡽࢀ࡚ ࡁࡓࠋ⌧ᅾ㑇ఏᏊࢆᨵኚࡋࡓࣈࢱࢆసฟࡍࡿ࡟ࡣ㸪య⣽⬊᰾⛣᳜ἲࡀ⏝࠸ࡽࢀ࡚࠸ࡿ ࡀ㸪᧯సࡋࡓ⬇ࡀ㑇ఏᏊᨵኚಶయ࡜ࡋ࡚ㄌ⏕ࡍࡿ๭ྜࡣ 1-3% ⛬ᗘ࡜ప࠸ࠋࡲࡓ㸪య ⣽⬊᰾⛣᳜ἲ࡛ࡣᛶ࿘ᮇࢆྠㄪࡉࡏࡓ౪⬇࣓ࢫ࡜ཷ⬇࣓ࢫࡀᚲせ࡛࠶ࡾ㸪ከ㢌ᩘࡢ࣓ ࢫࢆ㣫⫱ࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ㸪ከ㢌ᩘࡢࣈࢱࢆ㣫⫱ࡏࡎ㸪1 㢌ࡢࣈࢱ࡛᏶⤖ ࡍࡿ㑇ఏᏊᨵኚἲࢆ⪃᱌ࡋࡓࠋࡲࡓ㸪⏝࠸ࡿࣈࢱࢆ㉸ᑠᆺࣈࢱࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ ࡜ࡋ㸪᪉ἲࡢ☜❧ࢆヨࡳࡓࠋ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࠿ࡽ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡋ࡚㑇ఏᏊ ᧯సࢆ⾜࠸㸪᧯స⬇ࢆ౪⬇࣓ࢫࡢ༸⟶࡬⛣᳜ࡍࡿ࡜࠸࠺ 1 ಶయ࡛᏶⤖ࡍࡿᮏ᪉ἲࢆ ᐇ᪋ࡍࡿ࡟ࡣ㸪༸๭ࢆጞࡵࡿ๓ࡢ1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿࡓࡵ࡟᤼༸ࢆ☜ㄆࡍࡿ᪉ἲ㸪 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ㑇ఏᏊࢆᨵኚࡍࡿ᪉ἲࢆ☜❧ࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋ ➨ 1 ❶࡛ࡣ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿࡓࡵ࡟㸪᤼༸ࢆ ☜ㄆࡍࡿ᪉ἲࢆ☜❧ࡋࡓࠋ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢࡼ࠺࡞ᑠᆺࡢࣈࢱ࡛ࡣࠊᐙ␆ࣈࢱ࡛ ᤼༸☜ㄆ࡟⏝࠸ࡽࢀࡿ⤒┤⭠㉸㡢Ἴ᳨ᰝࢆᐇ᪋ࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁ࡞࠸ࡓࡵ㸪Magnetic Resornance Imaging㸦MRI㸧ࢆ⏝࠸࡚༸ᕢࢆほᐹࡍࡿࡇ࡜࡟ࡼࡾ᤼༸☜ㄆࢆヨࡳࡓࠋ ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ 4 㢌ࢆ⏝࠸࡚㸪MRI ࢆ᧜ീࡍࡿ࡜࡜ࡶ࡟⾑₢୰࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ ࣝ࠾ࡼࡧࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࢆ ᐃࡋࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ 4 㢌ࡍ ࡭࡚࡟࠾࠸࡚T2 ᙉㄪ⏬ീ࡛༸⬊ࢆ☜ㄆ࡛ࡁ㸪༸⬊ᩘࡢቑῶ࡜࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘ ࡢቑῶࡀ୍⮴ࡋࡓࠋMR ⏬ീୖ࡛ࡣࠊ᤼༸ᚋ࡟ᙧᡂࡉࢀࡿ㯤యࡣ☜ㄆ࡛ࡁ࡞࠿ࡗࡓࡀ㸪 ༸⬊ࡢᾘኻᚋ࡟ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡀୖ᪼ࡋ㸪㯤యᙧᡂࡀ♧၀ࡉࢀࡓࠋ௨ୖ࠿ࡽ㸪 ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚ MRI ࢆ⏝࠸࡚᤼༸ࢆ☜ㄆ࡛ࡁ㸪ࡇࢀ࡟ࡼࡾ 1 ⣽⬊ᮇ ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿ᫬ᮇࢆ᥎ᐃ࡛ࡁࡓࠋ ➨ 2 ❶࡛ࡣ㸪㑇ఏᏊᨵኚ⬇ࢆసฟࡍࡿ┠ⓗ࡛㸪యእཷ⢭࡛సᡂࡋࡓᐙ␆ࣈࢱࡢ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡟ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡢ 1 ✀࡛࠶ࡿ Tol2 ࢆὀධࡍࡿ᮲௳ࢆ᳨ウࡋࡓࠋ

(6)

5 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡣືࡃ㑇ఏᏊ࡜ࡶ࿧ࡤࢀࡿሷᇶ㓄ิ࡛㸪⬟ືⓗ࡟ࢤࣀ࣒ୖࢆ⛣ືࡍࡿ ࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋ୰࡛ࡶ Tol2 ࡣ࣓ࢲ࡛࢝Ⓨぢࡉࢀࡓࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰ࡛ࣥ㸪ࣈࢱయ⣽⬊࡟ ࠾࠸࡚㑇ఏᏊࡢ⤌㎸ࡳຠ⋡ࡀ㧗࠿ࡗࡓ࡜ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋ࣐࢘ࢫ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ Tol2 ࢆὀධࡋࡓሗ࿌ࢆཧ⪃࡟ࡋ࡚ 2 ࡘࡢὀධ᮲௳ࢆタᐃࡋ㸪ࣈࢱయእཷ⢭⬇࡟࠾ࡅࡿ㑇 ఏᏊᨵኚຠ⋡ࢆẚ㍑ࡋࡓࠋὀධ᮲௳ 1 ࡛ࡣ Tol2 ࠾ࡼࡧࢺࣛࣥࢫ࣏ࢨ࣮ࢮࡢ⁐ᾮ⃰ ᗘࢆ 100 ng/μl ࡜ࡋ㸪ὀධᅽࢆ 50 hPa ࡜ࡋࡓࠋ᮲௳ 2 ࡛ࡣྛ⁐ᾮ⃰ᗘࢆ 50 ng/μl ࡜ࡋ㸪ὀධᅽࡣ 100 hPa ࡜ࡋࡓࠋ࡝ࡕࡽࡢ᮲௳࡜ࡶὀධ᫬㛫ࡣ 0.10 ⛊㸪⥔ᣢᅽࡣ 5 hPa ࡟ᅛᐃࡋࡓࠋTol2 ࡜ྠ᫬࡟⺯ගࢱࣥࣃࢡ㉁࡛࠶ࡿ Ruby ࢆࢥ࣮ࢻࡋࡓ mRNA ࢆὀධࡋ㸪Ruby ࡀⓎ⌧ࡋ㸪༸๭ࡋ࡚࠸ࡿ⬇ࡢ࠺ࡕ࡛㑇ఏᏊࡀᨵኚࡉࢀࡓ⬇ࡢ๭ྜࢆ ⟬ฟࡍࡿࡇ࡜࡛ᐇ᪋ᅇẖࡢⓎ⏕⋡࡟ᕥྑࡉࢀࡎὀධ᮲௳㛫ࡢ㑇ఏᏊᨵኚຠ⋡ࢆẚ㍑ ࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡓࠋẚ㍑ࡋࡓ 2 ᮲௳࡛ࡣ㸪ὀධࡋࡓ⥲⬇ᩘ࡟࠾ࡅࡿ Ruby ࡀⓎ⌧ࡋ㸪 ࠿ࡘ༸๭ࡋࡓ⬇ࡢ๭ྜࡣ᮲௳ 1 ࡢ᪉ࡀ᭷ព࡟㧗࠿ࡗࡓࠋࡋ࠿ࡋ㸪2 ᮲௳࡟࠾ࡅࡿ㑇 ఏᏊᨵኚຠ⋡࡟᭷ព࡞ᕪࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋRuby ࡀⓎ⌧ࡋ㸪࠿ࡘ༸๭ࡋࡓ⬇࡟ᑐࡍࡿ㑇 ఏᏊࡀᨵኚࡉࢀࡓ⬇ࡢ๭ྜࡢᖹᆒ್ࡣ㸪᮲௳ 1 ࡛ࡣ 60.9%㸪᮲௳ 2 ࡛ࡣ 34.3% ࡛ ࠶ࡗࡓࠋ௨㝆ࡢ◊✲࡟ࡣ㸪ὀධࡋࡓ⥲⬇ᩘ࡟࠾࠸࡚Ruby ࡀⓎ⌧ࡋ㸪࠿ࡘ༸๭ࡋࡓ⬇ ࡢ๭ྜࡀ᭷ព࡟㧗ࡃ㸪㑇ఏᏊᨵኚຠ⋡ࡢᖹᆒ್ࡀ㧗࠿ࡗࡓ᮲௳1 ࢆ౑⏝ࡍࡿࡇ࡜࡜ࡋ ࡓࠋ ➨ 3 ❶࡜ࡋ࡚㸪➨ 1 ❶㸪➨ 2 ❶ࡢ⤖ᯝࢆ㋃ࡲ࠼࡚㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵ ࢢࢆసฟࡍࡿࡇ࡜ࢆヨࡳࡓࠋලయⓗ࡟ࡣ㸪MRI ࢆ⏝࠸࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ᤼༸ ࢆ☜ㄆࡋࡓᚋ࡟㸪඲㌟㯞㓉ୗ࡛༸⟶ࢆ℺ὶࡋ࡚ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡋࡓࠋᅇ཰⬇ࡢ⣽ ⬊㉁࡟㸪㯤Ⰽ⺯ගࢱࣥࣃࢡ㉁ࡢ Venus 㑇ఏᏊࢆ⤌ࡳ㎸ࢇࡔ Tol2 ࢆὀධࡋ㸪⬇ࢆᅇ ཰ࡋࡓ࣓ࢫࡢ༸⟶࡬⛣᳜ࡋࡓࠋᮏ᪉ἲࢆ 9 㢌ࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆ⏝࠸࡚ 14 ᅇ ᐇ᪋ࡋࡓ࡜ࡇࢁ㸪⬇ᅇ཰⋡ࡢᖹᆒ್ࡣ 55.7%࡛࠶ࡾ㸪1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡀ 31 ಶ㸦68.9%㸧㸪 2 ⣽⬊ᮇ⬇ࡀ 13 ಶ㸦28.9%㸧㸪4 ⣽⬊ᮇ⬇ࡀ 1 ಶ㸦2.2%㸧ࡢ 45 ಶࡢ⬇ࡀᅇ཰࡛

(7)

6 ࡁࡓࠋࡲࡓ㸪5 㢌ࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡛ࡣ⧞ࡾ㏉ࡋ࡚ 2 ᅇࡢ⬇ᅇ཰࠾ࡼࡧ⬇⛣᳜ ࢆ⾜࠺ࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡓࠋࡉࡽ࡟㸪14 ᅇࡢ࠺ࡕ 3 ᅇ࡛⭡ቨ࠿ࡽࡢ㉸㡢Ἴ᳨ᰝ࡟࡚ዷፎࢆ ☜ㄆࡋ㸪ࡑࡢ࠺ࡕ 1 ᅇ࡛ 1 㢌ࡢ⏘Ꮚࢆᚓࡓࠋ⏘Ꮚࡢ⾑ᾮ⣽⬊࠿ࡽ DNA ࢆᢳฟࡋ㸪 PCR ࡟࡚ᑟධࡋࡓ Venus 㑇ఏᏊࢆ☜ㄆࡋࡓ࡜ࡇࢁ㸪Venus 㑇ఏᏊࡢቑᖜࡣ☜ㄆ࡛ ࡁ࡞࠿ࡗࡓࠋ㛤⭡࠿ࡽ㛢⭡ࡲ࡛ࡢᖹᆒᡤせ᫬㛫ࡣ 1 ᫬㛫 39 ศ࡜▷᫬㛫࡛࠶ࡗࡓࠋ ᮏ᪉ἲࡣ▷᫬㛫࡛ẚ㍑ⓗ⡆༢࡟⾜࠺ࡇ࡜ࡀ࡛ࡁ㸪1 㢌࡛ࡣ࠶ࡿࡶࡢࡢ⏘Ꮚࢆᚓࡿࡇ ࡜ࡀ࡛ࡁࡓࠋ⏘Ꮚࢆᚓࡽࢀࡓࡇ࡜࠿ࡽ㸪⬇ᅇ཰࠿ࡽ⬇⛣᳜ࡲ࡛ࡢ୍㐃ࡢ᧯సࢆ୍ᗘ࡟ ⾜ࡗ࡚ࡶዷፎࡣྍ⬟࡛࠶ࡿࡇ࡜ࡀ♧ࡉࢀࡓࠋࡲࡓ㸪⧞ࡾ㏉ࡋ࡚ฎ⨨ࢆ⾜࠺ࡇ࡜ࡀ࡛ࡁ ࡓಶయࡶᏑᅾࡋࡓࡓࡵ㸪ಶయ࡬ࡢ౵くᛶࡣపࡃᢚ࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡓࠋᮏ᪉ἲ ࡢ㔜せ࡞Ⅼ࡛࠶ࡿ㸪㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆᚓࡿࡓࡵࡢ⬇ᅇ཰࠿ࡽ⬇⛣᳜ࢆ 1 㢌ࡢ࣐࢖ࢡ ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡛᏶⤖ࡉࡏࡿ࡜࠸࠺Ⅼ࡟㛵ࡋ࡚ࡣᇶ♏ⓗ࡞ᢏ⾡ࢆ☜❧࡛ࡁࡓ࡜⪃࠼ࡽ ࢀࡿࠋᮏ᪉ἲࡣ㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆᚓࡿࡓࡵ࡟ᚲせ࡞᫬㛫࠾ࡼࡧಶయᩘࢆ኱ᖜ࡟๐ῶ࡛ ࡁࡿ᪂ࡋ࠸᪉ἲࡔ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋ

(8)

7 ⫼ ⫼ᬒ 㑇ఏᏊᕤᏛࢆ⏝࠸࡚㸪ேⅭⓗ࡟㑇ఏ᝟ሗࢆኚ໬ࡉࡏࡓື≀ࢆ㑇ఏᏊᨵኚື≀࡜࠸࠸㸪 ࡑࡢ୰࡛ࡶእ㒊࠿ࡽ≉ᐃࡢ㑇ఏᏊࢆᑟධࡋࡓື≀ࢆ㑇ఏᏊᑟධື≀࡜࠸࠺ࠋ㑇ఏᏊᑟ ධື≀ࢆసฟࡍࡿ᪉ἲ࡟ࡣ㸪㑇ఏᏊࢆᑟධࡍࡿ఩⨨࡟╔┠ࡍࡿ࡜ 2 ㏻ࡾ࠶ࡾ㸪ࢤࣀ ࣒ୖࡢࣛࣥࢲ࣒࡞఩⨨࡟ᑟධࡍࡿ᪉ἲ࡜㸪┠ⓗࡢ఩⨨࡬ᑟධࡍࡿ᪉ἲࡀ࠶ࡿࠋᚋ⪅ࡣ ≉࡟ᶆⓗ㑇ఏᏊ⤌᥮࠼࡜࠸࠺(3)ࠋᶆⓗ㑇ఏᏊ⤌᥮࠼࡟ࡼࡿ㑇ఏᏊᨵኚື≀ࢆ⏝࠸ࡿࡇ ࡜࡟ࡼࡗ࡚㸪1㸬ᶆⓗ࡜ࡍࡿ㑇ఏᏊࡢᶵ⬟ࢆゎᯒࡍࡿ㸪2㸬ᶆⓗ㑇ఏᏊࡀ㈐௵㑇ఏᏊ࡛ ࠶ࡿ⑌ᝈࣔࢹࣝࢆసฟࡋ࡚⑓ែࢆゎ᫂ࡍࡿ㸪ࡉࡽ࡟ 3㸬సฟࡋࡓ⑌ᝈࣔࢹࣝࢆ⏝࠸࡚ デ᩿ἲࡸ἞⒪ἲࢆ㛤Ⓨࡍࡿࡇ࡜ࡀྍ⬟࡜࡞ࡿࠋ ⑌ᝈࣔࢹࣝື≀࡜ࡋ࡚㸪࣐࢘ࢫ㸪ࣛࢵࢺ㸪ࣁ࣒ࢫࢱ࣮㸪࢖ࢾ㸪ࣈࢱ㸪ࣖࢠ➼ࡀ⏝࠸ ࡽࢀ࡚࠸ࡿ(62)ࠋ࡞࠿࡛ࡶ࣐࢘ࢫࡣ㸪య᱁ࡀᑠࡉࡃᢅ࠸ࡸࡍ࠸㸪⏕ά⎔ࡀ▷ࡃḟୡ௦ ࢆ▷ᮇ㛫࡟ᚓࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿ㸪యእཷ⢭ࡸ⬇⛣᳜࡞࡝⏕ṪᕤᏛⓗᢏ⾡ࡀ☜❧ࡉࢀ࡚࠸ ࡿ㸪ࢤࣀ࣒ࡢ඲ሷᇶ㓄ิࡀ᫂ࡽ࠿࡟ࡉࢀ࡚࠸ࡿ࡜࠸࠺฼Ⅼࡀ࠶ࡿࠋࡑࡢࡓࡵ㸪㑇ఏᏊ ᨵኚ࣐࢘ࢫࡣከࡃసฟ࣭฼⏝ࡉࢀ࡚ࡁࡓ(19)ࠋ౛࡜ࡋ࡚㸪⒴ࣔࢹࣝ(14, 50)㸪ᚰ⾑⟶⑌ ᝈࣔࢹࣝ(29, 38, 66) ࡞࡝ࡀᣲࡆࡽࢀࡿࠋ ࣐࢘ࢫ࡟࠾ࡅࡿᶆⓗ㑇ఏᏊ⤌᥮࠼ࡣ㸪୺࡟⬇ᛶᖿ⣽⬊㸦ES ⣽⬊㸧ࢆ⏝࠸࡚⾜ࢃࢀ ࡚࠸ࡿࠋES ⣽⬊࡟࢚ࣞࢡࢺ࣏࣮ࣟࣞࢩࣙࣥ࡞࡝ࢆ⏝࠸࡚ࢱ࣮ࢤࢸ࢕ࣥࢢ࣋ࢡࢱ࣮ࢆ ᑟධࡋ㸪┦ྠ⤌᥮࠼ࡀ㉳ࡇࡗࡓ ES ⣽⬊ࢆ㑅ᢥࡍࡿࠋ┦ྠ⤌᥮࠼ࡀ㉳ࡇࡾ㑇ఏᏊࡀᨵ ኚࡉࢀࡓ ES ⣽⬊ࢆ࣐࢘ࢫ⬇┙⬊࡬ὀධࡍࡿࡇ࡜࡟ࡼࡗ࡚ᚓࡓ࣓࢟ࣛ⬇ࢆ㸪ࣞࢩࣆ࢚ ࣥࢺ࣐࢘ࢫࡢᏊᐑ࡬⛣᳜ࡋ࡚࣓࢟ࣛಶయ࡛࠶ࡿ F0 ୡ௦ࢆᚓࡿࠋF0 ୡ௦࣐࢘ࢫࢆ㔝 ⏕ᆺ࣐࢘ࢫ࡜஺㓄ࡉࡏ࡚ᚓࡓ F1 ୡ௦࡟ࡣ㸪┠ⓗ㑇ఏᏊࡢ∦᪉ࡢ࢔ࣜࣝࡀᨵኚࡉࢀ࡚ ࠸ࡿಶయࡀྵࡲࢀࡿࡇ࡜࡟࡞ࡿࠋ┠ⓗ㑇ఏᏊࡢ∦᪉ࡀᨵኚࡉࢀࡓ F1 ୡ௦ࡢಶయྠኈ ࢆ஺㓄ࡉࡏࡿࡇ࡜࡟ࡼࡗ࡚ᚓࡽࢀࡿ F2 ୡ௦࡟ࡣ୧࢔ࣜࣝ࡜ࡶ࡟㑇ఏᏊࡀᨵኚࡉࢀ

(9)

