Title 遺伝子改変マイクロミニピッグの作出法に関する研究( 本文(Fulltext) ) Author(s) 前田, 昌美 Report No.(Doctoral Degree) 博士(獣医学) 甲第484号 Issue Date 2017-03-13 Type 博士論文 Version ETD URL http://hdl.handle.net/20.500.12099/56198 ※この資料の著作権は、各資料の著者・学協会・出版社等に帰属します。
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12 ᅗ1 ᮏ◊✲࡛⪃ࡋࡓ᪉ἲ㸦ୖẁ㸧య⣽⬊᰾⛣᳜ἲ㸦ୗẁ㸧ࡢẚ㍑ యእ࡛⬇ࢆ᧯సࡍࡿᡭ㡰 ᚑ᮶ࡢయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲ㸦ୗẁ㸧࡛ࡣ㸪ࣈࢱ⏕యࡽ᥇ྲྀࡋࡓయෆᡂ⇍༸㸪ࡲࡓࡣ␆ሙࡽධ ᡭࡋࡓࣈࢱ༸ᕢࡽᅇࡋࡓᮍᡂ⇍༸ࢆయእᡂ⇍ࡉࡏࡓ༸㸪㑇ఏᏊࢆᨵኚࡋࡓయ⣽⬊᰾ࢆ⛣᳜ ࡋ㸪⼥ྜ࣭άᛶฎ⨨ࢆࡍࠋࡑࡢᚋ㸪ࡇࡢᵓ⠏⬇ࢆ㐺ᙜ࡞㛫యእᇵ㣴ᚋ㸪ཷ⬇ࣈࢱࡢ༸⟶ ࡶࡋࡃࡣᏊᐑ⛣᳜ࡍࡿࠋయ⣽⬊᰾⛣᳜ἲࡣ㸪⬇Ⓨ⏕୰࠾ࡼࡧฟ⏕┤ᚋὶṚ⏘ࡍࡿࡇࡀከࡃ㸪 㑇ఏᏊᨵኚ⏘Ꮚࢆᚓࡿ☜⋡ࡣ 1-3% ప࠸ࠋࡇࢀࡣ⛣᳜ࡋࡓయ⣽⬊᰾ࡢึᮇࡀ༑ศ࡞ࡓࡵ ㉳ࡁࡿࡢ࡛ࡣ࡞࠸⪃࠼ࡽࢀ࡚࠸ࡿࠋ ᮏ◊✲㸦ୖẁ㸧࡛ࡣ㸪㑇ఏᏊࢆᨵኚࡍࡿ᪉ἲࡋ࡚㸪౪⬇ࣈࢱࡽᅇࡋࡓయෆཷ⢭⬇ࡢ⣽⬊ ㉁ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆ┤᥋ὀධࡍࡿ᪉ἲࢆ⏝࠸ࡓࠋࡇࡢ᪉ἲࢆ⏝࠸ࢀࡤ㸪᰾ࢆึᮇࡍࡿᚲせࡣ ࡞࠸ࠋࡲࡓ㸪⬇ࡢ㑇ఏᏊᨵኚせࡍࡿ㛫ࢆ▷ࡃ࡛ࡁࡿࡓࡵ㸪ࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡋࡓ⬇ࢆ⬇ ᅇࡋࡓಶయࡢ༸⟶ᡠࡋ㸪⬇ࡢᅇ⛣᳜ࢆྠ୍ಶయ࡛⾜࠺ࡇࡀ࡛ࡁࡿࠋᮏ◊✲࡛ࡣ㸪ࡇࡢ ᪂ࡓ⪃ࡋࡓ᪉ἲࢆᐇࡋ㸪ᐇ㝿㑇ఏᏊᨵኚಶయࡀసฟྍ⬟ࢆ᳨ウࡋࡓࠋ
