■ 逆転写酵素
マウスFM3A細胞 total RNA 2 μgを鋳型として、Oligo (dT) primerとGeneAce Reverse Transcriptase、A社製品、B社製品（各社RNase H-改変型）を用い てそれぞれ逆転写反応を行った。その後合成したcDNAを鋳型にして、GeneAce SYBR
®
qPCR Mix α Low ROX (316-07693)を用いて定量PCRを行った。
0.01 0.1 1 10
0 10 20 30 40 cycle
D
elt
a
Rn
GeneAce RT
A 社 B 社
実験例 ① cDNA合成効率比較
合成した各cDNAを鋳型として定量PCRによりβ-actin（179 bp）遺伝子を 検出し、増幅の立ち上がりの早さを比較した。
■ 結果
GeneAce Reverse Transcriptaseで合成したcDNAは、増幅曲線 の立ち上がりが早く、cDNAの合成効率が高いことが示された。
実験例 ② 長鎖cDNA（10 kb）量の比較
合成した各cDNAを鋳型に、 Utrophin遺伝子（NM_011682, 12,382 bp）を 定量PCRにより検出し、cDNA量を比較した。定量PCR primerは3’末端 から約10 kb付近に設計した。
GeneAce Reverse Transcriptaseは、約10 kbpの長鎖cDNAの合成効率が 高いことが示された。
cD
N
A
(ng)
0 1 2 3 4 5 6
GeneAce RT A 社 B 社
■ 結果
■ 関連製品
￥
20,000
￥
80,000
￥
10,000
￥
40,000
￥
20,000
￥
80,000
￥
10,000
￥
40,000
製品名 Code No. 容量 希望納入価格(税別)
316-08151
312-08153
313-08161
319-08163
10,000 units
50,000 units
10,000 units
50,000 units
M-MLV Reverse Transcriptase
(RNase H+)
GeneAce Reverse Transcriptase
(RNase H-)
￥
10,000
￥
16,400
￥
10,000
￥
16,400
製品名 Code No. 容量 希望納入価格（税別）
312-07271
315-08121
400 μl
2,000 units
dNTPs Mixture(25 mM each)
RNase Inhibitor
GeneAce Reverse Transcriptase
M-MLV 由来逆転写酵素（RNase H-）
本品は、Moloney Murine Leukemia Virus由来の改変型（RNase H−） の
逆転写酵素で、大腸菌で発現・精製した組換え酵素です。改変型は点変異
によりRNase H活性を欠損しているため、完全長cDNAの合成効率が向上
します。
M-MLV Reverse Transcriptase
M-MLV 由来逆転写酵素（RNase H+）
本品は、Moloney Murine Leukemia Virus由来の野生型（RNase H+）
の逆転写酵素で、大腸菌で発現・精製した組換え酵素です。
＊1. RNase H-（改変型）は、cDNA合成後、DNA-RNA二本鎖のままなのでPCR効率が悪くなる場合があります。逆転写反応後に別途RNase Hを添加して反応した方が良い場合があります。
■ 特長一覧 （M-MLV由来逆転写酵素）
GeneAce Reverse Transcriptase
用途
・ 1st strand cDNA合成
・ RT-PCR
・ リアルタイムPCRの鋳型ｃDNA合成に最適
・ 1st strand cDNA合成
・ RT-PCR
RNase H活性
なし（RNase H-）
＊１
あり（RNase H＋）
・ 完全長cDNAの合成効率が向上
・ 熱安定性が向上し、使用可能な温度範囲が広い
・ 高温反応によりRNAの二次構造による影響を回避
cDNA合成（＜6 kb）
cDNA合成（＞6 kb）
○
○
○
-M-MLV Reverse Transcriptase
推奨反応条件
推奨鋳型量
42℃ 30～60分間
42℃ 30～60分間
Total RNA 100 ng～5 μg
Total RNA 100 ng～5 μg
■ 実験例 リアルタイムPCRによるcDNA合成効率の比較
qPCR Mixα
GeneAce
との組み合わせ
に最適
リアルタイムPCR試薬
最適化された反応バッファーと
ホットスタート酵素による新しいqPCRキット。