8 ࡓಶయࡀྵࡲࢀࡿ(19)ࠋࡑࡋ࡚㸪㑇ఏᏊࡀᨵኚࡉࢀࡓಶయྠኈࢆ஺㓄ࡍࡿࡇ࡜࡟ࡼࡗ ࡚㸪⣔⤫ࢆ⥔ᣢࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋ ௨ୖࡢࡼ࠺࡟࣐࢘ࢫ࡛ࡣᶆⓗ㑇ఏᏊ⤌᥮࠼ࡢᢏ⾡ࡣ᪤࡟☜❧ࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪㑇ఏᏊᨵ ኚ࣐࢘ࢫࡣḞ࠿ࡍࡇ࡜ࡢ࡛ࡁ࡞࠸ᐇ㦂ື≀࡛࠶ࡿࠋࡋ࠿ࡋ㸪㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢘ࢫࡣ㸪ࣄ ࢺ⑌ᝈࡢ෌⌧ᛶࡀప࠸࡜࠸࠺ၥ㢟Ⅼࡶ࠶ࡿࠋࡑࡢཎᅉࡣ⑌ᝈ࡟ࡼࡗ࡚ࡶ␗࡞ࡿࡀ㸪୺ ࡟ゎ๗㸪⏕⌮㸪㑇ఏᵝᘧ㸪ᑑ࿨㸪య᱁ࡢ㐪࠸࡟㉳ᅉࡍࡿ࡜࠸ࢃࢀ࡚࠸ࡿ(51)ࠋ౛࠼ࡤ ࣄࢺ⒴ࣔࢹ࣐ࣝ࢘ࢫࡢሙྜ㸪ࣄࢺ࡜࣐࢘ࢫ࡟࠾ࡅࡿࢱࣥࣃࢡ㉁ࡢ┦஫㛵ಀ࡞࡝ࡀ␗࡞ ࡿࡇ࡜࡛㸪ྠࡌ㑇ఏᏊ㡿ᇦࡢኚ␗࡟ࡼࡗ࡚ࡶ඲ࡃ␗࡞ࡗࡓ⾲⌧ᆺࡀ⌧ࢀࡿࡇ࡜ࡶ࠶ࡿ (35)ࠋࡲࡓ㸪ࣄࢺ⑌ᝈࣔࢹࣝࡀ෌⌧࡛ࡁࡓ࡜ࡋ࡚ࡶ㸪࣐࢘ࢫࡢᑠࡉ࡞య᱁࡛ࡣࣄࢺ࡛ ⏝࠸ࡽࢀࡿᶵჾ࡛ࡢ⏬ീ᳨⣴㸪ᢞ⸆㸪እ⛉ᡭ⾡ࡢ◊✲ࢆ⾜࠺ࡇ࡜ࡀ࡛ࡁ࡞࠸ࠋ ㌟యࡸ⮚ჾࡢࢧ࢖ࢬࡀࣄࢺ࡜㏆࠸ᐇ㦂ື≀࡜ࡋ࡚㸪ࣈࢱ㸪ࣖࢠ㸪ࣄࢶࢪ࡞࡝ࡢᐙ␆ ࡀ⏝࠸ࡽࢀ࡚ࡁࡓ(51)ࠋࡇࢀࡽࡢᐙ␆ࡣయ᱁ࡀࣄࢺ࡜㏆࠸ࡓࡵ㸪⏬ീ᳨⣴㸪እ⛉ᡭ⾡ ࡢ㝿࡟ࣄࢺ⏝ࡢᶵჾࢆࡑࡢࡲࡲ⏝࠸ࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋࡇࢀࡽࡢᐙ␆ࡢ࡞࠿࡛ࡶࣈࢱࡣ ୰ᯡ⚄⤒⣔㸪ᚠ⎔ჾ⣔࡞࡝ࡢᙧែࡀࣄࢺ࡜ఝ࡚࠾ࡾ㸪ࡇࢀࡲ࡛ࡶࡉࡲࡊࡲ࡞◊✲࡟⏝ ࠸ࡽࢀ࡚ࡁࡓ(7, 11, 15, 34, 47, 48)ࠋࡲࡓ㸪ࣈࢱࡣྂࡃ࠿ࡽ㣗⏝ᐙ␆࡜ࡋ࡚㣫⫱ࡉࢀ࡚ ࠾ࡾ㸪ࡇࢀࡲ࡛ᐇ㦂ື≀࡜ࡋ࡚⏝࠸ࡽࢀ࡚ࡁࡓ࢖ࢾࡸ㟋㛗㢮࡟ẚ࡭࡚㸪ᐇ㦂࡟౑⏝ࡍ ࡿሙྜ࡟೔⌮ⓗ࡞㠃࡛ࡢ㞀ᐖࡀᑡ࡞࠸ࠋ ࣐࢘ࢫ࡜␗࡞ࡾࣈࢱ࡛ࡣ ES ⣽⬊ࡀ☜❧ࡉࢀ࡚࠸࡞࠸ࡓࡵ㸪ᶆⓗ㑇ఏᏊࡢ⤌᥮࠼࡟ ࡣయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲࡀ⏝࠸ࡽࢀ࡚࠸ࡿ(35)ࠋࣈࢱ࡟࠾ࡅࡿయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲࡣ㸪ḟࡢࡼ࠺ ࡞ᡭ㡰࡛⾜࠺ࠋ୺࡟⫾Ꮚ⥺⥔ⱆ⣽⬊࡟㑇ఏᏊ᧯సࢆ⾜࠸㸪┠ⓗ࡜ࡍࡿ㑇ఏᏊࡀᨵኚࡉ ࢀࡓ⣽⬊ࢆ㑅ᢥࡍࡿࠋ㑅ᢥࡋࡓ㑇ఏᏊᨵኚ⣽⬊ࡢ᰾ࢆ㝖᰾ࡋࡓᮍཷ⢭༸࡬⛣᳜ࡋࡓᚋ㸪 ⼥ྜ࣭άᛶ໬ฎ⨨ࢆ᪋ࡋ࡚ࣞࢩࣆ࢚ࣥࢺࡢ༸⟶ࡶࡋࡃࡣᏊᐑ࡬⛣᳜ࡋ㸪㑇ఏᏊᨵኚ⏘ Ꮚࢆᚓࡿ㸦ᅗ 1㸧ࠋᮍཷ⢭༸ࡣ⏕య࠿ࡽ᤼༸┤๓࡟᥇ྲྀࡍࡿ࠿㸪࡜␆ሙ⏤᮶ࡢᮍཷ⢭ ༸ࢆయእᡂ⇍ࡉࡏ࡚⏝࠸ࡿࠋయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲࡣࣈࢱ࡟࠾࠸࡚ᐇ⦼ࡀ࠶ࡿ᪉ἲ࡛࠶ࡿ

(10)

9 (25, 52)ࠋࡋ࠿ࡋ㸪㝖᰾㸪᰾⛣᳜㸪⼥ྜ࣭άᛶ໬ฎ⨨࡞࡝ࡢ㧗ᗘ࡞ᢏ⾡ࢆせࡋ」㞧࡞ẁ 㝵ࢆ⤒ࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋసฟ⾜⛬ࡀ」㞧࡛࠶ࡿࡇ࡜࡜㸪ࡑࡢᢏ⾡ⓗ࡞㞴᫆ᗘࡀ㧗࠸ࡇ࡜ ࡟ຍ࠼࡚㸪᰾⛣᳜ฎ⌮ࢆࡋࡓ⬇ࡀᏊ࡜ࡋ࡚⏕ࡲࢀࡿ๭ྜࡣ 1-3% ࡜ప࠸(35)ࠋࡉࡽ࡟㸪 ᐙ␆ࣈࢱࡣᛶᡂ⇍࡟㐩ࡍࡿ 6 ࣨ᭶㱋᫬ࡢయ㔜ࡣ 100 kg ࡟ࡶ࡞ࡿࠋ௨ୖࡢࡇ࡜࠿ࡽᐙ ␆ࣈࢱࢆ⏝࠸࡚ᚑ᮶ࡢయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲ࡟ࡼࡗ࡚㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆᚓࡿࡇ࡜ࡣ㸪Ⳙ኱࡞ ປຊ࡜㈝⏝ࡀ࠿࠿ࡿࠋ ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡣ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢၥ㢟Ⅼࢆᨵၿࡍࡿ┠ⓗ࡛᪂ࡋࡃ㛤Ⓨࡉࢀࡓ㉸ᑠ ᆺࡢᐇ㦂⏝ࣈࢱ࡛࠶ࡿ(22)ࠋ6 ࣨ᭶㱋᫬ࡢయ㔜ࡣ࠾ࡼࡑ 10 kg ࡜ᐙ␆ࣈࢱ࡟ẚ࡭࡚ⴭ ࡋࡃᑠࡉࡃ(22, 61)㸪ࡇࢀࡲ࡛⏕≀་Ꮫᐇ㦂࡟ከ⏝ࡉࢀ࡚ࡁࡓࣅ࣮ࢢࣝ≟࡜ྠࡌ⛬ᗘࡢ య᱁࡛࠶ࡿࠋ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆసฟࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࢀࡤ㸪࣐࢘ ࢫࡼࡾࡶࣄࢺ࡜ࡢ⏕⌮Ꮫⓗ㸪ゎ๗Ꮫⓗ࡞㢮ఝⅬࡀከࡃ㸪ࣄࢺ⑌ᝈࡢ⑓ែࡢ෌⌧ᛶࡀ㧗 ࠸࡜⪃࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿࣈࢱ(64)࡜ࡋ࡚ࡢ≉㛗ࢆ⏕࠿ࡋࡘࡘ㸪ປຊࡸ㣫⫱ࢥࢫࢺࢆ๐ῶ࡛ ࡁࡿࠋࡑࡇ࡛㸪ᮏ◊✲࡛ࡣ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡛㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆసฟࡍࡿ᪉ἲࢆ☜ ❧ࡍࡿࡇ࡜ࢆ┠ⓗ࡜ࡋࡓࠋ ᐙ␆ࣈࢱ࡟࠾ࡅࡿᶆⓗ㑇ఏᏊᨵኚ࡛ࡣ㸪๓㏙ࡢ㏻ࡾయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲࡀ୺࡟⏝࠸ࡽࢀ ࡚࠸ࡿࠋయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲ࡛ࡣ㸪᰾⛣᳜ࢆࡣࡌࡵ㸪༸࡟ᑐࡋ࡚ከࡃࡢ」㞧࡞᧯సࢆ⾜࠺ 㸦ᅗ 1㸧ࠋ᧯స୰ࡢ༸ࡣయእ⎔ቃ࡟⨨࠿ࢀࡿࡇ࡜࡜࡞ࡿࠋࣈࢱ࡟࠾ࡅࡿ༸࠾ࡼࡧ⬇ᇵ 㣴ࡢᢏ⾡ࡣ᭱㐺໬ࡉࢀ࡚࠸ࡿ࡜ࡣゝ࠸㞴ࡃ㸪యእ࡛ᇵ㣴ࡋⓎ⏕ࡉࡏࡓ⬇ࡢ㉁ࡣ㸪యෆ ࡛Ⓨ⏕ࡋࡓ⬇ࡼࡾࡶຎࡿ࡜࠸ࢃࢀ࡚࠸ࡿ (40)ࠋࡲࡓ㸪య⣽⬊᰾⛣᳜ἲ࡛ࡣ㸪␗ᖖⓎ⏕ ࡀཎᅉ࡛⬇Ⓨ⏕୰࠾ࡼࡧ࿘⏘ᮇ࡟ὶṚ⏘ࡍࡿࡇ࡜ࡀከࡃ㸪᭱⤊ⓗ࡟㑇ఏᏊ⤌᥮࠼⏘Ꮚ ࢆᚓࡿ☜⋡ࡣప࠸(28, 30)ࠋࡇࢀࡣయ⣽⬊᰾ࡢึᮇ໬ࡀ୙༑ศ࡞ࡓࡵ(55, 58, 69)࡜⪃࠼ ࡽࢀ࡚࠸ࡿࡀ㸪ヲ⣽ࡣゎ᫂ࡉࢀ࡚࠸࡞࠸ࠋࡑࡇ࡛㸪యእᇵ㣴᫬㛫ࢆ▷ࡃࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ ࡁ㸪᰾ࡢึᮇ໬ࡀᚲせ࡞࠸᪉ἲࢆᐇ᪋ࡍࡿࡇ࡜ࢆィ⏬ࡋࡓࠋࡑ࠺ࡍࡿࡇ࡜࡛㸪⬇ࡢ⏕

(11)

10 Ꮡ⋡ࡀྥୖࡋ㸪㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆ㧗࠸☜⋡࡛సฟ࡛ࡁࡿࡢ࡛ࡣ࡞࠸࠿ ࡜⪃࠼ࡓࠋ ᰾ࡢึᮇ໬ࢆᅇ㑊ࡍࡿࡼ࠺࡞㑇ఏᏊᨵኚ᪉ἲ࡜ࡋ࡚㸪ࢤࣀ࣒࡟⬟ືⓗ࡟⤌㎸ࡲࢀࡿ ᛶ㉁ࢆᣢࡘࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ὀධࡍࡿࡇ࡜ࢆ⪃᱌ࡋࡓࠋᮏ◊ ✲࡛ࡣ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ࣋ࢡࢱ࣮ࢆ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢయෆཷ⢭⬇࡬ὀධࡋ㸪ࡍࡄ ࡟༸⟶࡬⛣᳜ࡍࡿࡇ࡜࡜ࡋࡓࠋ⬇ࡢ⣽⬊㉁ෆ࡬≀㉁ࢆὀධࡍࡿ᧯స⮬యࡣᩘศ௨ෆ࡜ ▷࠸᫬㛫࡛ᐇ᪋࡛ࡁࡿࡓࡵ㸪⬇ࢆయእ࡛᧯సࡍࡿ᫬㛫ࢆᴟຊ▷ࡃࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋ ࡇࡢࡓࡵ㸪⬇ᅇ཰㸪ᅇ཰ࡋࡓ⬇࡬ࡢ⣽⬊㉁ෆὀධ㸪ࡉࡽ࡟ὀධ⬇ࡢ༸⟶ෆ࡬ࡢ⛣᳜ࡀ ୍ᗘࡢ㛤⭡ᡭ⾡࡛ᐇ᪋ྍ⬟࡜࡞ࡿ㸦ᅗ 1㸧ࠋ እ᮶㑇ఏᏊࢆ⬇࡟ὀධࡍࡿࡇ࡜࡛㑇ఏᏊᨵኚື≀ࢆᚓࡿ᪉ἲࡣ㸪࣐࢘ࢫ(2, 9)㸪ࣛࢵ ࢺ(36)㸪ࢧࣝ(33)㸪ࣈࢱ(13, 16, 32)࡛ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋὀධࡍࡿ≀㉁ࡣ㸪DNA ࢆ┤᥋ ὀධࡍࡿ᪉ἲࢆࡣࡌࡵ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡸேᕤไ㝈㓝⣲ࢆ⏝࠸ࡿ᪉ἲࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ ࡿࠋࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡣ⬟ືⓗ࡟ࢤࣀ࣒࡬ྲྀࡾ㎸ࡲࢀࡿᛶ㉁ࢆ᭷ࡋ࡚࠾ࡾ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ ࢰࣥࢆ⬇࡬ὀධࡍࡿ᪉ἲࢆ⏝࠸࡚㑇ఏᏊᨵኚࡢຠ⋡ࡀྥୖࡋࡓࡇ࡜ࡀ࣐࢘ࢫ࡟࠾࠸ ࡚ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ(59, 60)ࠋࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡣࢤࣀ࣒ࡢࣛࣥࢲ࣒࡞఩⨨࡟⬟ືⓗ࡟ᤄධ ࡉࢀࡿ࡜࠸࠺༢⣧࡞ᶵᗎ࡛࠶ࡾ㸪࣐࣮࣮࢝࡜࡞ࡿ㑇ఏᏊࢆᤄධࡋ࡚࠾ࡅࡤ㑇ఏᏊ⤌᥮ ࠼ࡀᡂຌࡋࡓ࠿࡝࠺࠿ࡀࢃ࠿ࡾࡸࡍ࠸ࠋࡇࡢ◊✲ࡢ┠ⓗࡣ㸪1 㢌ࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵ ࢢࢆ⏝࠸࡚㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆᚓࡿ᪂ࡋ࠸᪉ἲࡢᇶ♏ࢆ☜❧ࡍࡿࡇ࡜࡛࠶ࡿࠋ⬇ᅇ཰㸪 ᅇ཰ࡋࡓ⬇࡬ࡢ㑇ఏᏊ᧯స㸪ࡉࡽ࡟㑇ఏᏊ᧯స⬇ࡢ༸⟶ෆ࡬ࡢ⛣᳜ࢆ୍ᗘࡢ㛤⭡ᡭ⾡ ࡛ᐇ᪋ࡍࡿᮏ᪉ἲࡢᇶ♏ࢆ☜❧ࡍࡿࡓࡵ࡟ࡣ㸪㑇ఏᏊ᧯సࡣ࡛ࡁࡿ㝈ࡾ⡆₩࡛㸪⤌᥮ ࠼ࡢ⤖ᯝࡀホ౯ࡋࡸࡍ࠸ࡇ࡜ࡀ㔜せࡔ࡜⪃࠼ࡓࠋࡑࡢࡓࡵ㸪⤌᥮࠼ࡢᶵᗎࡀ༢⣧࡛࠶ ࡿࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆ⏝࠸ࡿࡇ࡜࡜ࡋ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ࡟ᤄධ㑇ఏᏊ࡜ࡋ࡚⺯ගࢱࣥࣃ ࢡ㉁ࢆ⤌ࡳ㎸ࡴࡇ࡜࡜ࡋࡓࠋᮏ᪉ἲࡀ☜❧࡛ࡁࡓሙྜ㸪⣽⬊㉁࡬ὀධࡍࡿ≀㉁ࢆேᕤ ไ㝈㓝⣲࡬ኚ᭦ࡍࡿࡇ࡜࡛㸪ᶆⓗ㑇ఏᏊࡢᨵኚࡀྍ⬟࡜࡞ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋᶆⓗ㑇ఏ

(12)

11 Ꮚࡢᨵኚࡀྍ⬟࡜࡞ࢀࡤ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆ⏝࠸࡚⑌ᝈࣔࢹࣝࢆసฟࡍࡿࡇ࡜ࡀ ࡛ࡁࡿࡼ࠺࡟࡞ࡿࠋ ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚⣽⬊㉁ෆὀධἲࢆ⏝࠸࡚㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆసฟࡍࡿ ࡓࡵ࡟ࡣ㸪1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢᅇ཰᪉ἲ㸪⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ࡢࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥὀධ᪉ἲ㸪㑇ఏᏊ ᨵኚ᧯సࢆ᪋ࡋࡓ⬇ࡢ⛣᳜᪉ἲ࡞࡝ࡢᇶ♏ⓗ࡞ᢏ⾡ࡢ☜❧ࡀᚲせ࡛࠶ࡿࠋᮏ◊✲ࡢ➨ 1 ❶࡛ࡣ㸪1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿࡇ࡜ࢆ┠ⓗ࡜ࡋ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚᤼༸ ࢆ☜ㄆ࡛ࡁࡿ᪉ἲࢆ᳨ウࡋࡓࠋ⬇ࡢ⣽⬊㉁ෆ࡬ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡋ࡚㑇ఏᏊᨵኚ ࡉࢀࡓಶయࢆᚓࡿ࡟ࡣ㸪༸๭ࢆጞࡵࡿ๓ࡢ 1 ⣽⬊ᮇ࡟㑇ఏᏊ᧯సࢆࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿ࡟ࡣ㸪᤼༸ࢆ☜ㄆࡋ࡚㛫ࢆ⨨࠿ࡎ࡟༸⟶࠿ࡽ⬇ᅇ཰ࢆ⾜࠺ᚲせ ࡀ࠶ࡿࠋᐙ␆ࣈࢱ࡛ࡣ⤒┤⭠࢚ࢥ࣮࡟ࡼࡗ࡚᤼༸ࡀ☜ㄆࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋࡋ࠿ࡋ㸪࣐࢖ࢡ ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢయ᱁࡛ࡣ࢚ࢥ࣮ࣉ࣮ࣟࣈࡀ┤⭠࡟ᤄධ࡛ࡁ࡞࠸ࡓࡵ㸪⤒┤⭠࢚ࢥ࣮ࢆ