13 ➨ ➨ 1 ❶ MRI ࢆ⏝࠸ࡓ࣐ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࠾ࡅࡿ⬇ᅇᮇࡢ᥎ᐃ 1-1. ㅖゝ ୡ⏺࡛᭱ࡶᑠࡉ࠸࣑ࢽࣈࢱ࡛࠶ࡿ࣐ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡀ 2009 ᖺ㛤Ⓨࡉࢀ㸪 ⌧ᅾᐇ㦂ື≀ࡋ࡚㈍ࡉࢀ࡚࠸ࡿ(39)ࠋࡇࢀࡲ࡛ᐇ㦂ື≀ࡋ࡚⏝࠸ࡽࢀ࡚ࡁ ࡓࢤࢵࢳࣥࢤࣥࡸࢡࣛ࢘ࣥ࡞ࡢ࣑ࢽࣈࢱࡣ㸪6 ࣨ᭶㱋ࡢయ㔜ࡀ 20-40 kg ࡛ ࠶ࡿ(53)ࡢẚ㸪࣐ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡣ ྠ᭶㱋ࡢయ㔜ࡀ 10kg ⛬ᗘᴟࡵ ࡚ᑠࡉ࠸(22)ࠋ࣐ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢࡢయ᱁ࡣ㸪⏕≀་Ꮫ◊✲⏝࠸ࡽࢀ࡚ࡁࡓࣅ ࣮ࢢࣝ≟ྠ➼࡛࠶ࡾ(61)㸪ྲྀࡾᢅ࠸ࡀᐜ࡛᫆࠶ࡿࠋຍ࠼࡚㸪࣐ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵ ࢢࡣᐙ␆ࣈࢱẚ㍑ࡋ࡚㣫㣴㠃✚ࡣᑠࡉࡃ࡚῭ࡳ㸪㣫ᩱ㸪⎔ቃ⟶⌮㸪ᚲせ⸆ ➼ࡢࢥࢫࢺࡶᑡ࡞ࡃ࡚῭ࡴࠋ ᮏ◊✲࡛ࡣ㸪༸๓ࡢ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ࡢ⣽⬊㉁ෆࢺࣛࣥࢫ࣏ࢰࣥࢆὀධࡋ࡚㑇 ఏᏊᨵኚ⬇ࢆసᡂࡋ㸪ࡑࡢ⬇ࢆ౪⬇ࣈࢱࡢ༸⟶ᡠࡋ࡚㑇ఏᏊᨵኚ࣐ࢡ࣑ࣟ ࢽࣆࢵࢢࢆసฟࡍࡿࡇࢆィ⏬ࡋࡓࠋ1 ⣽⬊ᮇ⬇ࢆᚓࡿࡓࡵࡣ㸪༸ࡋࡓ┤ ᚋ༸⟶ࡽ⬇ࢆᅇࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࡇࡽ㸪࣐ࢡ࣑ࣟࢽࣆࢵࢢ࠾࠸࡚ ༸ࡢᮇࢆ☜ㄆࡍࡿᚲせࡀ࠶ࡿࠋᐙ␆ࣈࢱ࡛ࡣ㸪ࣄࢺࡢᡭᣦࡼࡿ┤⭠᳨ᰝ ࡸ┤⭠ࡽࡢ㉸㡢Ἴ᳨ᰝ(26)ࡼࡾ༸ᕢᏑᅾࡍࡿ༸⬊࠾ࡼࡧ㯤యࡢ☜ㄆ㸪ࡲࡓ ༸ࡢ☜ㄆ࡞ࢆ⾜࠺ࠋࡋࡋ㸪ᐙ␆ࣈࢱࡼࡾࡶయ᱁ࡀᑠࡉࡃ㸪୍⯡ⓗᡂ⇍ ಶయ㸦12 ࣨ᭶㸧࡛య㔜 100 kg ௨ୗᐃ⩏ࡉࢀ࡚࠸ࡿ࣑ࢽࣈࢱ⯡(39)࡛ࡣ┤⭠ ᳨ᰝࡸ┤⭠ࡽࡢ㉸㡢Ἴ᳨ᰝࢆ⾜࠺ࡢࡣᅔ㞴࡛࠶ࡿࠋࡇࡢࡓࡵ࣑ࢽࣈࢱ࡛ࡣ㸪 