プレミックスタイプのリアルタイムPCR用試薬
GeneAce qPCR Mixα
ファストプロトコール対応のマスターミックス
Takyon Blue Mastermix
非特異的増幅にお困りの方、
低価格で高品質のマスターミックス。
● 化学修飾によるホットスタートで高い特異性
● 高いコストパフォーマンス ￥120/反応
● 幅広い増幅鎖長(600 bp以下)でPCR増幅効率が向上
（50 μl反応系）
（SYBR® GreenⅠ検出系）
● 青色溶液で視認性が良く、分注作業効率が向上
● アニーリング・伸長時間が20秒
● ２step PCRでのファストプロトコールに対応
本 社 〒540-8605 大阪市中央区道修町三丁目1番2号 TEL：06-6203-3741 (代表) 東京本店 〒103-0023 東京都中央区日本橋本町二丁目4番1号 TEL：03-3270-8571 (代表)
フ リ ー ダ イ ヤ ル 0120-052-099 フリーファックス 0120-052-806 〒930‐0834 富山市問屋町二丁目7番18号
TEL： 076‐451‐6548 FAX： 076‐451‐6547
URL： http://www.nippongene.com
GeneAce qPCR Mixαの注意事項
・本品は、化学修飾を施したホットスタートPCR酵素を採用しているため、酵素の活性化ステップ（95°C 10分）をPCR条件通り行わないと十分な酵素活性が得られず 増幅効率が低下します。
・本品は、リアルタイムPCR用サーマルサイクラーでのランモード「Fast」の標準プロトコル（95°C 20秒→（95°C 3秒→60°C 30秒）×サイクル）には対応しておりません。 ・本品には、dUTPは含まれていないため、Uracil-N-Glycosylaseによるキャリーオーバー防止処理はできません。
Takyon Blue Mastermixの注意事項
・本品には、dUTPは含まれていないため、Uracil-N-Glycosylaseによるキャリーオーバー防止処理はできません。
・本製品は、試薬（試験研究用）として販売しているものです。医薬品の用途には使用しないでください。
[License] SYBR® Green I
For Licensee Products sold in the Research Field:
2 step-PCRにおけるFastプロトコールで、アニーリング・伸長時間を 5, 15, 30秒の設定で増幅（115 bp）の比較を行った。
増幅曲線より、幅広いレンジで増幅のバラツキも少なく安定した増幅が得られた。また、融解曲線解析では、1本のピークが同じTm値で
得られ、高い特異性が示された。
GeneAce
qPCR Mix α
シリーズ
プレミックスタイプのリアルタイム PCR 用試薬
本品は、他社製品と同等以上に立ち上がりが早く、融解曲線解析においても高い特異性が示された。さらに、低濃度の鋳型
に対してもウェル間のばらつきを最小限に抑え、幅広いダイナミックレンジを実現している。
-0.05 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45
63 64 65 67 68 69 70 72 73 74 75 7778 79 80 82 83 84 86 87 88 89 90 91
D
e
ri
va
ti
ve
Temperature (°C)
-0.02 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14 0.16
63 64 65 67 68 69 70 72 73 74 75 77 78 79 80 82 83 84 86 87 88 89 90 91
D
e
ri
va
ti
ve
Temperature (°C) 非特異的増幅
-0.05 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35
636465676869707273747577787980828384868788899091
D
e
ri
va
ti
ve
Temperature (°C) 非特異的増幅 0.0001
0.001 0.01 0.1 1 10
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
D
e
lt
a
R
n
Cycle Number GeneAce SYBR®α
B社
GeneAceαと B 社の比較
非特異的増幅
0.0001 0.001 0.01 0.1 1 10