⏝࠸ࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁ࡞࠸ࠋࡑࡇ࡛㸪Magnetic Resornance Imaging ( MRI ) ࢆ⏝࠸࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟ

ࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚᤼༸ࢆ☜ㄆࡍࡿ᪉ἲࢆヨࡳࡓࠋ➨ 2 ❶࡛ࡣ㸪㑇ఏᏊࢆᨵኚࡍࡿ᪉ ἲ࡜ࡋ࡚ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡍࡿ㝿ࡢ᮲௳ࢆ᳨ウࡋࡓࠋࢺ ࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡣືࡃ㑇ఏᏊ࡜ࡶ࿧ࡤࢀࡿሷᇶ㓄ิ࡛㸪㑇ఏᏊᑟධࡢࢶ࣮ࣝ࡜ࡋ࡚⏝࠸ ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢయ⣽⬊࡟࠾࠸࡚⤌㎸ࡳຠ⋡ࡀⰋ࠸࡜ሗ࿌(5)ࡀ࠶ ࡿ Tol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢩࢫࢸ࣒ࢆ⏝࠸ࡿࡇ࡜࡜ࡋࡓࠋTol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆࣈࢱ⬇ ࡬┤᥋ὀධࡋ࡚㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆసᡂࡋࡓሗ࿌ࡣࡇࢀࡲ࡛࡟࡞࠸ࡓࡵ㸪Tol2 ࢺࣛࣥࢫ ࣏ࢰࣥࢆࣈࢱ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ὀධࡍࡿሙྜ࡟᭱㐺࡞ Tol2 ࡢ⃰ᗘ࠾ࡼࡧ㔞ࢆㄪᩚࡋࡓࠋ ➨ 3 ❶࡛ࡣ㸪➨ 1 ❶࠾ࡼࡧ➨ 2 ❶࡛ᚓࡓ▱ぢࡶ࡜࡟㸪MRI ࢆ⏝࠸࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽ ࣆࢵࢢࡢ᤼༸ࢆ☜ㄆࡋࡓᚋ࡟ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡋ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆᅇ཰⬇ࡢ⣽⬊ ㉁ෆ࡬ὀධࡋࡓࠋࡑࡋ࡚㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡋࡓ⬇ࢆ㸪⬇ᅇ཰ࢆࡋࡓ࣓ࢫ࣐࢖ࢡ ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ༸⟶࡬⛣᳜ࡋⓎ⫱ࡉࡏࡿࡇ࡜࡛㸪㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆస ฟ࡛ࡁࡿ࠿ࢆヨࡳࡓࠋ

(13)

12 ᅗ1 ᮏ◊✲࡛⪃᱌ࡋࡓ᪉ἲ㸦ୖẁ㸧࡜య⣽⬊᰾⛣᳜ἲ㸦ୗẁ㸧ࡢẚ㍑   యእ࡛⬇ࢆ᧯సࡍࡿᡭ㡰                          ᚑ᮶ࡢయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲ㸦ୗẁ㸧࡛ࡣ㸪ࣈࢱ⏕య࠿ࡽ᥇ྲྀࡋࡓయෆᡂ⇍༸㸪ࡲࡓࡣ࡜␆ሙ࠿ࡽධ ᡭࡋࡓࣈࢱ༸ᕢ࠿ࡽᅇ཰ࡋࡓᮍᡂ⇍༸ࢆయእᡂ⇍ࡉࡏࡓ༸࡬㸪㑇ఏᏊࢆᨵኚࡋࡓయ⣽⬊᰾ࢆ⛣᳜ ࡋ㸪⼥ྜ࣭άᛶ໬ฎ⨨ࢆ᪋ࡍࠋࡑࡢᚋ㸪ࡇࡢ෌ᵓ⠏⬇ࢆ㐺ᙜ࡞᫬㛫యእᇵ㣴ᚋ㸪ཷ⬇ࣈࢱࡢ༸⟶ ࡶࡋࡃࡣᏊᐑ࡬⛣᳜ࡍࡿࠋయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲࡣ㸪⬇Ⓨ⏕୰࠾ࡼࡧฟ⏕┤ᚋ࡟ὶṚ⏘ࡍࡿࡇ࡜ࡀከࡃ㸪 㑇ఏᏊᨵኚ⏘Ꮚࢆᚓࡿ☜⋡ࡣ 1-3% ࡜ప࠸ࠋࡇࢀࡣ⛣᳜ࡋࡓయ⣽⬊᰾ࡢึᮇ໬ࡀ୙༑ศ࡞ࡓࡵ ㉳ࡁࡿࡢ࡛ࡣ࡞࠸࠿࡜⪃࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋ ᮏ◊✲㸦ୖẁ㸧࡛ࡣ㸪㑇ఏᏊࢆᨵኚࡍࡿ᪉ἲ࡜ࡋ࡚㸪౪⬇ࣈࢱ࠿ࡽᅇ཰ࡋࡓయෆཷ⢭⬇ࡢ⣽⬊ ㉁࡬ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆ┤᥋ὀධࡍࡿ᪉ἲࢆ⏝࠸ࡓࠋࡇࡢ᪉ἲࢆ⏝࠸ࢀࡤ㸪᰾ࢆึᮇ໬ࡍࡿᚲせࡣ ࡞࠸ࠋࡲࡓ㸪⬇ࡢ㑇ఏᏊᨵኚ࡟せࡍࡿ᫬㛫ࢆ▷ࡃ࡛ࡁࡿࡓࡵ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡋࡓ⬇ࢆ⬇ ᅇ཰ࡋࡓಶయࡢ༸⟶࡟ᡠࡋ㸪⬇ࡢᅇ཰࡜⛣᳜ࢆྠ୍ಶయ࡛⾜࠺ࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ㸪ࡇࡢ ᪂ࡓ࡟⪃᱌ࡋࡓ᪉ἲࢆᐇ᪋ࡋ㸪ᐇ㝿࡟㑇ఏᏊᨵኚಶయࡀసฟྍ⬟࠿ࢆ᳨ウࡋࡓࠋ

(14)

13 ➨ ➨ 1 ❶ MRI ࢆ⏝࠸ࡓ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿ⬇ᅇ཰᫬ᮇࡢ᥎ᐃ 1-1. ㅖゝ ୡ⏺࡛᭱ࡶᑠࡉ࠸࣑ࢽࣈࢱ࡛࠶ࡿ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡀ 2009 ᖺ࡟㛤Ⓨࡉࢀ㸪 ⌧ᅾᐇ㦂ື≀࡜ࡋ࡚㈍኎ࡉࢀ࡚࠸ࡿ(39)ࠋࡇࢀࡲ࡛ᐇ㦂ື≀࡜ࡋ࡚⏝࠸ࡽࢀ࡚ࡁ ࡓࢤࢵࢳࣥࢤࣥࡸࢡࣛ࢘ࣥ࡞࡝ࡢ࣑ࢽࣈࢱࡣ㸪6 ࣨ᭶㱋᫬ࡢయ㔜ࡀ 20-40 kg ࡛ ࠶ࡿ(53)ࡢ࡟ẚ࡭㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡣ ྠ᭶㱋᫬ࡢయ㔜ࡀ 10kg ⛬ᗘ࡜ᴟࡵ ࡚ᑠࡉ࠸(22)ࠋ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢయ᱁ࡣ㸪⏕≀་Ꮫ◊✲࡟⏝࠸ࡽࢀ࡚ࡁࡓࣅ ࣮ࢢࣝ≟࡜ྠ➼࡛࠶ࡾ(61)㸪ྲྀࡾᢅ࠸ࡀᐜ࡛᫆࠶ࡿࠋຍ࠼࡚㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵ ࢢࡣᐙ␆ࣈࢱ࡜ẚ㍑ࡋ࡚㣫㣴㠃✚ࡣᑠࡉࡃ࡚῭ࡳ㸪㣫ᩱ㸪⎔ቃ⟶⌮㸪ᚲせ⸆๣ ➼ࡢࢥࢫࢺࡶᑡ࡞ࡃ࡚῭ࡴࠋ ᮏ◊✲࡛ࡣ㸪༸๭๓ࡢ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁ෆ࡟ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡋ࡚㑇 ఏᏊᨵኚ⬇ࢆసᡂࡋ㸪ࡑࡢ⬇ࢆ౪⬇ࣈࢱࡢ༸⟶࡟ᡠࡋ࡚㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟ ࢽࣆࢵࢢࢆసฟࡍࡿࡇ࡜ࢆィ⏬ࡋࡓࠋ1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᚓࡿࡓࡵ࡟ࡣ㸪᤼༸ࡋࡓ┤ ᚋ࡟༸⟶࠿ࡽ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࡇ࡜࠿ࡽ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚ ᤼༸ࡢ᫬ᮇࢆ☜ㄆࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋᐙ␆ࣈࢱ࡛ࡣ㸪ࣄࢺࡢᡭᣦ࡟ࡼࡿ┤⭠᳨ᰝ ࡸ┤⭠࠿ࡽࡢ㉸㡢Ἴ᳨ᰝ(26)࡟ࡼࡾ༸ᕢ࡟Ꮡᅾࡍࡿ༸⬊࠾ࡼࡧ㯤యࡢ☜ㄆ㸪ࡲࡓ ᤼༸ࡢ☜ㄆ࡞࡝ࢆ⾜࠺ࠋࡋ࠿ࡋ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡼࡾࡶయ᱁ࡀᑠࡉࡃ㸪୍⯡ⓗ࡟ᡂ⇍ ಶయ㸦12 ࣨ᭶㸧࡛య㔜 100 kg ௨ୗ࡜ᐃ⩏ࡉࢀ࡚࠸ࡿ࣑ࢽࣈࢱ඲⯡(39)࡛ࡣ┤⭠ ᳨ᰝࡸ┤⭠࠿ࡽࡢ㉸㡢Ἴ᳨ᰝࢆ⾜࠺ࡢࡣᅔ㞴࡛࠶ࡿࠋࡇࡢࡓࡵ࣑ࢽࣈࢱ࡛ࡣ㸪 㛤⭡ୗ࡟࠾ࡅࡿ┠ど(40)ࡸ㸪⭡⭍㙾(41)ࢆ⏝࠸࡚༸ᕢࢆほᐹࡋ㸪᤼༸ࢆ☜ㄆࡍࡿ ᪉ἲࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋࡇࢀࡽࡢ᪉ἲࡣ☜ᐇ࡟᤼༸ࢆ☜ㄆ࡛ࡁࡿࡀ㸪⭡⭍ෆ࡛ ࡢእ⛉ⓗ᧯సࡢᙳ㡪࡟ࡼࡾ༸ᕢ࣭Ꮚᐑ࿘㎶࡟⒵╔ࢆ⏕ࡌࡿࡓࡵ㸪」ᩘᅇࡢᐇ᪋ ࡣ㞴ࡋ࠸ࠋࡇࡢࡓࡵ㸪ᐇ⏝ⓗ࡞᤼༸☜ㄆ᪉ἲ࡜ࡋ࡚ࡣᗈࡲࡗ࡚ࡣ࠸࡞࠸(10)ࠋ

(15)

14 MRI ࡣ㌾㒊⤌⧊ࡢࢥࣥࢺࣛࢫࢺᥥฟ࡟ඃࢀ࡚࠾ࡾ㸪඲㌟⮚ჾࢆヲ⣽࡟ほᐹ࡛ ࡁࡿࠋࡲࡓ㸪㦵┙⭍ෆࢆᗈ⠊ᅖ࡟ᥥฟ࡛ࡁࡿ(31)ࡓࡵ㸪ࣄࢺ⮫ᗋ་Ꮫ࡟࠾࠸࡚㦵 ┙⭍ෆ⮚ჾࡢඃࢀࡓデ᩿ࢶ࣮ࣝ࡜ࡋ࡚⏝࠸ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋ፬ே⛉࡟࠾࠸࡚ࡶ㸪⭘ ⒆➼ࡢデ᩿ࡔࡅ࡛࡞ࡃ㸪ṇᖖ༸ᕢࡢ㠀౵くⓗ࡞ほᐹࡢࡓࡵ࡟ᛂ⏝ࡉࢀ࡚࠸ࡿ(31, 45, 57)ࠋ ᐙ␆ࣈࢱ࡛ࡣయ᱁ࡀ኱ࡁࡍࡂ࡚࢞ࣥࢺ࣮ࣜෆ࡬ධࢀࡽࢀ࡞࠸ࡓࡵࣄࢺ⏝ MRI ᶵჾࢆ౑⏝࡛ࡁࡎ MRI ᧜ീࡣ㞴ࡋ࠸ࡀ㸪࣑ࢽࣈࢱࡸ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢయ᱁ ࡛࠶ࢀࡤࣄࢺ୍࡛⯡ⓗ࡟౑⏝ࡉࢀ࡚࠸ࡿ MRI ⿦⨨ࢆ⏝࠸࡚㦵┙ෆ⮚ჾࢆᥥฟ ࡍࡿࡇ࡜ࡀྍ⬟࡛࠶ࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ㸪MRI ࢆ⏝࠸࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢᛶᡂ ⇍࣓ࢫ࡟࠾ࡅࡿ༸ᕢάືࡢほᐹࢆヨࡳ㸪1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿࡓࡵ࡟᤼༸ࢆ☜ ㄆ࡛ࡁࡿ࠿ࢆ᳨ウࡋࡓࠋ 1-2. ᮦᮦᩱ࡜᪉ἲ ື≀ ᮏᐇ㦂ࡣ㸪ᒱ㜧኱Ꮫື≀ᐇ㦂ᢎㄆ㸦ݡ13096㸧ࢆཷࡅ࡚ᐇ᪋ࡋࡓࠋ ࣓ࢫࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ 7 㢌ࢆᐩኈ࣐࢖ࢡࣛᰴᘧ఍♫㸦ᐩኈᐑ㸧ࡼࡾㆡࡾ ཷࡅࡓࠋ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆᒱ㜧኱Ꮫᵓෆࡢ㸪 ᗘࢆᖹᆒ 24ºC (21-27°C) 㸪 ‵ᗘࢆ 70-80% ࡟ಖࡗࡓᐊෆ࡟࠾࠸࡚ 2-3 㢌ࡎࡘ㣫⫱ࡋࡓࠋྛ⩌ࡣᖜ 120 cm㸪 ዟ⾜ࡁ 120 cm㸪ᰙࡢ㧗ࡉ 90 cm ࡢ㇜ᡣ࡛㣫㣴⟶⌮ࡋࡓ㸦㣫㣴ᐦᗘ㸸0.48~0.72 m2/ 㢌㸧ࠋ᪥↷᮲௳ࡣ㸪༗๓ 6 ᫬࠿ࡽ 12 ᫬㛫ࡢ᫂᮲௳㸪༗ᚋ 6 ᫬࠿ࡽ 12 ᫬㛫ࡢ ᬯ᮲௳࡜ࡋࡓࠋࡲࡓ㸪1 ᪥࡟ 1 ᅇ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟ 1 㢌࠶ࡓࡾ 200 g ࡢ ࣌ࣞࢵࢺ㣫ᩱ㸦MMP ࣌ࣞࢵࢺ㸪᪥Ύ୸⣚㣫ᩱᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧 ࢆ⤥㣵ࡋࡓࠋ 㣫ᩱࡢ⤌ᡂࡣ㸪஝≀୰ࡢྍᾘ໬㣴ศ⥲㔞 >74.0%㸪⢒ࢱࣥࣃࢡ㉁ >13.0%㸪⢒⬡ ㉁ >2.0%㸪⢒⥺⥔ >8.0%㸪ྍ⁐ᛶ↓❅⣲≀ <1.0%㸪Ca >1.1%㸪P > 0.9% ࡛࠶ࡗ

(16)

15 ࡓࠋࡲࡓ㸪Ỉࡣ⮬⏤ᦤྲྀ࡜ࡋࡓࠋ ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿ༸ᕢࡢ఩⨨ࡢ☜ㄆ  MRI ᧜ീ࡟ඛ❧ࡗ࡚㸪ᛶᡂ⇍࡟㐩ࡋࡓ 20 ࣨ᭶㱋㸦య㔜 15 kg㸧㸪34 ࣨ᭶㱋㸦య 㔜 55 kg㸧㸪36 ࣨ᭶㱋㸦య㔜 39 kg㸧ࡢ 3 㢌ࡢ࣓ࢫ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆ⏝࠸ ࡚⭡⭍ෆ࡟࠾ࡅࡿ༸ᕢࡢ఩⨨ࢆ☜ㄆࡋࡓࠋ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟ 0.015 mg/kg ࣓ࢹࢺ࣑ࢪࣥ㸦ࢻࣝ࣋ࢿὀ㸹ඹ❧〇⸆ᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧㸪0.15 mg/kg ࣑ࢲࢰࣛ ࣒㸦ࢻ࣑࣒ࣝ࢝ὀᑕᾮ 10 mg㸹࢔ࢫࢸࣛࢫ〇⸆ᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧㸪0.12 mg/kg ࣈ ࢺࣝࣇ࢓ࣀ࣮ࣝ㸦࣋ࢺࣝࣇ࢓࣮ࣝ㸹Meiji Seika ࣇ࢓࣐ࣝᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ➽ ⫗ෆᢞ୚ࡋ㙠㟼ฎ⨨ࢆ᪋ࡋࡓࠋ࢖ࢯࣇࣝࣛࣥ㸦࢖ࢯࣇࣝ㸹DS ࣇ࢓࣮࣐ ࢔ࢽ ࣐ࣝ࣊ࣝࢫᰴᘧ఍♫㸪኱㜰㸧ࢆ࣐ࢫࢡ࡟࡚ᢞ୚ࡋ࡞ࡀࡽ㸪㛤⭡ᡭ⾡ࡲࡓࡣ⭡⭍ 㙾࡟ࡼࡗ࡚༸ᕢࡢᙧែ࡜఩⨨ࢆ☜ㄆࡋࡓࠋ ᤼༸☜ㄆ࡟⏝࠸ࡓ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿⓎ᝟࿘ᮇࡢ☜ㄆ 4-6 ࣨ᭶㱋ࡢ࣓ࢫࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ 4 㢌㸦ࣈࢱ A-D ࡜ࡋࡓ㸧࡟࠾࠸࡚ Ⓨ᝟࿘ᮇࢆほᐹࡋࡓࠋࡑࢀࡒࢀࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚㸪ᑡ࡞ࡃ࡜ࡶ 2 ᅇࡢⓎ᝟ࢆ☜ㄆࡋ㸪ṇᖖ࡞Ⓨ᝟࿘ᮇ࡛࠶ࡿࡇ࡜ࢆ☜࠿ࡵࡓᚋ࡟ MRI ᧜ീ࠾ࡼࡧ ᥇⾑ࢆ⾜࠸㸪⾑₢୰࣍ࣝࣔࣥ⃰ᗘࡢ ᐃࢆ⾜ࡗࡓࠋ౑⏝ࡋࡓ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵ ࢢࡢⓎ᝟࿘ᮇࡣ 21-23 ᪥࡛㸪ᚑ᮶ࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿሗ࿌࡜୍⮴ࡋ ࡚࠸ࡓ(43)ࠋ᤼༸☜ㄆࡢࡓࡵࡢ MRI ᧜ീ࠾ࡼࡧ᥇⾑᫬ࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡣ 7-9 ࣨ᭶㱋࡛࠶ࡾ㸪య㔜ࡣ 8.4-9.0 kg ࡛࠶ࡗࡓࠋ

(17)