㛤⭡ୗ࠾ࡅࡿ┠ど(40)ࡸ㸪⭡⭍㙾(41)ࢆ⏝࠸࡚༸ᕢࢆほᐹࡋ㸪༸ࢆ☜ㄆࡍࡿ ᪉ἲࡀሗ࿌ࡉࢀ࡚࠸ࡿࠋࡇࢀࡽࡢ᪉ἲࡣ☜ᐇ༸ࢆ☜ㄆ࡛ࡁࡿࡀ㸪⭡⭍ෆ࡛ ࡢእ⛉ⓗ᧯సࡢᙳ㡪ࡼࡾ༸ᕢ࣭Ꮚᐑ࿘㎶⒵╔ࢆ⏕ࡌࡿࡓࡵ㸪」ᩘᅇࡢᐇ ࡣ㞴ࡋ࠸ࠋࡇࡢࡓࡵ㸪ᐇ⏝ⓗ࡞༸☜ㄆ᪉ἲࡋ࡚ࡣᗈࡲࡗ࡚ࡣ࠸࡞࠸(10)ࠋ
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17
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31 ༸Ꮚ᥇ྲྀ࣭ᡂ⇍ᇵ㣴 ␆ሙ⏤᮶ࣈࢱ༸ᕢࢆᐊ ࡢ⁛⳦⏕⌮㣗ሷỈ࡛ᩘᅇὙίࡋࡓᚋ㸪࠶ࡽࡌࡵࣈࢱ༸ Ꮚ࣭⬇ᅇᾮ㸦POE-CM㸪ᰴᘧ♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧࡛ࣜࣥࢫࡋ࡚࠾࠸ ࡓ 18 G 㔪 10 ml ࢩࣜࣥࢪࢆ⏝࠸࡚┤ᚄ 3-6 mm ࡢ༸⬊ࡽ༸⬊ᾮࢆ྾ᘬ᥇ྲྀࡋ ࡓࠋ᥇ྲྀࡋࡓ༸⬊ᾮࢆࢫࣆࢵࢶ⟶㞟ࡵ㸪20 ศ㛫㟼⨨ࡋୖΎࢆྲྀࡾ㝖࠸ࡓᚋ㸪ᐊ ࡢ POE-CM ࡛ỿ´ࢆᕼ㔘ࡋࡓࠋࡇࢀࢆ࣌ࢺࣜ─ศὀࡋ㸪ᐇయ㢧ᚤ㙾㸦࣐ࣛ࢝ ࢡࣟࢩࢫࢸ࣒ࢬ㸪ᮾி㸧ୗ࡛༸ୣ⣽⬊ࡀ 2-3 ᒙ௨ୖ╔ࡋࡓ༸Ꮚࢆᅇࡋࡓࠋᇵ㣴 ─㸦ࣜࣉࣟࣉ࣮ࣞࢺ㸪ᰴᘧ♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧ㄪ〇ࡋ࡚࠾࠸ࡓ1st POM 㸪㑅ูࡋࡓ༸Ꮚࢆ 1 ࢻࣟࢵࣉᙜࡓࡾ 15-20 ಶࡎࡘධࢀ㸪20-22 㛫㸪5.0% CO2㸪 5.0% O2㸪39.0°C㸪‵ᗘ 100% ࡛ᇵ㣴ࡋࡓࠋᇵ㣴ᚋ㸪2nd POM ࡛ 3 ᅇὙίࡋࡓᚋ㸪 22-24 㛫㸪5.0% CO2㸪5.0% O2㸪39.0°C㸪‵ᗘ 100% ࡛ᇵ㣴ࡋࡓࠋ ⢭Ꮚࡢฎ⌮యእཷ⢭ἲ 1-2 ml ࡢᐙ␆ࣈࢱᾮ≧⢭ᾮ㸦᭷㝈♫࣓ࣥࢹࣝࢪࣕࣃࣥ㸪ᑠ∾㸧㸪⣙ 20 ml ࡢࣈࢱ ፹⢭ᾮ㸦PFM㸪ᰴᘧ♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧㸪⣙ 