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40
D
e
lta
Rn
Cycle Number
GeneAce SYBR®α
A社
GeneAceαと A 社の比較
非特異的増幅 立ち上がりが早い
■ 結果
■ 特長
低価格で高品質（120 円 /50μl 反応系）
幅広いダイナミックレンジと高い定量精度を実現
様々な機器に最適化された ROX 濃度の試薬をラインアップ
ホットスタート PCR 用酵素で高特異性・高感度
Takyon Blue Mastermix
シリーズ
ファストプロトコール対応のマスターミックス
Eurogentec社が新しく開発したTakyon™(タキヨン)シリーズは、Fastプロトコールに対応しています。また、qPCRの反応系、検出系に影響を
与えないBlue Dyeが添加されており、試薬自身の視認性が向上しています。
■ 結果
■ 結果
Cycles
RFU
10 20 30 40 0
0 1000 2000 3000 4000 5000 6000 7000 8000 9000
Amplification A Melt Peak
d(RFU)/dT
Temperature, Celsius 70 80 90 60
0 200 400 600 800 1000 1200 1400
B
Takyon™ enzyme activation 3 min 95°C 40 Cycles
Denaturation 3 sec 95°C Annealing-Extension 20 sec 60°C
実験例（蛍光標識Probe検出系） : 2ステップPCR条件でのアニーリング・伸長時間の検証
アニーリング・伸長時間の設定（5, 15, 30秒）による増幅比較
増幅曲線よりアニーリング・伸長時間が60℃ 15秒でも解析可能な増幅が得られた（推奨は20秒である）。
cDNAを鋳型として、Fastプロトコールにて増幅鎖長138 bp のリアルタイムPCR を行い、増幅曲線（A）および融解曲線（B）の解析を行った。
試 薬 ：
Template ：
PCR 条件 ：
Takyon™ Blue Mastermix
for SYBR® Assay No ROX
eEF cDNA(×1/8)
95℃ 3 分
95℃ 3 秒
60℃ 30 秒
25 µｌ
n = 3
Bio-Rad CFX96
×45 サイクル
反応液量 ：
テスト数 ：
装 置 ：
実験例 （SYBR® GreenⅠ検出系）
： 特異性の検証
試 薬 ：
Template ：
PCR 条件 ：
標的遺伝子 ：
反応液量 ：
テスト数 ：
装 置 ：
GeneAce SYBR® qPCR MixαLow ROX
A 社製品
B 社製品
HeLa 細胞 total RNA 由来 cDNA
(5
-1
～ 5
-5
の 5 段階希釈 )
95℃ 10 分
95℃ 30 秒
60℃ 1 分
Human GUSB （179 bp）
25 µｌ
n=3
ABI 7500
HeLa 細胞からISOGENⅡ（Code No. 311-07361）を用いて抽出したTotal RNAからcDNAを合成し、本品の推奨PCRサイクル条件（下記）にて増幅鎖長
179 bpのリアルタイムPCRを行い、A社およびB社製品と増幅効率を比較した（A）。また、融解曲線解析より非特異的産物の有無を確認した（B）。
増幅効率の比較
融解曲線解析
GeneAceα A 社 B 社
蛍光標識Probeや
その他の実験例は
Webで公開中！
試 薬 ：
Template ：
PCR 条件 ：
Takyon™ Blue Mastermix for
Probe Assay No ROX
30 ng Human DNA(×1/8)
95℃ 3 分
95℃ 3 秒
60℃ 5, 15, 30 秒
Double Dye Probe
ミトコンドリア DNA（115 bp）
25 µｌ
n = 2
Roche LightCycler® 480
×45 サイクル
Probe ：
標的遺伝子 ：
反応液量 ：
テスト数 ：
装 置 ：
■ 特長
2 step PCR でのファストプロトコールに対応
青色の溶液で視認性が良く、分注作業効率が向上
高再現性・高感度
様々な機器に最適化された ROX 濃度の試薬をラインアップ
* ２0μl反応系での使用回数です。
High
ROX
SYBR® GreenⅠ
蛍光標識Probe
Low
ROX
SYBR® GreenⅠ
蛍光標識Probe
No
ROX
SYBR® GreenⅠ
蛍光標識Probe
\ 73,500
製品名 Code No. 包装単位 希望納入価格（税別）