16 MRI ᧜ീ࠾ࡼࡧ࣍ࣝࣔࣥ ᐃᮇ㛫 MRI ᧜ീ࠾ࡼࡧ࣍ࣝࣔࣥ ᐃᮇ㛫ࡣ㸪ࢫࢱࣥࢹ࢕ࣥࢢⓎ᝟㛤ጞ᪥ࢆ 0 ᪥ ࡜ ࡋ㸪Ⓨ᝟㛤ጞ᪥ࡢ 10 ᪥๓㸦㸫10 ᪥㸧࠿ࡽ 10 ᪥ᚋ㸦㸩10 ᪥㸧ࡢ 21 ᪥㛫࡜ ࡋࡓࠋࡲࡓ㸪MRI ᧜ീ࠾ࡼࡧ࣍ࣝࣔࣥ ᐃࡢࡓࡵࡢ᥇⾑ࡣẖ᪥ 17 ᫬࡟ᐇ᪋ࡋ ࡓࠋ MRI ᧜ീ MRI ᧜ീࡣ㸪༸ᕢ఩⨨ࡢ☜ㄆࡢ㝿࡟⏝࠸ࡓ⸆๣ࡢ➽⫗ෆᢞ୚࡟ࡼࡿ㙠㟼ୗ࡟ ࡚⾜ࡗࡓࠋ0.4 ࢸࢫࣛỌஂ☢▼ᆺ࣮࢜ࣉࣥ MRI ⿦⨨㸦APERTO Lucent㸪᪥❧࣓

ࢹ࢕ࢥ㸪᯽㸧࡟࡚㸪QD knee ࢥ࢖ࣝࢆ⏝࠸࡚᧜ീࡋࡓࠋspin-echo ἲ࡟ࡼࡿ T1 ᙉ

ㄪ⏬ീ࠾ࡼࡧfast spin-echo ἲ࡟ࡼࡿ T2 ᙉㄪ⏬ീࢆ㸪⧞ࡾ㏉ࡋ᫬㛫 12000 msec㸪

࢚ࢥ࣮᫬㛫 104 msec㸪ࣇࣜࢵࣉゅᗘ 90r㸪᧜ീど㔝 180 mm™180 mm㸪ࢫࣛ࢖ ࢫཌ 4 mm ࡟࡚య㍈᩿㠃࠾ࡼࡧ▮≧᩿㠃࡟࠾࠸࡚᧜ീࡋࡓࠋࡲࡓ㸪యື࡟ࡼࡿ ࡪࢀࡀ⏕ࡌ࡞࠸ࡼ࠺࡟㸪࿧Ẽ┦࡛ࡢࡳಙྕ཰㞟ࡍࡿ࿧྾ྠᮇ᧜ീࢆ⾜ࡗࡓࠋ

Osirix ࢯࣇࢺ࢚࢘࢔ v4.1.2㸦Pixmeo Sarl㸪Bernex㸪Switzerland㸧ࢆ⏝࠸࡚㸪ᚓ ࡽࢀࡓ⏬ീ࠿ࡽ༸⬊ࡢಶᩘ࡜┤ᚄࢆィ ࡋࡓࠋ༸⬊ࡢಶᩘ࡜┤ᚄࡣ୰ኸ್㸦᭱ ᑠ್- ᭱኱್㸧࡛♧ࡋࡓࠋ ⾑₢୰࣍ࣝࣔࣥ⃰ᗘ ᐃ 㢕㟼⬦ࡼࡾ⣙ 2 ml ࡢ⾑ᾮࢆ᥇ྲྀࡋ㸪EDTA-2Na ࢆᐜࢀࡓࢳ࣮ࣗࣈ࡬ᅇ཰ࡋࡓࠋ ᚓࡽࢀࡓ⾑ᾮࡣ㐲ᚰศ㞳ࢆࡋ࡚⾑₢࡜ࡋ㸦4°C㸪1000×g㸪15 ศ㸧㸪 ᐃࡲ࡛㸫80°C ࡟࡚෾⤖ಖᏑࡋࡓࠋ⾑₢୰ 17β ࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ࡜ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡢ  ᐃࡣ㸪➇ྜ ELISA ἲ࡟࡚ᐃ㔞ࡍࡿ࢟ࢵࢺ㸦Estradiol EIA Kit㸪Progesterone EIA Kit㸪 Cayman Chemical Company㸪Michigan㸪USA㸧ࢆ⏝࠸࡚⾜ࡗࡓࠋ ᐃ๓࡟㐺㔞ࡢ

(18)

17

⾑₢ࢆࢪ࢚ࢳ࢚࣮ࣝࢸࣝ࡟࡚ᢳฟࡋࡓᚋ࡟㸪࢟ࢵࢺࡢࣉࣟࢺࢥ࣮ࣝ࡟ᚑ࠸ ᐃ ࡋࡓࠋ⡆༢࡟㏙࡭ࡿ࡜㸪᭱ึ࡟௜ᒓࡢ࣐࢘ࢫࣔࣀࢡ࣮ࣟࢼࣝᢠయ࡛ࢥ࣮ࢺࡉࢀ

ࡓ 96 ✰ࣉ࣮ࣞࢺ࡟㸪50 Pl ࡢᶆ‽ヨᩱࡲࡓࡣヨᩱࢆධࢀࡓࠋࡑࡢᚋ㸪Estradiol

AchE Tracer ࢆ 50 Pl㸪࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ EIA ᢠయࢆ 50 Pl ຍ࠼࡚ 1 ᫬㛫࢖ࣥ

࣮࢟ࣗ࣋ࢺࡋࡓࠋὙίࣂࢵࣇ࢓࣮࡛ 5 ᅇὙίࡋࡓᚋ㸪200 Pl ࡢ Ellman`s reagent ࢆධࢀ 60-90 ศ㐽ගୗ࡛࢖࣮ࣥ࢟ࣗ࣋ࢺࡋࡓࠋ࣐࢖ࢡࣟࣉ࣮ࣞࢺ࣮ࣜࢲ࣮࡟࡚ ⓎⰍࢆ᳨ฟᚋ㸪ྛ⾑₢୰࣍ࣝࣔࣥ⃰ᗘࢆ⟬ฟࡋࡓࠋ 1-3. ⤖⤖ᯝ ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ༸ᕢࡢᙧែ࡜఩⨨ 3 㢌ࡢ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚༸ᕢࢆ☜ㄆࡋࡓ࡜ࡇࢁ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢ༸ᕢ࡜ ྠᵝ࡟᱓ᐇ≧ࡢᙧែ࡛࠶ࡗࡓࠋ ࡲࡓ㸪⮖࠿ࡽ᭱ᚋங㢌௜㏆࡛㛤⭡ࡍࡿࡇ࡜࡛㸪Ꮚᐑ༸ᕢࢆ☜ㄆࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ ࡁࡓࠋࡉࡽ࡟㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ༸ᕢࡣ᭱ᚋங㢌࠿ࡽ๓ᚋ 5 cm ࡢ⠊ᅖ࡛ MRI ࢆ᧜ീࡍࡿࡇ࡜࡛☜ㄆࡀ࡛ࡁࡓࠋ MRI ᧜ീ ༸⬊ᾮࢆ㈓ࡵࡓ༸⬊ࡣ㸪T1 ᙉㄪ⏬ീ࡛ࡣᵓ㐀ࡀࡣࡗࡁࡾࡋ࡞࠿ࡗࡓ㸦ᅗ 1-a ᕥᅗ㸧ࡀ㸪T2 ᙉㄪ⏬ീ࡟࠾࠸࡚㧗ಙྕࡢ෇ᙧᵓ㐀࡜ࡋ࡚ㄆࡵࡽࢀࡓ㸦ᅗ 1-a ྑ ᅗ㸧ࠋMRI ᧜ീࡢᡤ⏝᫬㛫ࡣ㸪1 ᩿㠃࡛ 5 ศ௨ୗ㸪┤⾜ࡍࡿ 2 ᩿㠃࡛ 15 ศ௨ ୗ࡛࠶ࡗࡓࠋ ⤒᫬ⓗ࡟ MRI ᧜ീࢆ⾜ࡗࡓ⤖ᯝ㸪ࣈࢱ A ࡛ࡣ㸫1 ᪥࡜ 0 ᪥㸪ࣈࢱ B ࡛ࡣ 0 ᪥࡜ 㸩1 ᪥㸪ࣈࢱ C ࡛ࡣ㸫1 ᪥࠿ࡽ㸩1 ᪥㸪ࣈࢱ D ࡛ࡣ 㸫1 ᪥࡜ 0 ᪥࡟ ༸⬊ࡀ☜ㄆ࡛ࡁࡓ㸦ᅗ 1-b㸪c㸧ࠋୖグ௨እࡢ᪥࡛ࡣ MRI ࡟࠾࠸࡚༸⬊ࢆ☜ㄆࡍ

(19)

18 ࡿࡇ࡜ࡣ࡛ࡁ࡞࠿ࡗࡓࠋࡲࡓ㸪☜ㄆ࡛ࡁࡓ᭱኱༸⬊ᩘࡣ㸪ࣈࢱ A ࡛ࡣ 5 ಶ㸪 ࣈࢱ B ࡛ࡣ 4 ಶ㸪ࣈࢱ C ࡛ࡣ 3 ಶ㸪ࣈࢱ D ࡛ࡣ 4 ಶ࡛࠶ࡗࡓ㸦ᅗ 1-c㸧ࠋ ࡲࡓ☜ㄆ࡛ࡁࡓ༸⬊ࡢ┤ᚄࡣ 1.1-4.7 mm ࡛࠶ࡗࡓࠋ㯤యࡣࡍ࡭࡚ࡢ MRI ᧜ീ ࢆ㏻ࡋ࡚☜ㄆ࡛ࡁ࡞࠿ࡗࡓࠋ ⾑₢୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘ࡜⾑₢୰࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘ ⾑₢୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡢ୰ኸ್ࡣ 㸫10 ᪥࠿ࡽḟ➨࡟పୗࡋ㸪㸫6 ᪥ ࠿ࡽ 㸩2 ᪥ࡲ࡛ࡣ 2.5 ng/ml ᮍ‶ࡢప್࡛᥎⛣ࡋࡓࠋࢫࢱࣥࢹ࢕ࣥࢢⓎ᝟ࡀ⤊ ஢ࡋ㸪MRI ࡟࠾࠸࡚༸⬊ࡀᾘኻࡋࡓ 㸩3 ᪥࠿ࡽ⾑₢୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡢ ୰ኸ್ࡣୖ᪼ࡋ㸪㸩10 ᪥࡟᭱㧗್࡜࡞ࡿ 42.9 ng/ml㸦21.1-56.1 ng/ml㸧࡟㐩ࡋࡓ 㸦ᅗ1-d㸧ࠋ ⾑₢୰࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘࡢ୰ኸ್ࡣ 㸫10 ᪥࠿ࡽ 㸫2 ᪥ࡲ࡛ࡣ 15 pg/ml ᮍ‶࡛᥎⛣ࡋࡓࠋMRI ࡟࡚༸⬊ࡀ☜ㄆ࡛ࡁࡣࡌࡵࡓ 㸫1 ᪥࠿ࡽ⾑₢୰࢚ ࢫ ࢺ ࣛ ࢪ ࢜ ࣮ ࣝ ⃰ ᗘ ࡢ ୰ ኸ ್ ࡣ ୖ ᪼ ࡋ 㸪0 ᪥ ࡟᭱ 㧗್ ࡜࡞ ࡿ 30.9 pg/ml 㸦24.0-35.4 pg/ml㸧࡟㐩ࡋࡓࠋࡑࡢᚋ࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘࡣపୗࡋ㸪㸩2 ᪥࡟ ࡣ 15 pg/ml ᮍ‶࡟పୗࡋࡓࠋ 1-4. ⪃⪃ᐹ ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿ⭡⭍ࡢ MR ⏬ീ࡟࠾࠸࡚㸪┤ᚄ 1-5 mm ࡢ㧗ಙ ྕ෇ᙧᵓ㐀≀ࡀ」ᩘ㞟ࡲࡗ࡚࠸ࡿᵓ㐀ࡀㄆࡵࡽࢀࡓࠋࡇࡢᵓ㐀ࡣࣄࢺ࡟࠾ࡅࡿ ͆ከࡢ࠺⬊ᛶ༸ᕢ⑕ೃ⩌͇ࡢ MR ⏬ീ࡜㢮ఝࡋ࡚࠸ࡓ㸦ᅗ 1-e㸧(24)ࠋࣄࢺࡢ ͆ከࡢ࠺⬊ᛶ༸ᕢ⑕ೃ⩌͇ࡣ᤼༸㞀ᐖࡢࡦ࡜ࡘ࡛࠶ࡾ㸪༸ᕢ࡟」ᩘࡢ༸⬊ࡀᏑ ᅾࡍࡿ⑕ೃ⩌࡛࠶ࡿࠋࣈࢱࡣከ⫾ື≀࡛࠶ࡾ㸪༸⬊ᮇ࡟ࡣ༸ᕢ࡟」ᩘࡢ༸⬊ࡀ Ꮡᅾࡋ࡚࠸ࡿࡓࡵ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ MR ⏬ീ࡟࠾࠸࡚ㄆࡵࡽࢀࡓࣄࢺࡢ

(20)

19 ͆ከࡢ࠺⬊ᛶ༸ᕢ⑕ೃ⩌͇ࡢ༸ᕢ࡜㢮ఝࡋࡓ㧗ಙྕ෇ᙧ≀ࡀ」ᩘ㞟ࡲࡗ࡚࠸ࡿ ᵓ㐀ࡣ༸ᕢ࡜⪃࠼ࡽࢀࡓࠋࡲࡓ㸪㧗ಙྕ෇ᙧ≀ࡢฟ⌧࡜ᾘኻࡣ㸪4 㢌ࡍ࡭࡚ࡢ ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚Ⓨ᝟⾜ືࡢ㛤ጞ࠾ࡼࡧ⤊஢࡜୍⮴ࡋ࡚࠸ࡓࠋࡉࡽ ࡟㸪⾑₢୰࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘࡣ༸⬊ᩘࡢቑῶࢆ཯ᫎࡍࡿ࡜ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠾ࡾ (44)㸪⾑₢୰࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘࡢቑῶࡶ MR ⏬ീ࡟࠾ࡅࡿ㧗ಙྕ෇ᙧ≀ࡢ ᾘ㛗࡜୍⮴ࡋ࡚࠸ࡓࠋຍ࠼࡚㸪⾑₢୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡣ㯤యࡢᾘ㛗ࢆ཯ ᫎࡍࡿ࡜ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠾ࡾ㸪MR ⏬ീ࡟࠾࠸࡚㧗ಙྕ෇ᙧ≀ࡀᾘኻࡋࡓᚋ࡟⾑₢ ୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡀୖ᪼ࡋࡓࠋࡇࢀࡣ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ༸ᕢ࡟࠾࠸ ࡚᤼༸ࡀ㉳ࡇࡾ㸪MR ⏬ീୖ࡛ࡣ᳨ฟࡉࢀ࡞࠿ࡗࡓࡀ㸪㯤యࡀᙧᡂࡉࢀࡓࡓࡵ ࡟⾑₢୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡀୖ᪼ࡋࡓ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋࡇࡢࡼ࠺࡟㸪MR ⏬ ീୖࡢ㧗ಙྕ෇ᙧᵓ㐀≀ࡢᾘ㛗ࡣ㸪Ⓨ᝟⾜ື࠾ࡼࡧ⾑₢୰࣍ࣝࣔࣥ⃰ᗘࡢቑῶ ࡜୍⮴ࡋ࡚࠸ࡓࠋ௨ୖࡢࡇ࡜࠿ࡽ㸪MRI ࢆ⏝࠸࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚ 㯤యࡣ☜ㄆ࡛ࡁ࡞࠿ࡗࡓࡀ㸪༸⬊ࡢⓎ⫱࡜ᾘኻࢆほᐹ࡛ࡁࡓ࡜⤖ㄽ࡛ࡁࡿࠋ ࡋ࠿ࡋ㸪MRI ࡣ༸ᕢࢆほᐹࡍࡿ㝿࡟▷ᡤࡶ࠶ࡿࠋࡑࡢࡦ࡜ࡘࡣࣜ࢔ࣝࢱ࢖࣒ ࡛ほᐹࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁ࡞࠸Ⅼ࡛࠶ࡿ(31)ࠋࡓࡔ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢయ᱁࡛࠶ ࢀࡤ㸪ᮏ◊✲࡛ᐇ᪋ࡋࡓ᧜ീ᮲௳࡛ࡣ 1 ᩿㠃࡛ࡢ᧜ീࡣ 5 ศ௨ෆ࡛ᐇ᪋࡛ࡁ㸪 2 ᩿㠃࡛ࡢ᧜ീࢆ⾜ࡗ࡚ࡶ 15 ศ௨ෆ࡟ᐇ᪋࡛ࡁࡓࠋࡑࡢࡓࡵ㸪ࣜ࢔ࣝࢱ࢖࣒ ࡟ほᐹ࡛ࡁࡎ࡜ࡶ㸪୙㒔ྜࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋࡲࡓ㸪ࡶ࠺ࡦ࡜ࡘࡢ▷ᡤࡣᮏᐇ㦂࡛⏝ ࠸ࡓ0.4 ࢸࢫࣛ MRI ⿦⨨ࡣࡉ࡯࡝ศゎ⬟ࡀ㧗ࡃ࡞࠸ࡓࡵ㸪᭱▷ࢫࣛ࢖ࢫཌ࡛࠶ ࡿ 4 mm ࡟཰ࡲࡗ࡚ࡋࡲ࠸᧜ീࡉࢀ࡞࠸ᑠࡉ࡞༸⬊ࡸ㸪༸ᕢᐇ㉁࡜ಙྕᙉᗘࡀ ㏆ࡃ⏬ീୖ࡛༊ูࡀ࡛ࡁ࡞࠸㯤యࡢࡼ࠺࡟༸ᕢෆࡢヲ⣽࡞ほᐹࡣ㞴ࡋ࠸Ⅼ࡛࠶ ࡿࠋࡇࡢⅬ࡟ࡘ࠸࡚ࡣ㸪11.7 ࢸࢫࣛࡢ MRI ⿦⨨ࢆ⏝࠸࡚ 25 Pm ࡢࢫࣛ࢖ࢫཌ ࡛᧜ീࡋࡓ࡜ࡇࢁ㸪┤ᚄ 300 Pm ࡢ࣐࢘ࢫࡢ༸⬊ࡀ☜ㄆ࡛ࡁࡓࡇ࡜ࡀሗ࿌ࡉࢀ ࡚࠸ࡿ(57)ࠋࡼࡾ㧗ゎീᗘࡢ MRI ⿦⨨ࢆ⏝࠸ࡿࡇ࡜࡟ࡼࡗ࡚㸪ᑠࡉ࡞༸⬊ࢆぢ

(21)

20 ⴠ࡜ࡍࡇ࡜࡞ࡃヲ⣽࡟࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ༸ᕢࢆほᐹ࡛ࡁࡿྍ⬟ᛶࡀ࠶ࡿࠋ ᭱ᚋ࡟㸪MRI ⿦⨨ࡣᮏయࡀ㧗౯࡛࠶ࡿ࡜࠸࠺㞴Ⅼࡶ࠶ࡿࠋ๓㏙ࡢࡼ࠺࡟㸪࣐࢖ ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡣࣄࢺ⑌ᝈࢆ෌⌧ࡍࡿ࡜࠸࠺㠃࡛㸪ඃࢀࡓᐇ㦂ື≀࡜࠸࠼ࡿࠋ ≉࡟㸪ࣈࢱࡣࣄࢺࡢ୰ᯡ⚄⤒⣔ࡢࣔࢹࣝ࡜ࡋ࡚㟋㛗㢮࡟ḟ࠸࡛㐺ࡋ࡚࠸ࡿ࡜ሗ ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿ(54)ࠋMRI ࡣ୰ᯡ⚄⤒⣔ࢆヲ⣽࡟ほᐹ࡛ࡁࡿ၏୍࡜ࡶ࠸࠼ࡿᡭẁ ࡛࠶ࡾ㸪࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚ᐇ㦂ࢆ⾜࠺࡟࠶ࡓࡾ㸪タ⨨ࢆࡍࡿ౯್ࡣ ༑ศ࡟࠶ࡿࠋຍ࠼࡚ MRI ࡣᐇ᪋⪅ࡢᢏ⾡࡟ᕥྑࡉࢀ࡞࠸࡜࠸࠺Ⅼ࡛㉸㡢Ἴ᳨ᰝ ࡼࡾࡶᐈほᛶࡀ࠶ࡾ㸪ࡲࡓࣈࢱࡢ༸ᕢࡢࡼ࠺࡟⭡⭍ෆ࡛኱ࡁࡃ఩⨨ࡀኚ໬ࡍࡿ ⮚ჾࢆほᐹࡍࡿሙྜ㸪୍ᗘ࡟ほᐹ࡛ࡁࡿ⠊ᅖࡀᗈࡃ㸪⮚ჾࢆぢⴠ࡜ࡍࡇ࡜ࡀ࡞ ࠸࡜࠸࠺฼Ⅼࡶ࠶ࡿ(31)ࠋ ᮏ◊✲࡛ࡣ㸪㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆసฟࡍࡿ᪉ἲ࡜ࡋ࡚㸪᤼༸┤ ᚋࡢ 1 ⣽⬊ᮇ⬇࡟ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡍࡿࡇ࡜ࢆィ⏬ࡋࡓࠋࡑࡢࡓࡵ㸪࣐࢖ ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚᤼༸ࢆ☜ㄆࡋ㸪⬇ᅇ཰ࡢ᫬ᮇࢆᢕᥱࡍࡿࡇ࡜ࡣ୙ྍḞ ࡛࠶ࡿࠋ➨ 1 ❶࡛ࡣ㸪MRI ࢆ⏝࠸࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ༸ᕢ࡟࠾ࡅࡿ༸⬊ࡢ ᾘ㛗㸪≉࡟᤼༸ࢆ☜ㄆ࡛ࡁࡿ࠿ࢆヨࡳࡓ⤖ᯝ㸪ほᐹࡋࡓ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ 4 㢌ࡢ࠺ࡕ 4 㢌ࡍ࡭࡚࡛᤼༸ࢆ☜ㄆࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡓࠋ᤼༸ࡋࡓ┤ᚋ࡟༸⟶ࢆ℺ ὶࡋ࡚⬇ࢆᅇ཰ࡍࢀࡤ㸪1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᚓࡽࢀࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿࠋ௨ୖࡢࡼ࠺࡟㸪 ᮏ❶࡛ࡣ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿࡓࡵࡢᇶ♏࡛࠶ ࡿ᤼༸☜ㄆἲࢆ☜❧࡛ࡁࡓࠋ