6 ml ࡢࣔࢹࢼᾮ㸪80% ࠾ ࡼࡧ 50% ➼ᙇࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮࢆ 38°C ๓ࡶࡗ࡚ຍ ࡋࡓࠋࣔࢹࢼᾮᾮ≧⢭ᾮࢆຍ ࠼࡚ΰࡋ㸪ࡑࢀࢆ 50% ࣃ࣮ࢥ࣮ࣝᾮ୰ᠱ⃮ࡋࡓࠋᠱ⃮ࡋࡓ⢭ᾮࢆ 80% ࣃ࣮ࢥ ࣮ࣝᾮୖ㟼㔜ᒙࡋ㸪700g ࡛ 20 ศ㛫㐲ᚰศ㞳ࡋࡓࠋୖΎࢆ㝖ཤࡋࡓᚋ㸪ṧ ࡗࡓ⢭Ꮚ⣙ 7 ml ࡢ PFM ࢆຍ࠼࡚㍍ࡃ㌿ಽΰࡋ㸪500g ࡛ 5 ศ㐲ᚰศ㞳ࡋࡓࠋ 㐲ᚰศ㞳ᚋ㸪ᗘୖΎࢆ㝖ཤࡋ㸪ṧࡗࡓ⢭Ꮚ⣙ 7 ml ࡢ PFM ࢆຍ࠼࡚㍍ࡃ㌿ಽΰ ࡋࡓᚋ㸪500g ࡛ 5 ศ㐲ᚰศ㞳ࡋࡓࠋ㐲ᚰศ㞳ᚋ㸪ୖΎࢆ㝖ཤࡋ㸪0.5-1 ml ࡢ PFM ࢆຍ࠼࡚ᠱ⃮ࡋ㸪⢭Ꮚᩘࢆィ ࡋࡓᚋ㸪᭱⤊ⓗ⢭Ꮚࡢᩘࡀ 2-2010ͷ/ml ࡞ࡿࡼ ࠺ PFM ࡛ᕼ㔘ࡋࡓࠋẼ┦ᖹ⾮ࡋ࡚࠾࠸ࡓ PFM ࡢࢻࣟࢵࣉ㸪⃰ᗘㄪ〇ࡋࡓ⢭Ꮚ ᠱ⃮ᾮ 50 Pl ࢆῧຍࡋࡓࠋPFM ࡛༸Ꮚࢆ 2 ᅇὙίࡋࡓࡢࡕ㸪⢭Ꮚࢆຍ࠼ࡓࢻࣟࢵࣉ
32 15-20 ಶࡎࡘ༸Ꮚࢆධࢀ㸪10 㛫ᇵ㣴ࡍࡿࡇࡼࡗ࡚፹⢭ࡋࡓࠋ ⬇ࡢయእⓎ⏕ᇵ㣴 38°C ಖ ࡋࡓ POE-CM ୰࡛㸪ࣆ࣌ࢵࢸࣥࢢࡼࡾཷ⢭༸࿘ᅖ╔ࡋࡓ༸ ୣ⣽⬊⢭Ꮚࢆྲྀࡾ㝖ࡁ㸪༸Ꮚࢆ〄ࡋࡓࠋ〄ᚋ㸪ཷ⢭༸ࢆࣈࢱᇵ㣴⬇Ⓨ⏕⏝ᇵᆅ 㸦PZM-5㸪ᰴᘧ♫ᶵ⬟ᛶ࣌ࣉࢳࢻ◊✲ᡤ㸪ᮾ᰿㸧࡛ 2 ᅇὙίࡋࡓᚋ㸪PZM-5 ࢻࣟ ࢵࣉཷ⢭༸ࢆ 20-30 ಶࡎࡘධࢀ㸪5.0% CO2㸪5.0% O2㸪39.0°C㸪‵ᗘ 100% ࡛ 5 ᪥ 㛫ᇵ㣴ࡋࡓࠋ 〄ᚋ⣙ 15 㛫ࡢⅬ࡛㸪ᑡ࡞ࡃࡶ 1 ࡘ௨ୖࡢᴟయࡀほᐹࡉࢀࡓ 1 ⣽⬊ᮇ⬇ ࢆ㑇ఏᏊ᧯సࡢᑐ㇟ࡋࡓࠋ 2-2-2. ὀධ⁐ᾮ
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33
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35
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