検出系
TakyonTM
Blue Mastermix for SYBR® Assay ROX
TakyonTM
Blue Mastermix for Probe Assay ROX
TakyonTM
Blue Mastermix for SYBR® Assay Low ROX
TakyonTM
Blue Mastermix for Probe Assay Low ROX
TakyonTM
Blue Mastermix for SYBR® Assay No ROX
TakyonTM
Blue Mastermix for Probe Assay No ROX
対応機種： ABI Prism®7000,7300,7700,7900,StepOne®/Plus
対応機種： ABI Prism®7500, Mx4000®, Mx3000P®, 3005P®, QuantStudioTM
12K , ViiATM
7(Probe)
対応機種： LightCycler
®
96, LightCycler
®
480, RotorGene
®
2000,3000,6000,Q, Mx4000®, Mx3000P®, Mx3005P®, iCycler iQ®, My iQ,iQ
TM
5,CFX96, DNA Engine Opticon®1 and 2, Chromo 4, Mini Opticon®, Smartcycler®1 and 2, Quantica® and Swift SpectrumTM
96, LightCycler®
Nano(Probe)
319-81421
310-81451
750反応用
750反応用
316-81431
317-81461
750反応用
750反応用
313-81441
314-81471
750反応用
750反応用
\ 73,500
\ 73,500
\ 73,500
\ 73,500
\ 73,500
ROX濃度
本シリーズは、
リアルタイム PCR 用サーマルサイクラーに対応したリアルタイム PCR 用マスターミックス
（ 2× 濃度）
です。
化学的な修飾が施されたホットスタート PCR 用耐熱性ポリメラーゼ
「Hot-Start Gene NT」 と最適化されたバッファーにより、
非特異的増幅を抑制し、
高い特異性と高い感度により広範囲の鋳型濃度に対し精度の高い分析ができます。
Taq
A
B
×40 サイクル
実験例 （SYBR® GreenⅠ検出系）
： 特異性の検証
Eurogentec社 推奨プロトコール
* 50μl反応系での使用回数です。
対応機種： ABI GeneAmp®5700, ABI Prism®7000,7700,7900HT, ABI7300, StepOneTM
/StepOnePlusTM
, Mastercycler® ep realplex
対応機種： ABI7500, Mx3000P,3005,4000, QuantStudio®3,5,7
High
ROX
GeneAce SYBR
®qPCR Mix α
GeneAce Probe qPCR Mix α
SYBR® GreenⅠ
蛍光標識Probe
319-07683
313-07681
319-07823
300反応用
60反応用
300反応用
Low
ROX
SYBR® GreenⅠ
蛍光標識Probe
GeneAce SYBR
®qPCR Mix α Low ROX
GeneAce Probe qPCR Mix α Low ROX
316-07693
310-07691
315-07803
300反応用
60反応用
300反応用
No
ROX
SYBR® GreenⅠ
蛍光標識Probe
GeneAce SYBR
®qPCR Mix α No ROX
GeneAce Probe qPCR Mix α No ROX
300反応用
60反応用
300反応用 319-07703
313-07701
312-07813
\ 36,000
\ 12,000
\ 36,000
\ 36,000
\ 12,000
\ 36,000
\ 36,000
\ 12,000
\ 36,000
対応機種： LightCycler®96, LightCycler®480, RotorGene Q, 6000,2000,3000, Thermal Cycler Dice®, Smartcycler®, CFX96, iCycler iQ®,iQ5,
MyiQ®, DNA Engine Opticon®1 and 2, Chromo 4, Mini Opticon®, Quantica®
製品名 Code No. 包装単位 希望納入価格(税別)