(22)

21 ᅗ1-a. ༸⬊ᮇࡢ MR ⏬ീ ᕥ㸸T1 ᙉㄪ⏬ീ㸪ྑ㸸T2 ᙉㄪ⏬ീ L㸸⭡㒊ࡢᕥഃ㸪R㸸⭡㒊ࡢྑഃ T1 ᙉㄪ⏬ീ࡛ࡣ༸ᕢᵓ㐀ࡣ☜ㄆ࡛ࡁ࡞࠸ࡀ㸪T2 ᙉㄪ⏬ീ࡛ࡣ༸⬊࡜ᛮࢃࢀࡿᵓ㐀ࡀ㧗ಙྕ෇ ᙧ≀࡜ࡋ࡚ᥥฟࡉࢀࡓࠋⓑ୸ෆࡀ༸ᕢᵓ㐀࡜⪃࠼ࡽࢀࡓࠋ ᅗ1-b. MR ⏬ീ࡟࠾ࡅࡿಶయ D ࡢ༸⬊☜ㄆ࠿ࡽᾘኻ ࢫࢱࣥࢹ࢕ࣥࢢⓎ᝟㛤ጞ᪥ࢆ 0 ᪥࡜ࡋࡓࠋ 㧗ಙྕࡢ෇ᙧᵓ㐀࡜ࡋ࡚☜ㄆ࡛ࡁࡿ༸⬊ࡣ㸪㸫1 ᪥࠿ࡽ 0 ᪥࡟࠾࠸࡚☜ㄆ࡛ࡁ㸪㸩1 ᪥࡛ࡣ☜ ㄆ࡛ࡁ࡞࠿ࡗࡓࠋ

(23)

22 ᅗ 1-c. ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ A-D ࡟࠾ࡅࡿ MRI ࢆ⏝࠸࡚ほᐹࡋࡓ༸⬊ࡢ┤ᚄ ࡜ᩘࡢኚ໬࠾ࡼࡧ༸⬊ࢆほᐹ࡛ࡁࡓᮇ㛫 ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ A-D ࡢಶయ࡟࠾࠸࡚㸪MRI ࢆ⏝࠸࡚ほᐹࡋࡓྛ༸⬊ࡢ┤ᚄࢆࣉࣟࢵࢺࡋ㸪 ༸⬊ᩘࢆ♧ࡋࡓࠋ㸫1 ᪥࡛ࡣ A㸪C㸪D ࡢಶయ࡟࠾࠸࡚㸪ࡑࢀࡒࢀ 5㸪2㸪4 ಶࡢ༸⬊ࡀ☜ㄆ࡛ ࡁࡓࠋB ࡣ 0 ᪥ ࠿ࡽ 4 ಶࡢ༸⬊ࡀ☜ㄆ࡛ࡁࡓࠋ๓᪥ࡲ࡛☜ㄆ࡛ࡁࡓ༸⬊ࡀᾘኻࡋࡓࡢࡣ A㸪 D ࡛ࡣ 㸩1 ᪥㸪B㸪C ࡛ࡣ 㸩2 ᪥࡛࠶ࡗࡓࠋA-D ࡟࠾࠸࡚㸪㸫1 ᪥㸪0 ᪥㸪㸩1 ᪥௨እࡢ᪥ ࡛ࡣ༸⬊ࡣほᐹ࡛ࡁ࡞࠿ࡗࡓࠋ 5 ಶ 3 ಶ 4 ಶ 2 ಶ 2 ಶ 2 ಶ 3 ಶ 4 ಶ 4 ಶ

(24)

23    ᅗ1-d. ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ㸦n㸻4㸧࡟࠾ࡅࡿ⾑₢୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘ㸦ୖ㸧 ࡜⾑₢୰17-β ࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘ㸦ୗ㸧  ࢫࢱࣥࢹ࢕ࣥࢢⓎ᝟ࢆ♧ࡋࡓᮇ㛫 ࢹ࣮ࢱࡣ㸪୰ኸ್㸪➨ 1࣭➨ 3 ᅄศ఩Ⅼ㸪᭱኱್㸪᭱ᑠ್࡛♧ࡍࠋࢫࢱࣥࢹ࢕ࣥࢢⓎ᝟㛤ጞ᪥ ࢆ 0 ᪥࡜ࡋࡓࠋ ⾑₢୰ࣉࣟࢪ࢙ࢫࢸࣟࣥ⃰ᗘࡣ 㸫10 ᪥࠿ࡽḟ➨࡟పୗࡋ㸪㸫6 ᪥௨㝆ࡣప್࡛᥎⛣ࡋࡓࠋࡑࡢ ᚋ 㸩3 ᪥࠿ࡽୖ᪼ࡋ㸪㸩10 ᪥࡟᭱㧗್࡟㐩ࡋࡓࠋ ⾑₢୰࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘࡣ 㸫10 ᪥࠿ࡽ 㸫2 ᪥ࡲ࡛ࡣప್࡛᥎⛣ࡋࡓࠋ㸫1 ᪥࠿ࡽୖ᪼ࡋ㸪 0 ᪥࡟᭱㧗್࡟㐩ࡋࡓࠋࡑࡢᚋ࢚ࢫࢺࣛࢪ࣮࢜ࣝ⃰ᗘࡣపୗࡋ㸪㸩2 ᪥௨㝆ࡣప್࡛᥎⛣ࡋࡓࠋ

(25)

24 ᅗ 1-e. ከࡢ࠺⬊ᛶ༸ᕢ⑕ೃ⩌࡟⨯ᝈࡋࡓᛮ᫓ᮇࡢᑡዪ࡟࠾ࡅࡿ༸ᕢࡢ MR ⏬ ീ㸦ᕥ㸧࡜࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿ༸ᕢࡢ MR ⏬ീ㸦ྑ㸧ࡢẚ㍑ ᕥᅗࡣᩥ⊩㸦24㸧ࡼࡾᘬ⏝ࡋࡓࠋⓑ୸࡛♧ࡍ㒊ศࡀ༸ᕢ࡛࠶ࡾ㸪༸⬊࡛࠶ࡿ㧗ಙྕ෇ᙧ≀ࡀ୪ࡪ ᵝᏊࡀ᧜ീࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋྑᅗࡢⓑ୸ෆࡣ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ ༸ᕢ࡜ᛮࢃࢀࡿᵓ㐀࡛࠶ࡾ㸪ᕥ ᅗࡢⓑ୸ෆࡢᵓ㐀࡜ఝ࡚࠸ࡿࠋ

(26)

25 ➨ ➨ 2 ❶ ࣈࢱయእཷ⢭⬇࡟࠾ࡅࡿ Tol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢩࢫࢸ࣒ࢆ⏝࠸ࡓ㑇ఏᏊ⤌ ᥮࠼ 2-1. ㅖゝ ➨ 1 ❶࡟࠾࠸࡚ MRI ࢆ⏝࠸࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾ࡅࡿ༸⬊ࡢᾘ㛗ࢆほᐹࡋ㸪 ᤼༸ࢆ☜ㄆࡍࡿࡇ࡜ࡀྍ⬟࡜࡞ࡗࡓࠋ᤼༸ࢆ☜ㄆࡋࡓ┤ᚋ࡟༸⟶ࢆ℺ὶࡍࢀࡤ㸪1 ⣽ ⬊ᮇ⬇ࢆᅇ཰ࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋ➨ 2 ❶࡛ࡣ㸪ᅇ཰ࡋࡓ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ㑇ఏᏊࢆᨵኚ ࡍࡿ᪉ἲࢆ☜❧ࡍࡿࡇ࡜ࢆ┠ⓗ࡜ࡋ࡚㸪ࣈࢱࡢ 1 ⣽⬊ᮇ⬇࡬ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධ ࡋ࡚㸪⬇ࡢ㑇ఏᏊࢆᨵኚࡍࡿ᪉ἲࢆ᳨ウࡋࡓࠋ㑇ఏᏊᨵኚ⬇ࢆస〇ࡍࡿ┠ⓗ࡛ 1 ⣽ ⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ὀධࡍࡿ≀㉁ࡣࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ௨እ࡟ࡶ㸪DNA(2, 9)ࡸேᕤไ㝈㓝 ⣲(16, 33, 37)ࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ㸪㑇ఏᏊᨵኚ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࢆసฟ ࡍࡿ᪉ἲࡢᇶ♏ࢆ☜❧ࡍࡿࡇ࡜ࢆ┠ⓗ࡜ࡋࡓࠋᇶ♏ࡢ☜❧࡟ࡣ㸪㑇ఏᏊ᧯సࡣ࡛ࡁࡿ 㝈ࡾ⡆₩࡛㸪⤌᥮࠼ࡢ⤖ᯝࡀホ౯ࡋࡸࡍ࠸ࡇ࡜ࡀ㔜せࡔ࡜⪃࠼ࡓࡓࡵ㸪⤌㎸ࡳຠ⋡ࡀ Ⰻࡃ㸪ᶵᗎࡀ༢⣧࡛࠶ࡿ࡜࠸࠺Ⅼ࠿ࡽࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆ㑅ᢥࡋࡓࠋࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡣ ືࡃ㑇ఏᏊ࡜ࡶ࿧ࡤࢀࡿሷᇶ㓄ิ࡛㸪1940 ᖺ௦༙ࡤ࡟Ⓨぢࡉࢀࡓᚋ㸪᪻⹸ࡸ᳜≀㸪 ⣽⳦࡞࡝ᵝࠎ࡞⏕≀ࡢᰁⰍయୖ࠿ࡽぢࡘ࠿ࡗ࡚ࡁࡓ(42)ࠋࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡢሷᇶ㓄ิ ࡢ୧➃࡟ࡣ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ⊂≉ࡢ㓄ิ࡛࠶ࡿ㏫ྥࡁ཯᚟㓄ิࡀᏑᅾࡍࡿࠋࢺࣛࣥࢫ ࣏ࢨ࣮ࢮ࡜࿧ࡤࢀࡿ㓝⣲࡟ࡼࡾࡇࡢ㓄ิࡀㄆ㆑ࡉࢀ࡚ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆࢤࣀ࣒㓄ิ ࠿ࡽษࡾฟࡋ㸪௚ࡢ㐺ᙜ࡞ࢤࣀ࣒㓄ิ࡟෌ᗘࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡣᤄධࡉࢀࡿ(8)ࠋࡇࡢࡼ ࠺࡟ࡋ࡚㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡣᰁⰍయୖࢆ⬟ືⓗ࡟⛣ືࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋࡇࡢࢺࣛࣥ ࢫ࣏ࢰࣥࡢᛶ㉁ࢆ฼⏝ࡋ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡢሷᇶ㓄ิࡢ୰࡟ᑟධࡋࡓ࠸㑇ఏᏊ㓄ิࢆ ⤌㎸ࡴࡇ࡜࡛㸪㑇ఏᏊᑟධࡢࢶ࣮ࣝ࡜ࡋ࡚⏝࠸ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋ ⌧ᅾ㸪့ங㢮ࡢࢤࣀ࣒࡟⤌㎸ࡳࡀྍ⬟࡞ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ࡜ࡋ࡚ Sleeping Beauty㸪 piggyBac ࡑࡋ࡚ Tol2 ࡞࡝ࡀ▱ࡽࢀ࡚࠸ࡿ(4, 21, 27)ࠋᐇ㝿࡟㸪Sleeping Beauty ࡸ piggyBac ࢆ⬇ࡢ⣽⬊㉁ෆ࡟ὀධࡍࡿࡇ࡜࡛㑇ఏᏊ⤌᥮࠼ࣈࢱࢆసฟࡋࡓሗ࿌ࡀ࠶ࡿ

(27)

26 (13, 32)ࠋTol2 ࡣ࣓ࢲ࢝ࢤࣀ࣒࠿ࡽⓎぢࡉࢀࡓኳ↛ࡢ DNA ᆺࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰ࡛ࣥ࠶ࡾ (27)㸪ࣈࢱయ⣽⬊࡟࠾࠸࡚㸪Sleeping Beauty ࡼࡾࡶ㑇ఏᏊࡢ⤌㎸ࡳຠ⋡ࡀ㧗࠿ࡗࡓ࡜ ࡢሗ࿌(5)ࡀ࠶ࡿࡓࡵ㸪ᮏ❶࡛ࡣ Tol2 ࢆ⏝࠸ࡿࡇ࡜࡜ࡋࡓࠋ Tol2 ࡀࢤࣀ࣒࡟⤌㎸ࡲࢀࡿࡓࡵ࡟ࡣ㸪ࢤࣀ࣒࡬ࡢ᥋ゐࡀྍ⬟࡞ሙᡤ࡬ᑟධࡍࡿᚲせ ࡀ࠶ࡿࠋTol2 ࡣ⬟ືⓗ࡟⣽⬊⭷ࢆ㏱㐣ࡍࡿࡇ࡜ࡣ࡛ࡁ࡞࠸ࡓࡵ࡛࠶ࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ Tol2 ࢆᑟධࡍࡿᡭẁࢆ㸪1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁ෆ࡬ὀධࡍࡿࡇ࡜࡜ࡋࡓࠋ⣽⬊㉁ෆ࡬ὀ ධࡍࡿ᪉ἲࡣ㸪ࡇࢀࡲ࡛ከࡃ⏝࠸ࡽࢀࡓ๓᰾࡬ὀධࡍࡿ᪉ἲ࡟ẚ࡭ὀධᚋࡢ⬇ࡢ⏕Ꮡ ⋡ࡀ㧗࠸(59) ࡜ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࡓࡵ࡛࠶ࡿࠋ ⌧ᅾࡲ࡛ Tol2 ࢆࣈࢱ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ὀධࡋ࡚㸪㑇ఏᏊᨵኚ⬇ࢆసฟࡋࡓሗ࿌ࡣ࡞࠸ࠋ ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡢࢤࣀ࣒࡟ᑐࡍࡿ⤌㎸ࡳຠ⋡ࡣ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ࡜ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢨ࣮ࢮ ࡢ㔞ࡸࣂࣛࣥࢫ࡟ࡼࡾኚືࡍࡿࡇ࡜ࡀ့ங㢮࡛▱ࡽࢀ࡚࠸ࡿࡓࡵ(42, 59)㸪Tol2 ࡟ࡼ ࡿ㑇ఏᏊ⤌㎸ࡳࢆᡂຌࡉࡏࡿ࡟ࡣ㸪ࣈࢱ⬇࡬ࡢὀධ᮲௳ࡢタᐃࡀᚲせ࡛࠶ࡿࠋᮏ❶࡛ ࡣ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢయእཷ⢭⬇࡟࠾࠸࡚ Tol2 ࢆ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ὀධࡍࡿ᮲௳ࢆ᳨ ウࡋࡓࠋࣈࢱ⬇࡬ࡢὀධ᮲௳ࡣ㸪࣐࢘ࢫ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ Tol2 ࢆὀධࡋ࡚㑇ఏᏊᨵኚ࣐ ࢘ࢫࢆᚓࡓሗ࿌(59)ࡢ Tol2 ὀධ⃰ᗘࢆཧ⪃࡜ࡋࡓࠋࡲࡓ㸪ᮏ❶࡟࠾࠸࡚⏝࠸ࡓ㟁Ꮚ ࣐࢖ࢡࣟ࢖ࣥࢪ࢙ࢡࢱ࣮㸦FemtoJet®㸪࢚ࢵ࣌ࣥࢻࣝࣇᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧࡛ࡣ㸪ὀධ ᫬㛫࡜ὀධᅽࢆタᐃࡍࡿࡇ࡜࡛ὀධ㔞ࢆㄪᩚࡍࡿࡓࡵ㸪ὀධ᫬㛫ࢆᅛᐃࡋὀධᅽࢆ᳨ ウࡋࡓࠋ

ᑟධ㑇ఏᏊ࡜ࡋ࡚㯤Ⰽ⺯ගࢱࣥࣃࢡ㉁㸦YFP㸧࡛࠶ࡿ Venus (41)ࢆ⤌㎸ࢇࡔ Tol2 ࢆ

⏝࠸࡚ὀධ᮲௳ࢆ᳨ウࡋࡓࠋTol2 ࡀࢤࣀ࣒࡟⤌㎸ࡲࢀࡓሙྜ㸪ࣈࢱ⬇࡛ Venus 㑇ఏ

Ꮚࡀ㌿෗⩻ヂࡉࢀ㸪㯤Ⰽ⺯ගࢆⓎࡍࡿࠋࡲࡓ㸪Tol2 ࡢὀධ᮲௳ࢆタᐃࡍࡿࡓࡵ࡟⏝࠸

ࡿࣈࢱ⬇ࡣ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢయእཷ⢭⬇࡜ࡋࡓࠋὀධ᮲௳ࡢタᐃ࡟ࡣከࡃࡢ⬇ࡀᚲせ࡛࠶ ࡿࠋᮏ◊✲ࡢ᭱⤊┠ⓗࡣ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡟࠾࠸࡚㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆసฟࡍࡿࡇ࡜ ࡛࠶ࡿࡓࡵ㸪ᮦᩱ࡜ࡋ࡚࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢయෆཷ⢭⬇ࢆ⏝࠸ࡿࡇ࡜ࡀዲࡲࡋ࠸ࡀ㸪

(28)

