得られた
SRM
クロマトグラムからピーク面積及び高さを求めて検量線を作成し，試料中の 各農薬量を算出した．なお，定量法の概要を
Scheme 1
に示した．Sample 10 g (300 mL of Erlenmeyer flask)
InertSep Slim-J C18-B (500 mg)
LC-MS/MS
elute with 9 mL of acetonitrile-water (4:1) fill up to 10 mL with acetonitrile-water (4:1) centrifuge for 5 min at 5000×g
wash with 50 mL of acetone fill up to 200 mL with acetone
apply sample solution
wash with 5 mL of water-acetonitrile (3:2) (twice) prewash with each 5 mL of acetonitrile and water add 20 mL of water to 2 mL of sample solution add 30 mL of water (paddy rice: 20 mL) allow to stand for 30 min
add 120 mL of acetone (paddy rice: 100 mL) shake for 30 min
filter through No.5B under reduced pressure
Scheme1 Analytical procedure for dimethametryn, oxaziclomefone and pyributicarb in rice straw, whole-crop rice silage and paddy rice for feed
3 結果及び考察
3.1 検量線
2.2
の5)
に従って調製した各農薬混合標準液各5 µL
をLC-MS/MS
に注入し，得られたSRM
ク ロマトグラムからピーク面積及び高さを用いて検量線を作成した．得られた検量線の一例は，Fig. 2
の と お り で あ り ， オ キ サ ジ ク ロ メ ホ ン 等 は 各0.1~10 ng/mL
相 当 量 （ 注 入 量 と し て0.0005~0.05 ng
相当量）の範囲で直線性を示した．飼料用イネ中のオキサジクロメホン，ジメタメトリン及びピリブチカルブの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時定量法
47
y = 2434.6x + 143.9 R² = 0.9999
0
0 2.5 5 7.5 10
y = 2024.3x - 248.4 R² = 0.9994
0
0 2.5 5 7.5 10
y = 1608.8 x - 209.3 R² = 0.9988
0
0 2.5 5 7.5 10
y = 18170.8x + 1,395.5 R² = 0.9994
0
0 2.5 5 7.5 10
y = 13296.9x - 1364.0 R² = 0.9989
0
0 2.5 5 7.5 10
y = 10215.2 x - 93.8 R² = 0.9999
0
0 2.5 5 7.5 10
Pe ak H ei gh t
y = 2,978.7 x + 159.7 R² = 0.9999
0
0 2 4 6 8 10
y = 1,836.9 x - 44.8 R² = 0.9997
0
0 2 4 6 8 10
y = 1,502.0 x + 69.6 R² = 0.9996
0
0 2 4 6 8 10
y = 23,078.3 x + 998.0 R² = 0.9996
0
0 2 4 6 8 10
y = 13,225.3 x + 1,580.7 R² = 0.9993
0
0 2 4 6 8 10
y = 11,628.5 x + 1,151.1 R² = 0.9989
0
0 2 4 6 8 10
y = 2,978.7 x + 159.7 R² = 0.9999
0
0 2 4 6 8 10
y = 1,836.9 x - 44.8 R² = 0.9997
0
0 2 4 6 8 10
y = 1,502.0 x + 69.6 R² = 0.9996
0
0 2 4 6 8 10
y = 23,078.3 x + 998.0 R² = 0.9996
0
0 2 4 6 8 10
y = 13,225.3 x + 1,580.7 R² = 0.9993
0
0 2 4 6 8 10
y = 11,628.5 x + 1,151.1 R² = 0.9989
0
0 2 4 6 8 10
Pyributicarb/[ng/mL]
Pe ak h ei gh t
Pe ak a re a Pe ak a re a Pe ak a re a Pe ak h ei gh t Pe ak h ei gh t
Oxaziclomefone/[ng/mL]
Dimethametryn/[ng/mL] Dimethametryn/[ng/mL]
Pyributicarb/[ng/mL]
Oxaziclomefone/[ng/mL]
Fig. 2 Calibration curves of dimethametryn, oxaziclomefone and pyributicarb by peak area (left) and peak height (right)
3.2
オクタデシルシリル化シリカゲルミニカラムからの溶出画分の確認2.4
の1)により調製したカラム処理に供する試料溶液にオキサジクロメホン等として 0.1 mg/kg
相当量を添加（最終試料溶液中で
1 ng/mL
相当量）し，オクタデシルシリル化シリカゲルミニカ ラムからの溶出画分を確認した．その結果はTable 3
のとおりであり，オキサジクロメホン等は 洗浄溶媒である水－アセトニトリル（3+2
）10 mL
の画分では溶出せず，アセトニトリル－水（4+1）0~8 mLの画分で全量溶出していた．JFRL法では
10 mL
で溶出させているが，溶出液を 受ける容器が10 mL
の全量フラスコであり標線を超えるおそれがあることから，本法では，ア セトニトリル－水（4+1
）9 mL
で溶出させた後，全量フラスコの標線まで同溶媒を加えLC-MS/MS
による測定に供する試料溶液とした．Table 3 Elution patterns of dimethametryn, oxaziclomefone, and pyributicarb from InertSep Slim-J C18-B
(2:3) (4:1) (4:1) (4:1)
10 mL 0~8 mL 8~9 mL 9~10 mL
Dimethametryn 0 96.1 0 0 96.1
Oxaziclomefone 0 106 0 0 106
Pyributicarb 0 95.8 0 0 95.8
Dimethametryn 0 97.9 0 0 97.9
Oxaziclomefone 0 96.2 0 0 96.2
Pyributicarb 0 95.9 0 0 95.9
Dimethametryn 0 98.3 0 0 98.3
Oxaziclomefone 0 97.1 0 0 97.1
Pyributicarb 0 96.7 0 0 96.7
Recovery
a)(%)
Paddy rice
Total
Rice straw
Whole-crop rice silage
Acetonitrile - water Pesticides
Feed types
a) Mean (n=3)
3.3 マトリックス効果の確認
2.4
の1)
及び2)
により調製した稲わら，WCS
及び籾米のブランク試料溶液にオキサジクロメ ホン等として0.1 mg/kg
相当量（最終試料溶液中で1 ng/mL
相当量）をそれぞれ添加した各マト リックス標準液について，2.2 の5)に従って調製した同濃度の各標準液に対するピーク面積比を
確認したところ，ピーク面積比は91.4~105 %
であり，オキサジクロメホン等は試料マトリック スによる大きな影響を受けることなく測定可能であった．3.4
妨害物質の検討稲わら，WCS 及び籾米各
1
検体を試料として，本法により調製した試料溶液をLC-MS/MS
に 注入し，得られたSRM
クロマトグラムを確認したところ，いずれの試料においても定量を妨げ るピークは認められなかった．なお，当該稲わらの
SRM
クロマトグラムをFig. 3
に示した．飼料用イネ中のオキサジクロメホン，ジメタメトリン及びピリブチカルブの液体クロマトグラフタンデム型質量分析計による同時定量法
49
A B
Fig. 3 SRM chromatograms of rice straw (blank) and standard solution (Arrows indicate the retention times of pesticides.
Scales of y-axis are the same between A and B for each pesticide.)
A: Rice straw
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(Page 55-58)