27 ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ⮬యࡢ㣫⫱ᩘࡀᑡ࡞࠸ࡇ࡜㸪ಶయࡀ㧗౯࡛࠶ࡿࡇ࡜㸪ࡉࡽ࡟࣐࢖ ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢ᤼༸ᩘࡀ 5 ಶ⛬ᗘ࡜ᑡ࡞࠸(37)ࡇ࡜࠿ࡽ㸪᮲௳タᐃࡢࡓࡵ࡟ᐇ㦂ࢆ ⧞ࡾ㏉ࡍࡇ࡜ࡀᅔ㞴࡛࠶ࡿࠋ୍᪉㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢయእཷ⢭⬇ࡣ㸪࡜␆ሙࡼࡾᐙ␆ࣈࢱࡢ ༸ᕢࢆ኱㔞࡟ᚓࡽࢀࡿࡢ࡛㸪༑ศᩘࢆ☜ಖ࡛ࡁࡿࠋᐙ␆ࣈࢱ⬇࡟࠾ࡅࡿὀධ᮲௳ࡀ࣐ ࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ⬇࡬ࡑࡢࡲࡲ㐺ᛂྍ⬟࠿ࡣ᳨ウࡢవᆅࡀ࠶ࡿࡀ㸪ධᡭࡀᐜ࡛᫆࠶ࡾ㸪 ࠿ࡘ஺㓄ࡀྍ⬟࡛࠶ࡿࡇ࡜࠿ࡽ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࡜Ⓨ⏕᮲௳ࡀ࡯࡜ࢇ࡝ྠ୍࡛࠶ ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡿᐙ␆ࣈࢱ⬇࡟࠾࠸࡚᮲௳ࢆ᳨ウࡋࡓࠋ ࡋ࠿ࡋ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢయእཷ⢭⬇ࢆ Tol2 ࡢὀධ᮲௳タᐃ࡟⏝࠸ࡿ࡟ࡣ㸪ၥ㢟ࡶ࠶ࡿࠋ ࣈࢱࡢయእཷ⢭ἲࡣⓎᒎ㏵ୖ࡛࠶ࡾ㸪ሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿయእཷ⢭ἲ࡛ࡢᮍᡂ⇍༸࠿ࡽ⬇ ┙⬊࡬ࡢⓎ⏕⋡ࡣ⣙ 30% ࡜ప࠸(68)ࠋࡲࡓ㸪࡜␆ሙ⏤᮶ࡢᐙ␆ࣈࢱࡢ༸ᕢ࠿ࡽᮍᡂ ⇍༸ࢆ᥇ྲྀࡋ㸪యእᡂ⇍ࡉࡏ࡚࠿ࡽయእཷ⢭⬇ࢆసฟࡍࡿ࡟ࡣ㸪༸ᕢࡢ≧ែࢆࡣࡌࡵ ᐇ᪋ᅇ㛫ࡢసฟ᮲௳ࡀ୍ᐃ࡛ࡣ࡞࠸ࠋࡑࡢࡓࡵ㸪ᐇ᪋ᅇࡈ࡜࡟⬇ࡢⓎ⏕⋡࡟ࡤࡽࡘࡁ ࡀ⏕ࡌ㸪ྛὀධ᮲௳࡟࠾ࡅࡿ㑇ఏᏊ⤌㎸ࡳຠ⋡ࢆẚ㍑ࡍࡿࡇ࡜ࡀ㞴ࡋ࠸ࠋ ࡑࡇ࡛㸪ᐇ᪋ᅇࡈ࡜ࡢⓎ⏕⋡ࡢࡤࡽࡘࡁࢆ⿵ṇࡋ㸪ྛὀධ᮲௳࡟࠾ࡅࡿ㑇ఏᏊ⤌㎸ ࡳຠ⋡ࢆẚ㍑࡛ࡁࡿ᪉ἲࢆ⪃᱌ࡋࡓࠋලయⓗ࡟ࡣ㸪㉥Ⰽ⺯ගࢱࣥࣃࢡ㉁࡛࠶ࡿ Ruby ࢆࢥ࣮ࢻࡋࡓ Ruby mRNA ࢆ Tol2 ࡜ྠ᫬࡟⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ὀධࡍࡿࡇ࡜࡜ࡋࡓࠋRuby mRNA ࡣ mRNA ࡛࠶ࡿࡓࡵ㸪⣽⬊㉁ෆ࡟ὀධࡉࢀࡿ࡜⩻ヂࡀ㛤ጞࡉࢀ㸪㉥ⰍࢆⓎࡍ ࡿࠋࡋࡓࡀࡗ࡚㸪Ruby ࡢⓎ⌧ࢆほᐹࡍࡿࡇ࡜࡛㸪ὀධ᧯సࡀ☜ᐇ࡟⾜ࢃࢀࡓ࠿㸪ࡲ ࡓ⬇ࡀ⏕Ꮡࡋ⩻ヂࢆ⾜ࡗ࡚࠸ࡿ࠿ࢆ☜ㄆࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋࡉࡽ࡟㸪Ruby ࡢⓎ⌧ࢆ ཧ↷ࡍࡿ࡜࡜ࡶ࡟㸪༸๭ࡢ᭷↓࡟ࡶὀ┠ࡋࡓࠋ⣽⬊㉁࡬ὀධࡉࢀࡓࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡀ ⬇ࢤࣀ࣒࡟⤌㎸ࡲࢀࡿࡓࡵ࡟ࡣ㸪᰾ෆ࡟⛣ືࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡾ㸪᰾ෆ࡬ࡢ⛣ືࡣ⣽⬊ศ ⿣࡛᰾⭷ࡀᾘኻࡋࡓ㝿࡟ྍ⬟࡜࡞ࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿ࠿ࡽ࡛࠶ࡿࠋRuby ࡢⓎ⌧࠾ࡼ ࡧ༸๭ࡢ᭷↓ࢆཧ↷ࡋ㸪Tol2 ࡟⤌㎸ࡲࢀࡓ Venus ࡢⓎ⌧ࢆほᐹࡍࡿࡇ࡜࡛㸪ὀධ᮲ ௳࡟ࡼࡿ㑇ఏᏊ⤌㎸ࡳຠ⋡ࡢ㐪࠸ࢆ᳨ドࡍࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿ࡜⪃࠼ࡓࠋ

(29)

28

௨ୖࡢࡼ࠺࡟ᮏ❶࡛ࡣ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡢయእཷ⢭⬇ࢆ⏝࠸࡚㸪Ruby mRNA ࢆὀධࡋⓎ ⌧ࢆほᐹࡍࡿࡇ࡜࠾ࡼࡧ༸๭ࡢ᭷↓ࢆほᐹࡍࡿࡇ࡜࡛Ⓨ⏕⋡ࡢࡤࡽࡘࡁࢆ⿵ṇࡋὀ ධ᮲௳ࡢẚ㍑ࡀ࡛ࡁࡿ࠿ヨࡳ㸪ࡑࡢୖ࡛ࣈࢱ⬇࡟࠾ࡅࡿ Tol2 ࡢὀධ᮲௳ࢆ᳨ウࡋࡓ

㸦ᅗ2-a㸧ࠋ

2-a. Tol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ࡜ Ruby mRNA ࢆඹὀධࡋⓎ⌧ࡍࡿࡲ࡛ࡢᶍᘧᅗ

1. Tol2 ࡜ Ruby mRNA ࢆ⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ඹὀධࡍࡿ

2. Ruby mRNA ࡣ⣽⬊㉁ෆ࡟ὀධࡉࢀࡓ┤ᚋ࡟⩻ヂࡀ㛤ጞࡉࢀࡿࠋ☜ᐇ࡟ Tol2 ࡜ Ruby mRNA ࡀὀධ

ࡉࢀ㸪⬇ࡀ⏕Ꮡࡋ࡚࠸ࢀࡤ㸪ὀධ᧯సࡢ⩣᪥࠿ࡽ Ruby ࡢⓎ⌧ࡀほᐹࡉࢀࡿࠋ 3. Tol2 ࡣ᰾ෆ࡟⛣ືࡋ㸪ࣈࢱ⬇ࢤࣀ࣒࡟⤌㎸ࡲࢀࡿࠋࡑࡢᚋ⩻ヂࡉࢀࡿࡓࡵ㸪Tol2 ࡢⓎ⌧ࡣὀධ᧯స ࠿ࡽ 2 ᪥௨㝆࡟ほᐹࡉࢀࡿࠋ ༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࡀⓎ⌧ࡋ࡚࠸ࡿ⬇ࡢ୰࡛㸪Venus ࡀⓎ⌧ࡋ࡚࠸ࡿ⬇ࡢ๭ྜࢆㄪ࡭ࡿࡇ࡜࡛㸪ࡼ ࡾṇ☜࡞㑇ఏᏊᨵኚຠ⋡ࢆㄪ࡭ࡿࡇ࡜ࡀ࡛ࡁࡿࠋ (a) (b) (c) (a) (b (b (bb (b (b (b (b (b (b (b (b (bbbb)))))))))))))))) ( (c))))))))))))))))))))) 3 1 2 Tol2 ࣉࣉࣛࢫ࣑ࢻ Ruby mRNA Tol2 mRNA ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢨ࣮ࢮ ᰾ෆ Venus mRNA ࣈࢱయእཷ⢭⬇ Venus ࢱࣥࣃࢡ㉁ Ruby ࢱࣥࣃࢡ㉁

(30)

29 2-2. ᮦᩱ࡜᪉ἲ 2-2-1. యእཷ⢭⬇ࡢస〇 ࣈࢱ⬇࡟ᑐࡍࡿ Tol2 ࡢὀධ᮲௳ࢆ᳨ウࡍࡿࡓࡵ࡟㸪࡜␆ሙ࠿ࡽᐙ␆ࣈࢱࡢ༸ᕢࢆ᥇ ྲྀࡋ㸪యእཷ⢭ࢆ⾜ࡗ࡚⬇ࢆస〇ࡋࡓࠋ༸ᕢࡣ 2015 ᖺ 4 ᭶࠿ࡽ 8 ᭶ࡢ㛫࡟ᒱ㜧ᕷ 㣗⫗⾨⏕᳨ᰝᡤ࡟࠾࠸࡚࡜ẅࡉࢀࡓ㞧✀ࣈࢱ࠿ࡽᅇ཰ࡋࡓࠋ࢟ࢵࢺ㸦ࣈࢱయእཷ⢭༸ ⏕⏘⏝ᇵ㣴᏶඲࢟ࢵࢺ㸪ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧ࢆ⏝࠸࡚㸪యእཷ⢭ ࢆ⾜ࡗࡓࠋᡭ㡰ࡣ᥇༸㸪యእᡂ⇍ᇵ㣴㸪యእཷ⢭࠿ࡽᡂࡿ㸦ᅗ 2-d㸧ࠋලయⓗ࡞ᡭ㡰 ࢆ௨ୗ࡟♧ࡍࠋ ヨ⸆࠾ࡼࡧᇵᆅ ᅇ཰ࡋࡓ༸ࢆᡂ⇍ᇵ㣴ࡍࡿࡓࡵ࡟㸪ᛶ⭢่⃭࣍ࣝࣔࣥࢫࢺࢵࢡᾮ㸪1st ࣈࢱ༸Ꮚᡂ ⇍⏝ᇶᮏᇵᆅ㸦POM㸧ࢆ௨ୗࡢࡼ࠺࡟ㄪᩚࡋࡓࠋࡲࡓ㸪యእཷ⢭࡟⏝࠸ࡿࡓࡵ࡟㸪፹ ⢭⏝⢭ᾮᕼ㔘ᾮ㸦SEM-5™㸧㸪➼ᙇࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮ㸪ࣔࢹࢼᾮࢆ௨ୗࡢࡼ࠺࡟ㄪᩚࡋࡓࠋ ϸ. ᛶ⭢่⃭࣍ࣝࣔࣥࢫࢺࢵࢡᾮ 2000 IU/ml 㤿⤧ẟᛶᛶ⭢่⃭࣍ࣝࣔࣥ㸦ື≀⏝ࢭࣟࢺࣟࣆࣥ㸪࠶ࡍ࠿〇⸆ᰴᘧ఍ ♫㸪ᮾி㸧࡜2000 IU/ml ࣄࢺ⤧ẟᛶࢦࢼࢻࢺࣟࣆࣥ㸦ື≀⏝ࣉ࣮࣋ࣟࢤࣥ㸪ࣀࣂࣝ ࢸ࢕ࢫ ࢔ࢽ࣐ࣝ࣊ࣝࢫᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ➼㔞ΰྜࡋ㸪౑⏝ࡲ࡛ 㸫30ºC ࡛ಖᏑ ࡋࡓࠋ Ϲ. 1st POM 4.95 ml ࡢ POM 㸦ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧࡟ 50 Pl ࡢ dbcAMP ⃰ ⦰ᾮ㸦100 ಸᾮ㸧㸦ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧ࢆῧຍࡋࡓࠋࡑࡇ࠿ࡽ 50 Pl ࢆ㝖ཤࡋ㸪ᛶ⭢่⃭࣍ࣝࣔࣥࢫࢺࢵࢡᾮࢆ 50 Pl ῧຍࡋࡓࠋ Ϻ. SEM-5™ 1000 ml ࡢ⢭〇Ỉ࡟ 137.50 g ࡢࢢࣝࢥ࣮ࢫ㸦D-ࢢࣝࢥ࣮ࢫ㸪࿴ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ఍

(31)

30 ♫㸪኱㜰㸧㸪34.50 g ࡢࢡ࢚ࣥ㓟ࢼࢺ࣒ࣜ࢘஧Ỉ࿴≀㸦ࡃ࠼ࢇ㓟ࢼࢺ࣒ࣜ࢘஧Ỉ࿴≀㸪 ࿴ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ఍♫㸪኱㜰㸧㸪14.50 g ࡢࢡ࢚ࣥ㓟㸦ࢡ࢚ࣥ㓟㸪࿴ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ ఍♫㸪኱㜰㸧㸪5.00 g ࡢⅣ㓟Ỉ⣲ࢼࢺ࣒ࣜ࢘㸦Ⅳ㓟Ỉ⣲ࢼࢺ࣒ࣜ࢘㸪࿴ග⣧⸆ᕤᴗ ᰴᘧ఍♫㸪኱㜰㸧㸪11.75 g ࡢ EDTA2 ࢼࢺ࣒ࣜ࢘㸦2NA(EDTA࣭2Na)㸪ᰴᘧ఍♫ ྠ ோ໬Ꮫ◊✲ᡤ㸪ୖ┈ᇛ㸧㸪28.25 g ࡢࢺࣜࢫࣄࢻࣟ࢟ࢩ࢔࣑ࣀ࣓ࢱࣥ㸦ࢺࣜࢫ㸦ࣄࢻ ࣟ࢟ࢩ࣓ࢳࣝ㸧࢔࣑ࣀ࣓ࢱࣥ㸪ࢩࢢ࣐ ࢔ࣝࢻࣜࢵࢳ ࢪࣕࣃࣥᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧㸪 0.05 g ࡢࢤࣥࢱ࣐࢖ࢩࣥ㸦ࢤࣥࢱࢩࣥὀ 10㸪MSD ᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ⁐ゎࡋ㸪SEM-5 ™ ࢆస〇ࡋࡓࠋ స〇ࡋࡓ SEM-5™ ࡣ 0.22 Pm ࣇ࢕ࣝࢱ࣮㸦࣓ࣝࢡᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧࡛ℐ㐣⁛⳦ ᚋ㸪౑⏝ࡲ࡛ 㸫30ºC ࡛ಖᏑࡋࡓࠋ ϻ. 80% ࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮ࠾ࡼࡧ 50% ࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮ  ྛࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮࡣ㸪1.6 ml ࡢࣃ࣮ࢥ࣮ࣝ㸦GE ࣊ࣝࢫࢣ࢔ ࢪࣕࣃࣥᰴᘧ఍♫㸪 ᮾி㸧࡟0.4 ml ࡢ⢭〇Ỉࢆΰྜࡍࡿࡇ࡜࡛ 80% ࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮ࡜ࡋ㸪1.0 ml ࡢࣃ࣮ ࢥ࣮ࣝ࡟ 0.4 ml ࡢ SEM-5™㸪0.6 ml ࡢ⢭〇Ỉࢆΰྜࡍࡿࡇ࡜࡛ 50% ࣃ࣮ࢥ࣮ࣝ ᾮ࡜ࡋࡓࠋ ϼ. ࣔࢹࢼᾮ 1000 ml ࡢ⢭〇Ỉ࡟ 27.5 g ࡢࢢࣝࢥ࣮ࢫ㸦D-ࢢࣝࢥ࣮ࢫ㸪࿴ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ఍♫㸪 ኱㜰㸧㸪6.9 g ࡢࢡ࢚ࣥ㓟ࢼࢺ࣒ࣜ࢘஧Ỉ࿴≀㸦ࡃ࠼ࢇ㓟ࢼࢺ࣒ࣜ࢘஧Ỉ࿴≀㸪࿴ග ⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ఍♫㸪኱㜰㸧㸪2.9 g ࡢࢡ࢚ࣥ㓟㸦ࢡ࢚ࣥ㓟㸪࿴ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ఍♫㸪 ኱㜰㸧㸪1.0 g ࡢⅣ㓟Ỉ⣲ࢼࢺ࣒ࣜ࢘㸦Ⅳ㓟Ỉ⣲ࢼࢺ࣒ࣜ࢘㸪࿴ග⣧⸆ᕤᴗᰴᘧ఍♫㸪 ኱㜰㸧㸪2.4 g ࡢ EDTA2 ࢼࢺ࣒ࣜ࢘㸦2NA(EDTA࣭2Na)㸪5.7 g ࡢࢺࣜࢫࣄࢻࣟ࢟ࢩ ࢔࣑ࣀ࣓ࢱࣥ㸦ࢺࣜࢫ㸦ࣄࢻࣟ࢟ࢩ࣓ࢳࣝ㸧࢔࣑ࣀ࣓ࢱࣥ㸪ࢩࢢ࣐ ࢔ࣝࢻࣜࢵࢳ ࢪࣕࣃࣥᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ⁐ゎࡋ㸪 ࣔࢹࢼᾮࢆస〇ࡋࡓࠋస〇ࡋࡓࣔࢹࢼᾮࡣ㸪 ౑⏝ࡲ࡛ 㸫30ºC ࡛ಖᏑࡋࡓࠋ

(32)

31 ༸Ꮚ᥇ྲྀ࣭ᡂ⇍ᇵ㣴 ࡜␆ሙ⏤᮶ࣈࢱ༸ᕢࢆᐊ ࡢ⁛⳦⏕⌮㣗ሷỈ࡛ᩘᅇὙίࡋࡓᚋ㸪࠶ࡽ࠿ࡌࡵࣈࢱ༸ Ꮚ࣭⬇ᅇ཰ᾮ㸦POE-CM㸪ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧࡛ࣜࣥࢫࡋ࡚࠾࠸ ࡓ 18 G 㔪࡜ 10 ml ࢩࣜࣥࢪࢆ⏝࠸࡚┤ᚄ 3-6 mm ࡢ༸⬊࠿ࡽ༸⬊ᾮࢆ྾ᘬ᥇ྲྀࡋ ࡓࠋ᥇ྲྀࡋࡓ༸⬊ᾮࢆࢫࣆࢵࢶ⟶࡟㞟ࡵ㸪20 ศ㛫㟼⨨ࡋୖΎࢆྲྀࡾ㝖࠸ࡓᚋ㸪ᐊ  ࡢ POE-CM ࡛ỿ´ࢆᕼ㔘ࡋࡓࠋࡇࢀࢆ࣌ࢺࣜ─࡟ศὀࡋ㸪ᐇయ㢧ᚤ㙾㸦ࣛ࢖࣐࢝࢖ ࢡࣟࢩࢫࢸ࣒ࢬ㸪ᮾி㸧ୗ࡛༸ୣ⣽⬊ࡀ 2-3 ᒙ௨ୖ௜╔ࡋࡓ༸Ꮚࢆᅇ཰ࡋࡓࠋᇵ㣴 ─㸦ࣜࣉࣟࣉ࣮ࣞࢺ㸪ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧࡟ㄪ〇ࡋ࡚࠾࠸ࡓ1st POM ࡟㸪㑅ูࡋࡓ༸Ꮚࢆ 1 ࢻࣟࢵࣉᙜࡓࡾ 15-20 ಶࡎࡘධࢀ㸪20-22 ᫬㛫㸪5.0% CO2㸪 5.0% O2㸪39.0°C㸪‵ᗘ 100% ࡛ᇵ㣴ࡋࡓࠋᇵ㣴ᚋ㸪2nd POM ࡛ 3 ᅇὙίࡋࡓᚋ㸪 22-24 ᫬㛫㸪5.0% CO2㸪5.0% O2㸪39.0°C㸪‵ᗘ 100% ࡛ᇵ㣴ࡋࡓࠋ ⢭Ꮚࡢฎ⌮࡜యእཷ⢭ἲ  1-2 ml ࡢᐙ␆ࣈࢱᾮ≧⢭ᾮ㸦᭷㝈఍♫࣓ࣥࢹࣝࢪࣕࣃࣥ㸪ᑠ∾㸧㸪⣙ 20 ml ࡢࣈࢱ ፹⢭ᾮ㸦PFM㸪ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧㸪⣙ 6 ml ࡢࣔࢹࢼᾮ㸪80% ࠾ ࡼࡧ 50% ➼ᙇࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮࢆ 38°C ࡟๓ࡶࡗ࡚ຍ ࡋࡓࠋࣔࢹࢼᾮ࡟ᾮ≧⢭ᾮࢆຍ ࠼࡚ΰ࿴ࡋ㸪ࡑࢀࢆ 50% ࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮ୰࡟ᠱ⃮ࡋࡓࠋᠱ⃮ࡋࡓ⢭ᾮࢆ 80% ࣃ࣮ࢥ ࣮ࣝᾮୖ࡟㟼࠿࡟㔜ᒙࡋ㸪700™g ࡛ 20 ศ㛫㐲ᚰศ㞳ࡋࡓࠋୖΎࢆ㝖ཤࡋࡓᚋ㸪ṧ ࡗࡓ⢭Ꮚ࡟⣙ 7 ml ࡢ PFM ࢆຍ࠼࡚㍍ࡃ㌿ಽΰ࿴ࡋ㸪500™g ࡛ 5 ศ㐲ᚰศ㞳ࡋࡓࠋ 㐲ᚰศ㞳ᚋ㸪෌ᗘୖΎࢆ㝖ཤࡋ㸪ṧࡗࡓ⢭Ꮚ࡟⣙ 7 ml ࡢ PFM ࢆຍ࠼࡚㍍ࡃ㌿ಽΰ ࿴ࡋࡓᚋ㸪500™g ࡛ 5 ศ㐲ᚰศ㞳ࡋࡓࠋ㐲ᚰศ㞳ᚋ㸪ୖΎࢆ㝖ཤࡋ㸪0.5-1 ml ࡢ PFM ࢆຍ࠼࡚ᠱ⃮ࡋ㸪⢭Ꮚᩘࢆィ ࡋࡓᚋ㸪᭱⤊ⓗ࡟⢭Ꮚࡢᩘࡀ 2-20™10ͷ/ml ࡟࡞ࡿࡼ ࠺࡟ PFM ࡛ᕼ㔘ࡋࡓࠋẼ┦ᖹ⾮ࡋ࡚࠾࠸ࡓ PFM ࡢࢻࣟࢵࣉ࡟㸪⃰ᗘㄪ〇ࡋࡓ⢭Ꮚ ᠱ⃮ᾮ 50 Pl ࢆῧຍࡋࡓࠋPFM ࡛༸Ꮚࢆ 2 ᅇὙίࡋࡓࡢࡕ㸪⢭Ꮚࢆຍ࠼ࡓࢻࣟࢵࣉ

(33)

32 ࡟ 15-20 ಶࡎࡘ༸Ꮚࢆධࢀ㸪10 ᫬㛫ᇵ㣴ࡍࡿࡇ࡜࡟ࡼࡗ࡚፹⢭ࡋࡓࠋ ⬇ࡢయእⓎ⏕ᇵ㣴  38°C ࡟ಖ ࡋࡓ POE-CM ୰࡛㸪ࣆ࣌ࢵࢸ࢕ࣥࢢ࡟ࡼࡾཷ⢭༸࿘ᅖ࡟௜╔ࡋࡓ༸ ୣ⣽⬊࡜⢭Ꮚࢆྲྀࡾ㝖ࡁ㸪༸Ꮚࢆ〄໬ࡋࡓࠋ〄໬ᚋ㸪ཷ⢭༸ࢆࣈࢱᇵ㣴⬇Ⓨ⏕⏝ᇵᆅ 㸦PZM-5㸪ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧࡛ 2 ᅇὙίࡋࡓᚋ㸪PZM-5 ࢻࣟ ࢵࣉ࡟ཷ⢭༸ࢆ 20-30 ಶࡎࡘධࢀ㸪5.0% CO2㸪5.0% O2㸪39.0°C㸪‵ᗘ 100% ࡛ 5 ᪥ 㛫ᇵ㣴ࡋࡓࠋ  〄໬ᚋ⣙ 15 ᫬㛫ࡢ᫬Ⅼ࡛㸪ᑡ࡞ࡃ࡜ࡶ 1 ࡘ௨ୖࡢᴟయࡀほᐹࡉࢀࡓ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ ࢆ㑇ఏᏊ᧯సࡢᑐ㇟࡜ࡋࡓࠋ 2-2-2. ὀධ⁐ᾮ

Tol2 ࣉࣛࢫ࣑ࢻ࡜ Tol2 mRNA

Venus ࢆᑟධࡋࡓ Tol2 ࣉࣛࢫ࣑ࢻ࡜ࡋ࡚ pTol2-CVI-neo3㸦ᅗ 2-b㸧ࢆ౑⏝ࡋࡓࠋ pTol2-CVI-neo3 ࡣ Tol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆᇶ♏࡜ࡋ㸪CAG ࣉ࣮ࣟࣔࢱ࣮ୗὶ࡟⺯ග

ࢱࣥࣃࢡ㉁࡛࠶ࡿVenus㸪IRES㸪Neo㸪SV40polyA ࢆ㓄⨨ࡋ࡚࠸ࡿࠋTol2 ITR ࡟ᣳࡲ

ࢀࡓ DNA ᩿∦ࡀ⬇ࢤࣀ࣒࡬⤌ࡳ㎸ࡲࢀ㸪㌿෗࣭⩻ヂࡉࢀࡿ࡜㯤Ⰽ⺯ගࢆⓎࡍࡿࠋTol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢨ࣮ࢮࢆࢥ࣮ࢻࡋࡓ Tol2 mRNA ࡢ㗪ᆺ࡜࡞ࡿ DNA ࣉࣛࢫ࣑ࢻ࡜ࡋ࡚ pcDNA3.1-iTol2-poly(A)83㸦ᅗ 2-c㸧ࢆ౑⏝ࡋࡓࠋpcDNA3.1-iTol2-poly(A)83 ࡣ T7 ࢆ ࣉ࣮ࣟࣔࢱ࣮࡜ࡋ࡚ᣢࡕ㸪ࡑࡢୗὶ࡟ iTol2㸪TRF2 polyA 83㸪BGH pA ࢆ㓄⨨ࡋ࡚࠸ ࡿࠋ㌿෗ࡉࢀࡿ࡜ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢨ࣮ࢮࢆࢥ࣮ࢻࡍࡿ Tol2 mRNA ࡀస〇ࡉࢀࡿࠋ

Tol2 mRNA ࡢసᡂࡣ㸪᭱ึ࡟ pcDNA3.1-iTol2-poly(A)83 ࢆไ㝈㓝⣲ Xba I㸦New England Biolabs Japan ᰴ ᘧ ఍ ♫ 㸪 ᮾ ி 㸧 ࡛ ษ ᩿ ࡋ ࡓ ࠋ ḟ ࡟ 㸪 1 ᮏ 㙐 ࡜ ࡞ ࡗ ࡓ pcDNA3.1-iTol2-poly(A)83 ࡟ ᑐ ࡋ ࡚ RNA ㄪ ᩚ ࢟ ࢵ ࢺ 㸦 CUGA3/CUGA7 in vitro

(34)

33

Transcription Kit㸪ᰴᘧ఍♫ࢽࢵ࣏ࣥࢪ࣮ࣥ㸪ᮾி㸧࡜࢟ࣕࢵࣉ࢔ࢼࣟࢢ㸦Ribo m7G Cap Analog㸪ࣉ࣓ࣟ࢞ᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ⏝࠸࡚㌿෗཯ᛂࢆ⾜ࡗࡓࠋ㌿෗⤊஢ᚋ㸪RNA ⢭ 〇࢟ࢵࢺ㸦RNeasy Mini Kit(50)㸪ᰴᘧ఍♫࢟࢔ࢤࣥ㸪ᮾி㸧ࢆ⏝࠸࡚ mRNA ࢆ⢭〇 ࡋࡓࠋ⢭〇ᚋ㸪ศගගᗘィ㸦NanoDrop 2000 c㸪ࢧ࣮ࣔࣇ࢕ࢵࢩ࣮ࣕࢧ࢖࢚ࣥࢸ࢕ࣇ࢕ ࢵ ࢡ ᰴ ᘧ ఍ ♫ 㸪 ⚄ ዉ ᕝ 㸧 ࢆ ⏝ ࠸ ࡚ ⃰ ᗘ ࢆ   ᐃ ࡋ ࡓ ࠋpTol2-CVI-neo3 ࠾ ࡼ ࡧ pcDNA3.1-iTol2-poly(A)83 ࡣᒱ㜧኱Ꮫ኱Ꮫ㝔་Ꮫ⣔◊✲⛉⏕࿨ᶵ⬟ศᏊタィศ㔝ᩍᤵ ኱ἑ໷ẎẶࡢࡈཌព࡟ࡼࡾศ୚࠸ࡓࡔ࠸ࡓࠋ

ὀධ⁐ᾮࡢస〇

ὀධ⁐ᾮࡢస〇๓࡟ RNase 㝖ཤヨ⸆㸦RNase AWAY㸪ࢧ࣮ࣔࣇ࢕ࢵࢩ࣮ࣕࢧ࢖࢚ ࣥࢸ࢕ࣇ࢕ࢵࢡᰴᘧ఍♫㸪⚄ዉᕝ㸧ࢆ⏝࠸࡚㸪ὀධ⁐ᾮࢆస〇ࡍࡿࡓࡵ࡟ᚲせ࡞ᶵჾ ࠾ࡼࡧᡭᣦࡢ RNase ࢆ㝖ཤࡋࡓࠋTris/EDTA ⁐ᾮ㸦TE Buffer㸪ࣉ࣓ࣟ࢞ᰴᘧ఍♫㸪

ᮾி㸧ࢆ⏝࠸࡚㸪pTol2-CVI-neo3 ࡜ Tol2 mRNA㸪Ruby mRNA ࡢྛࠎࡢ᭱⤊⃰ᗘࡀ 50

ng/Pl ࠾ࡼࡧ 100 ng/Pl ࡟࡞ࡿࡼ࠺࡟ㄪ〇ࡋࡓࠋ

෾⤖ಖᏑࡋ࡚࠸ࡓ Tol2 mRNA ࡜ Ruby mRNA ࢆịୖ࡟࡚⼥ゎࡉࡏࡓࠋ⼥ゎᚋ㸪 Tol2 mRNA㸪Ruby mRNA㸪TE Buffer ࢆΰྜࡋࡓࠋḟ࡟㸪ࣄ࣮ࢺࣈࣟࢵࢡࢆ⏝࠸࡚ 65°C ࡛ 5 ศ㛫ࣄ࣮ࢺࢩࣙࢵࢡࢆຍ࠼ࡓࠋ᭱ᚋ࡟㸪ᚲせ㔞ࡢ pTol2-CVI-neo3 ࢆࣄ࣮ࢺࢩࣙ ࢵࢡᚋࡢΰྜ⁐ᾮ࡟ຍ࠼㸪ὀධ⁐ᾮࢆస〇ࡋࡓࠋస〇ࡋࡓὀධ⁐ᾮࡣ㸪⬇࡬ࡢὀධ᧯ స࡟౑⏝ࡍࡿࡲ࡛㸪ịୖ࡟࡚ಖᏑࡋࡓࠋ 2-2-3. ⬇࡬ࡢὀධ᧯స ౑⏝ᶵჾ࠾ࡼࡧჾල ⬇࡬ࡢὀධ᧯స࡟ࡣ㸪㟁Ꮚ࣐࢖ࢡࣟ࢖ࣥࢪ࢙ࢡࢱ࣮㸦FemtoJet®㸪࢚ࢵ࣌ࣥࢻࣝࣇ ᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧࡜࣐࢖ࢡ࣐ࣟࢽࣆ࣮ࣗࣞࢱ㸦TransferMan®NK2㸪࢚ࢵ࣌ࣥࢻࣝࣇᰴ

(35)

34 ᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ౑⏝ࡋࡓࠋ࣐࢖ࢡ࣐ࣟࢽࣆ࣮ࣗࣞࢱ࡟ࡣ㸪ಖᣢ࢟ࣕࣆ࣮ࣛࣜ㸦VacuTip㸪 ࢚ࢵ࣌ࣥࢻࣝࣇᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧㸪࢖ࣥࢪ࢙ࢡࢩࣙࣥ⏝࢟ࣕࣆ࣮ࣛࣜ㸦Femtotipsϩ㸪 ࢚ࢵ࣌ࣥࢻࣝࣇᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ⿦╔ࡋ౑⏝ࡋࡓࠋ ὀධ᮲௳ ௨ୗࡢ 2 ࡘࡢὀධ᮲௳㸦⾲ 2-a㸧ࢆẚ㍑ࡋࡓࠋ᮲௳ 1 ࡛ࡣྛὀධ⁐ᾮ⃰ᗘࢆ 100 ng/Pl ࡜ࡋ㸪ὀධᅽࢆ 50 hPa ࡜ࡋࡓࠋ᮲௳ 2 ࡛ࡣྛὀධ⃰ᗘࢆ 50 ng/Pl ࡜ࡋ㸪ὀධ ᅽࡣ 100 hPa ࡜ࡋࡓࠋὀධ᫬㛫ࡣ 0.10 ⛊࡟ᅛᐃࡋࡓࠋ ⾲2-a. Tol2 ࢆࣈࢱయእཷ⢭⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ὀධࡍࡿ㝿ࡢ᮲௳ ὀධ᧯స ᴟయࡀ 1 ࡘ௨ୖㄆࡵࡽࢀࡓ〄໬ᚋ⣙ 16-17 ᫬㛫ᚋࡢయእཷ⢭⬇ࡢ⣽⬊㉁࡟㸪ㄪ〇 ࡋࡓ㑇ఏᏊ⁐ᾮࢆὀධࡋࡓ㸦ᅗ 2-d㸧ࠋࡲࡓ㸪ࢥࣥࢺ࣮ࣟࣝ⩌࡜ࡋ࡚㸪ྛᐇ᪋ᅇ࡟ࡘ ࡁ 10 ಶࡢ⬇ࡣ᧯సࢆຍ࠼ࡎ࡟ᇵ㣴ࡋࡓࠋ 2-2-4. ὀධ᧯సᚋ⬇ࡢయእᇵ㣴࡜ほᐹ ⬇࡬ࡢὀධ᧯సࡀ⤊஢ࡋࡓᚋ㸪⬇ࢆ 37°C ࡟ ࡵࡓࣈࢱᇵ㣴⬇Ⓨ⏕ᇵᆅ㸦PZM-5㸪 ᰴᘧ఍♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧ࢆ⏝࠸࡚ 3 ᅇὙίࡋ㸪5.0% CO2㸪5.0% O2㸪 39.0°C㸪‵ᗘ 100% ࡛ 5 ᪥㛫ᇵ㣴ࡋࡓ㸦ᅗ 2-d㸧ࠋ ὀධ᧯సࡢ⩣᪥࠿ࡽ㸪༸๭⋡㸪Ruby Ⓨ⌧⋡㸪YFP Ⓨ⌧⋡ࢆほᐹࡋࡓࠋ༸๭⋡ࡢほ ᐹࡣᐇయ㢧ᚤ㙾ࢆ⏝࠸࡚⾜࠸㸪⺯ගࢱࣥࣃࢡ㉁Ⓨ⌧ࡢほᐹࡣ㸪⺯ග㢧ᚤ㙾㸦IX73 ಽ

pTol2-CVI-neo3 Tol2 mRNA Ruby mRNA ὀධᅽ䠄hPa䠅 ὀධ᫬㛫䠄⛊䠅

᮲௳㻌1 100 100 100 50 0.1

᮲௳ 2 50 50 50 100 0.1

(36)

35

❧㢧ᚤ㙾࠾ࡼࡧU-HGLGPS ග※⿦⨨㸪࢜ࣜࣥࣃࢫᰴᘧ఍♫㸪ᮾி㸧ࢆ⏝࠸࡚⾜ࡗࡓࠋ

ࡑࢀࡒࢀࡢ๭ྜࡣ㸪ὀධࡋࡓ⬇ࡢ⥲ᩘ࡟࠾ࡅࡿྛࠎࡢ⬇ᩘࡢ๭ྜ࡜ࡋࡓࠋࡲࡓ༸๭⋡ ࡜ Ruby Ⓨ⌧⋡ࢆཧ↷ࡋࡓ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡ࡣ㸪༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ᩘ ࡟࠾ࡅࡿ YFP Ⓨ⌧⬇ᩘࡢ๭ྜ࡜ࡋࡓࠋ

2-2-5. ⤫ィゎᯒ

 ᮲௳ 1 ࡜᮲௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿ༸๭⋡㸪Ruby Ⓨ⌧⋡㸪⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡ࡣࢫࢳ࣮ࣗࢹ ࣥࢺࡢ t ᳨ᐃࢆ⏝࠸࡚ẚ㍑ࡋࡓࠋ

(37)

36 ᅗ2-b. pTol2-CVI-neo3 ࡢᵓᡂ

pTol2-CVI-neo3 ࡣ Tol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆᇶ♏࡜ࡋ㸪CAG ࣉ࣮ࣟࣔࢱ࣮ୗὶ࡟⺯ගࢱࣥࣃࢡ㉁࡛࠶ࡿ Venus㸪IRES㸪Neo㸪SV40polyA ࢆ㓄⨨ࡋ࡚࠸ࡿࠋTol2 ITR ࡟ᣳࡲࢀࡓ DNA ࣇࣛࢢ࣓ࣥࢺࡀ⬇ࢤࣀ࣒ ࡬⤌ࡳ㎸ࡲࢀ㸪㌿෗࣭⩻ヂࡉࢀࡿ࡜㯤Ⰽ⺯ගࢆⓎࡍࡿࠋ

    

ᅗ2-c. pcDNA3.1-iTol2-poly(A)83 ࡢᵓᡂ

pcDNA3.1-iTol2-poly(A)83 ࡣ T7 ࢆࣉ࣮ࣟࣔࢱ࣮࡜ࡋ࡚ᣢࡕ㸪ࡑࡢୗὶ࡟ iTol2㸪TRF2 polyA 83㸪BGH pA ࢆ㓄⨨ࡋ࡚࠸ࡿࠋ㌿෗ࡉࢀࡿ࡜ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢨ࣮ࢮࢆࢥ࣮ࢻࡍࡿ Tol2 mRNA ࡀస〇ࡉࢀࡿࠋ

(38)

37 ᅗ 2-d. ᐙ␆ࣈࢱయእཷ⢭⬇ࢆ⏝࠸ࡓᐇ㦂ࡢᴫせ యእཷ⢭ ⬇ࡢస 〇࠿ࡽ 㑇ఏ Ꮚ᧯స㸪 ᧯సᚋ ࡢ⬇ࡢ ほᐹ ࡲ࡛ࡢ୍ 㐃ࡢὶ ࢀࢆ♧ ࡍࠋ యእཷ⢭ ⬇ࡣ㸪 ᅗ࡟♧ ࡍ㏻ ࡾయእᡂ ⇍ᇵ㣴 ࢆ⾜࠸ 㸪య እᡂ⇍ᇵ 㣴㛤ጞ ࠿ࡽ⣙ 44 ᫬㛫ᚋ࡟ యእཷ ⢭ࢆ⾜ ࡗࡓ ࠋయእཷ ⢭⤊஢ ࠿ࡽ 16-17 ᫬㛫࡛⬇ ࡬ࡢ ὀධ᧯స ࢆ⾜ࡗ ࡓࠋ ὀධ᧯స ࠿ࡽ 5 ᪥㛫య እᇵ 㣴ࢆ⾜࠸ 㸪༸๭ ⋡㸪 R uby Ⓨ⌧⋡㸪 YFP Ⓨ ⌧⋡ࢆ ほ ᐹࡋࡓࠋ

(39)

38 2-3. ⤖⤖ᯝ ༸๭⋡  ༸๭⋡ࡣ᮲௳ 1 ࡛ࡣᐇ᪋ᅇẖ࡟ 46.7㸪30㸪32.8㸪26.2㸪60% ࡛࠶ࡗࡓࠋ᮲௳ 2 ࡛ ࡣᐇ᪋ᅇẖ࡟ 36.6㸪45.7㸪23.5㸪30㸪20% ࡛࠶ࡗࡓ㸦ᅗ 2-e㸪⾲ 2-b㸧ࠋ᮲௳ 1 ࡜᮲ ௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿ༸๭⋡࡟᭷ព࡞ᕪࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋ Ruby ࡢⓎ⌧࠾ࡼࡧ YFP ࡢⓎ⌧  ᮲௳ 1 ࠾ࡼࡧ 2 ࡟࠾࠸࡚㸪ὀධ᧯సࡢ⩣᪥࠿ࡽ Ruby ࡢⓎ⌧ࡣㄆࡵࡽࢀࡓࠋYFP ࡣὀධ᧯సࡢ 3 ᪥ᚋ࠿ࡽⓎ⌧ࡀㄆࡵࡽࢀࡓ㸦ᅗ 2-f㸧ࠋ࡝ࡕࡽࡢ᮲௳࡟࠾࠸࡚ࡶ Venus ࡀᑟධࡉࢀ࡚ YFP ࡢⓎ⌧ࡀㄆࡵࡽࢀࡓ⬇ࡣ㸪Ruby ࢆⓎ⌧ࡋ㸪࠿ࡘ༸๭ࢆࡋ࡚࠸ࡓࠋ Ruby Ⓨ⌧⋡  Ruby ࡢⓎ⌧⋡ࡣ᮲௳ 1 ࡛ࡣᐇ᪋ᅇẖ࡟ 53.3㸪60.0㸪55.7㸪 45.2㸪80.0% ࡛࠶ࡗࡓ 㸦⾲2-b㸧ࠋ᮲௳ 2 ࡛ࡣᐇ᪋ᅇẖ࡟ 48.5㸪25.7㸪23.5㸪62.5㸪45.0% ࡛࠶ࡗࡓ㸦⾲ 2-b㸧ࠋ ᮲௳ 1 ࡜᮲௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿ Ruby Ⓨ⌧⋡࡟᭷ព࡞ᕪࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋ ༸๭࡜ Ruby ࡢⓎ⌧  ༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡣ᮲௳ 1 ࡛ࡣ 7㸪3㸪18㸪10㸪8 ಶ࡛࠶ࡗࡓࠋὀ ධ᧯సࢆ⾜ࡗࡓ⬇ࡢ୰࡛༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ๭ྜࡣ㸪46.7㸪30.0㸪29.5㸪 23.8㸪 53.3% ࡛࠶ࡾ㸪ᖹᆒ 36.7% ࡛࠶ࡗࡓࠋࡲࡓ㸪᮲௳ 2 ࡛ࡣ 8㸪7㸪5㸪10㸪0 ಶ ࡛࠶ࡾ㸪๭ྜࡣ 24.2㸪20.0㸪14.7㸪25.0㸪0.0% ࡛࠶ࡾ㸪ᖹᆒ 16.8% ࡛࠶ࡗࡓࠋ㸦⾲ 2-b㸧ࠋὀධ᧯సࢆ⾜ࡗࡓ⬇ࡢ୰࡛༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ๭ྜࡣ㸪᮲௳ 1 ࡢ࡯࠺ࡀ᮲௳ 2 ࡼࡾࡶ᭷ព࡟㧗࠿ࡗࡓࠋ

(40)

39 ὀධ᮲௳࡜ᑟධຠ⋡ ༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ࠺ࡕ㸪YFP ࡀⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ๭ྜ࡛࠶ࡿ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡ࢆ⟬ฟࡋࡓ࡜ࡇࢁ㸪᮲௳ 1 ࡛ࡣ 57.1㸪66.7㸪33.3㸪60.0㸪87.5% ࡛࠶ࡗࡓࠋ ࡲࡓ᮲௳ 2 ࡛ࡣ 50.0㸪71.4㸪20.0㸪30.0㸪0% ࡛࠶ࡗࡓ㸦⾲ 2-b㸪ᅗ 2-g㸧ࠋ᮲௳ 1 ࡜ ᮲௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡࡟᭷ព࡞ᕪࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡ࡢᖹᆒ್ ࡣ᮲௳ 1 ࡛ 60.9%㸪᮲௳ 2 ࡛ 34.3% ࡛࠶ࡗࡓࠋ 2-4. ⪃⪃ᐹ యእཷ⢭⬇ࡣ㸪⏝࠸ࡿ༸࠾ࡼࡧ⢭Ꮚࢆࡣࡌࡵᐇ᪋ᅇẖ࡟సฟ᮲௳ࡀᗄศ␗࡞ࡾ㸪⬇ Ⓨ⏕⋡࡟ࡤࡽࡘࡁࡀ⏕ࡌࡿࠋᐇ㝿࡟ᅗ 2-e ࡟♧ࡍࡼ࠺࡟㸪ࣈࢱయእཷ⢭⬇ࡢ༸๭⋡ࡣ ᐇ᪋ᅇẖ࡟ࡤࡽࡘࡁࡀ࠶ࡗࡓࠋྛὀධ᮲௳࡟࠾ࡅࡿ㑇ఏᏊ⤌᥮࠼ࡢຠ⋡ࢆẚ㍑ࡍࡿୖ ࡛㸪๓ᥦ࡜࡞ࡿ⬇Ⓨ⏕⋡ࡀᐇ᪋ᅇẖ࡟ࡤࡽࡘࡃ࡜㸪㑇ఏᏊ⤌᥮࠼ࡢຠ⋡ࢆẚ㍑ࡍࡿࡇ ࡜ࡀᅔ㞴࡛࠶ࡿࠋࡑࡇ࡛㸪ࣈࢱయእཷ⢭⬇ࡢᐇ᪋ᅇ㛫ࡢⓎ⏕⋡ࡢࡤࡽࡘࡁࢆ⪃៖ࡋࡓ ୖ࡛᮲௳᳨ウࢆ⾜࠺ヨࡳ࡜ࡋ࡚㸪Ruby mRNA ࢆࢺ࣏ࣛࣥࢰࣥ࡜ྠ᫬࡟⣽⬊㉁࡬ὀධ ࡋࡓࠋࡑࡢ⤖ᯝ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡀ⤌㎸ࡲࢀ࡚ YFP ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡣࡍ࡭࡚ Ruby ࢆ Ⓨ⌧ࡋ࡚࠸ࡓࠋࡲࡓ㸪YFP ࡀⓎ⌧ࡋ࡚࠸ࡓ⬇ࡣࡍ࡭࡚༸๭ࡋ࡚࠸ࡓࠋࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰ ࣥࡀ⬇ࢤࣀ࣒࡬⤌ࡳ㎸ࡲࢀࡿࡓࡵ࡟ࡣ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡀ☜ᐇ࡟⬇⣽⬊㉁ෆ࡬ὀධࡉ ࢀࡿࡇ࡜㸪࠾ࡼࡧὀධ᧯స࡟ࡼࡾ⬇ࡀᦆയࢆཷࡅࡿࡇ࡜࡞ࡃ⏕Ꮡࡋ࡚࠸ࡿࡇ࡜ࡀᚲせ ࡛࠶ࡿࠋὀධࡋࡓࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ⁐ᾮࡢ㔞ࡣࡈࡃᚤ㔞࡛࠶ࡾ㸪ὀධ⁐ᾮࡣ⬇Ⓨ⏕࡬ࡢ ᙳ㡪ࢆ᭱ᑠ㝈࡟ࡍࡿࡓࡵ࡟╔Ⰽࡋ࡚࠸࡞࠸ࠋࡑࡢࡓࡵ㸪┠ど࡟ࡼࡾࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡢ ὀධࢆ☜ㄆࡍࡿࡇ࡜ࡣᅔ㞴࡛࠶ࡿࠋRuby mRNA ࡢⓎ⌧ࢆ☜ㄆࡍࡿࡇ࡜࡛㸪☜ᐇ࡟⬇ ෆ࡬ࡢὀධ᧯సࡀ⾜ࢃࢀࡓࡇ࡜㸪࠾ࡼࡧ⬇ࡀ⏕Ꮡࡋ࡚⩻ヂࢆ⾜ࡗ࡚࠸ࡿࡇ࡜ࢆ☜ㄆ࡛ ࡁࡿࠋࡉࡽ࡟㸪⣽⬊㉁࡬ὀධࡉࢀࡓࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡀ⬇ࢤࣀ࣒࡟⤌ࡳ㎸ࡲࢀࡿࡓࡵ࡟ ࡣ㸪᰾ෆ࡟⛣ືࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࡢ᰾ෆ࡬ࡢ⛣ືࡣ㸪⣽⬊ศ⿣࡛᰾⭷ ࡀᾘኻࡋࡓ㝿࡟㉳ࡇࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿ(13)ࡓࡵ㸪༸๭ࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋ௨ୖ࠿ࡽ㸪

(41)

40

Ruby mRNA ࢆࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ࡜ྠ᫬࡟ὀධࡋ㸪Ruby ࡢⓎ⌧⋡࡜༸๭⋡ࢆほᐹࡋ⿵ ṇ YFP Ⓨ⌧⋡ࢆ⟬ฟࡍࡿࡇ࡜࡛㸪యእཷ⢭ࡢᐇ᪋ᅇẖࡢⓎ⏕⋡࡟ᕥྑࡉࢀࡿࡇ࡜࡞ ࡃ㸪ὀධ᮲௳ࢆホ౯࡛ࡁࡿ࡜⪃࠼ࡽࢀࡓࠋ ࡇࡢホ౯᪉ἲࢆ⏝࠸࡚㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥ࠾ࡼࡧࢺࣛࣥࢫ࣏ࢨ࣮ࢮࡢ⃰ᗘ࡜ὀධᅽ࡟ ╔┠ࡋ㸪᮲௳ 1 ࡛ࡣྛὀධ⃰ᗘࢆ 100 ng/Pl㸪ὀධᅽࢆ 50 hPa㸪᮲௳ 2 ࡛ࡣྛὀධ ⃰ᗘࢆ 50 ng/Pl㸪ὀධᅽࡣ 100 hPa ࡜ࡋ࡚ 2 ᮲௳ࡢ YFP Ⓨ⌧⋡ࡢ㐪࠸ࢆ᳨ウࡋࡓࠋ ᮲௳ 1 ࠾ࡼࡧ᮲௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿ༸๭⋡㸪Ruby Ⓨ⌧⋡࡟᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ࡞࠿ࡗࡓ ࡀ㸪༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ๭ྜࡣ㸪᮲௳ 1 ࡢ࡯࠺ࡀ᮲௳ 2 ࡼࡾࡶ᭷ព ࡟㧗࠿ࡗࡓࠋࡇࡢ⤖ᯝ࠿ࡽ㸪᮲௳ 1 ࡢ࡯࠺ࡀ㸪⬇ࡀ⏕Ꮡࡋ࡚⩻ヂࢆ⾜ࡗ࡚࠸ࡿ๭ྜ ࡀ㧗࠸࡜⪃࠼ࡽࢀ㸪⬇࡬ࡢᝏᙳ㡪ࡀᑡ࡞࠸࡜⪃࠼ࡽࢀࡓࠋ ࡲࡓ㸪᮲௳ 1 ࠾ࡼࡧ᮲௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡࡟᭷ព࡞ᕪࡣㄆࡵࡽࢀ࡞࠿ ࡗࡓࠋ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡ࡢᖹᆒ್ࡣ᮲௳ 1 ࡛ࡣ 60.9%㸪᮲௳ 2 ࡛ 34.3% ࡛࠶ࡗࡓࠋ pyggyBac ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁ෆ࡬ὀධࡋ࡚㑇ఏᏊᨵኚࣈࢱࢆస ฟࡋࡓᐇ㦂࡛ࡣ㸪⏘ࡲࢀࡓᏊࣈࢱࡢ࠺ࡕ 40% ࡛㑇ఏᏊࡀ⤌᥮࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡓ(32)࡜࠸ ࠺ሗ࿌ࡀ࠶ࡿࠋ㑇ఏᏊᨵኚ⏘Ꮚࡢᡂ⦼ࡢࡓࡵ┤᥋ẚ㍑ࡣ࡛ࡁ࡞࠸ࡀ㸪ᐙ␆ࣈࢱయእཷ ⢭⬇ࡢ⣽⬊㉁࡬ Tol2 ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡍࡿ㐺ษ࡞᮲௳ࢆタᐃ࡛ࡁࡓ࡜࠸࠼ࡿࠋ ➨ 3 ❶࡟࠾ࡅࡿ࣐࢖ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢಶయࢆ⏝࠸࡚యෆཷ⢭⬇ࢆᅇ཰ࡋ㸪⬇࡬ᨵኚ ࢆຍ࠼࡚༸⟶࡬⛣᳜ࡍࡿࡇ࡜࡛㑇ఏᏊᨵኚಶయࢆసฟࡍࡿᐇ㦂ࡣ㸪Tol2 ࣉࣛࢫ࣑ࢻ࡜

Tol2 mRNA ࡢὀධ⃰ᗘࢆ 100 ng/Pl㸪ὀධᅽࢆ 50 hPa㸪ὀධ᫬㛫ࢆ 0.1 ⛊࡜ࡋࡓὀධ

(42)

41 ᅗ2-e. ᮲௳ 1 ࠾ࡼࡧ᮲௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿᐇ᪋ᅇẖࡢ༸๭⋡ ༸๭⋡ࡣ㸪༸๭⬇ᩘ㸭ὀධࡋࡓ⥲⬇ᩘ™100 ࡜ࡋ࡚ィ⟬ࡋࡓࠋ ༸๭⋡ࡣ㸪᮲௳ 1 ࡛ࡣᐇ᪋ᅇẖ࡟ 46.7㸪30㸪32.8㸪26.2㸪60% ࡛࠶ࡾ㸪᮲௳ 2 ࡛ࡣ 36.6㸪45.7㸪23.5㸪 30㸪20% ࡛࠶ࡗࡓࠋ᮲௳ 1 ࠾ࡼࡧ᮲௳ 2 ࡢ࡝ࡕࡽ࡟࠾࠸࡚ࡶ㸪ᐇ᪋ᅇẖ࡟༸๭⋡࡟ࡣࡤࡽࡘࡁࡀ࠶ ࡗࡓࠋ 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 ༸ ๭ ⋡ 䠄㻑䠅㻌 ᮲௳㻌1㻌 ᮲௳㻌2㻌

(43)

42

ᅗ2-f. ὀධ᮲௳ 1 ࡛ࡢ⬇Ⓨ⏕࡟࠾ࡅࡿ Ruby ࡜ YFP ࡢⓎ⌧

ࢥࣥࢺ࣮ࣟࣝ⬇࡛ࡣ Ruby ࠾ࡼࡧ YFP ࡢⓎ⌧ࡣㄆࡵࡽࢀ࡞࠿ࡗࡓࠋὀධ᧯సࢆ⾜ࡗࡓ⬇࡛ࡣ㸪ὀධ

(44)

43 ༸๭⋡㸻 ༸๭⬇ ᩘ㸭ὀ ධ ࡋ ࡓ⥲⬇ᩘ ™ 100 R uby Ⓨ⌧⋡㸻 R uby Ⓨ⌧ ⬇ᩘ㸭ὀ ධࡋࡓ ⥲⬇ᩘ ™ 100 ༸๭ࡋ R uby ࢆⓎ⌧ࡋ ࡓ⬇ ࡢ๭ྜ㸻 ༸๭ࡋ R uby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ ࡢ๭ྜ 㸭ὀධ ࡋࡓ ⥲⬇ᩘ™ 100 YFP Ⓨ⌧⋡ 㸻 YF P Ⓨ⌧⬇ ᩘ㸭ὀධ ࡋࡓ⥲ ⬇ᩘ™ 100 ⿵ṇ YFP Ⓨ ⌧⋡㸻 YFP Ⓨ ⌧⬇ᩘ㸭 ༸๭ࡋ R uby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ ᩘ™ 100 ࡜ ࡋ ࡓ ࠋ ⾲ 2-b. ྛ᮲௳࡟࠾ࡅࡿ༸๭⋡㸪 Ruby Ⓨ⌧⋡࠾ࡼࡧ YFP Ⓨ⌧⋡               12345 ᖹᆒ 12345 ᖹᆒ ὀධࡋࡓ⥲⬇ᩘ 䠄 ಶ 䠅 15 10 61 42 15 33 35 34 40 20 ༸๭⬇ᩘ 䠄 ಶ 䠅 7 3 20 11 9 12 16 8 12 4 ༸๭⋡ 䠄㻑䠅 46. 7 30. 0 32. 8 26. 2 60. 0 39. 1 36. 4 45. 7 23. 5 30. 0 20. 0 31. 1 䠮䡑 䠾 䡕 Ⓨ⌧⬇ᩘ 䠄 ಶ 䠅 8 6 34 19 12 16 9 8 25 9 㻾 㼡㼎㼥 㻌Ⓨ⌧⋡ 䠄㻑䠅 53. 3 60. 0 55. 7 45. 2 80. 0 58. 9 48. 5 25. 7 23. 5 62. 5 45. 0 41. 0 ༸๭ࡋ 㻾 㼡㼎㼥 ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ᩘ 䠄 ಶ 䠅 7 3 18 10 8 8 7 5 10 0 ༸๭ࡋ 㻾 㼡㼎㼥 ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ๭ྜ 㻔㻑㻕 46. 7 30. 0 29. 5 23. 8 53. 3 36. 7 24. 2 20. 0 14. 7 25. 0 0. 0 16. 8 㼅䠢䠬 Ⓨ⌧⬇ᩘ 䠄 ಶ 䠅 42667 4 5130 㼅㻲 㻼㻌 Ⓨ⌧⋡ 䠄㻑䠅 26. 7 20. 0 9. 8 14. 3 46. 7 23. 5 12. 1 14. 3 2. 9 7. 5 0 7. 4 ⿵ṇ 㼅㻲 㻼 Ⓨ⌧⋡ 䠄㻑䠅 57. 1 66. 7 33. 3 60. 0 87. 5 60. 9 50. 0 71. 4 20. 0 30. 0 0 34. 3 ᐇ㦂ᅇ ᮲௳ 㻌1 ᮲௳ 2

(45)

44                 

ᅗ2-g. ᮲௳ 1 ࠾ࡼࡧ᮲௳ 2 ࡟࠾ࡅࡿ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡

༸๭ࡋ㸪࠿ࡘ Ruby ࢆⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ࠺ࡕ㸪YFP ࡀⓎ⌧ࡋࡓ⬇ࡢ๭ྜ࡛࠶ࡿ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡ࡣ㸪᮲௳ 1 ࡛ࡣ 57.1㸪66.7㸪33.3㸪60.0㸪87.5% ࡛࠶ࡗࡓࠋࡲࡓ᮲௳ 2 ࡛ࡣ 50.0㸪71.4㸪20.0㸪30.0㸪0% ࡛࠶ࡗ ࡓࠋ᮲௳ 1 ࡜᮲௳ 2 ࡢ⿵ṇ YFP Ⓨ⌧⋡࡟ࡣ᭷ព࡞ᕪࡣ࡞࠿ࡗࡓࠋ 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 㼅㻲 㻼㻌Ⓨ⌧⋡䠄 㻑 䠅 㻌 ᮲௳㻌1㻌 ᮲௳ 2㻌

参照

関連したドキュメント

7.A Ogura, K Hayakawa, T Miyati, F Maeda: The effect of susceptibility of gadolinium contrast media on Diffusion-weighted imaging and the apparent Diffusion coefficient. Dose MD,

38) Comi G, et al : European/Canadian multicenter, double-blind, randomized, placebo-controlled study of the effects of glatiramer acetate on magnetic resonance imaging-measured

マーカーによる遺伝子型の矛盾については、プライマーによる特定遺伝子型の選択によって説明す

We describe a little the blow–ups of the phase portrait of the intricate point p given in Figure 5. Its first blow–up is given in Figure 6A. In it we see from the upper part of

By the algorithm in [1] for drawing framed link descriptions of branched covers of Seifert surfaces, a half circle should be drawn in each 1–handle, and then these eight half

Analogs of this theorem were proved by Roitberg for nonregular elliptic boundary- value problems and for general elliptic systems of differential equations, the mod- ified scale of

Then it follows immediately from a suitable version of “Hensel’s Lemma” [cf., e.g., the argument of [4], Lemma 2.1] that S may be obtained, as the notation suggests, as the m A

Definition An embeddable tiled surface is a tiled surface which is actually achieved as the graph of singular leaves of some embedded orientable surface with closed braid